持续释放人血管抑素的基因修饰化工程细胞hE/293细胞株的建立

目的:在人胚肾HEK293细胞中转染真核表达载体pSNA2/hEndostatin(hEndostatin,人血管抑素),建立能稳定分泌hES的基因工程细胞株.方法:将含有IL-2分泌肽的人endostatin(ES)全长cDNA插入真核表达载体pSNA2,产生重组质粒pSNA2/hEndostatin;利用阳离子脂质体介导将其转染入HEK293细胞中;用G418筛选出阳性克隆细胞,将其命名为hE/293细胞.用Western blot法检测hE/293细胞培养上清中分泌的hES蛋白.血管内皮细胞(ECV304)增殖抑制试验及鸡胚尿囊膜试验观察其分泌的hES蛋白的抗增殖活性.结果:经过双酶切和DNA测序证实构建出了含hES基因的真核表达载体.通过G418抗性筛选筛选出稳定表达hES的细胞株3株,将其命名为hE/293细胞;Western blot检测该细胞株培养上清中存在分子量为20 kDa的ES蛋白;ECV304增殖抑制试验显示,与HEK293细胞组相比,hE/293细胞组分泌的ES蛋白对bFGF刺激的血管内皮细胞增殖有明显的抑制作用(48h:0.125±0.007 vs 0.159±0.020,P<0.01;72 h:0.088±0.016 vs 0.249±0.070,P<0.01);鸡胚尿囊膜试验证实hE/293细胞分泌的ES蛋白可以抑制鸡胚尿囊膜血管生长.结论:所构建的hE/293细胞株可以稳定的分泌hES蛋白,并能抑制ECV304细胞生长及鸡胚尿囊膜血管生长.     

APA微囊植入小鼠体内的生物相容性和急性毒性观察

目的：了解植入型免疫隔离膜APA(海藻酸盐-多聚赖氨酸-海藻酸盐)微囊的生物相容性和急性毒性。方法：将不同剂量的APA微囊或APA微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA—BCC)植入小鼠背部皮下或腹腔内，观察移植后不同时间微囊形态的变化，并观察移植后小鼠的日常活动、进食情况和体重，以断颈法将小鼠处死，取其心、肝、脾、肺、肾、小脑、小肠和肌肉等内脏器官。结果：空微囊植入小鼠皮下或腹腔4个月后大部分保持完好；APA—BCCs植入小鼠背部皮下或腹腔2个月后大部分微囊保持完好，但移植后4个月部分微囊被包绕或破损；大剂量、超剂量植入APA微囊的情况下，小鼠的日常活动和进食情况均正常，14d时肉眼见小鼠腹腔内无明显异常，病理学检查主要器官未见异常改变。结论：APA—BCCs微囊材料对肌体无明显毒副作用，具有较好的生物相容性。     

原发性恶性脑瘤患者头发微量元素硒含量变化（摘要）

原发性恶性脑瘤患者头发微量元素硒含量变化（摘要）张灿元，段国升，薛毅珑，徐雅萍，裴晓红，鲍善芬，赵琳检测了５５例神经外科患者及正常人头发中的微量元素硒（Ｓｅ）含量，结果如下。１．方法：留取被检者枕部近发根２ｃｍ处头发５ｇ左右，加１％海鸥洗净剂于聚乙烯...     

APA微囊低温保存中降温方法的建立

目的探讨海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙(APA)微囊低温保存的降温方法。方法用静电法制作APA微囊,分别以程控降温法、冰箱梯度法或直接液氮法降温,最终将APA微囊保存于液氮中。复温后,在显微镜下观察APA微囊的破损情况,并用荧光标记的葡聚糖检测APA微囊膜通透性的变化。结果程控降温组为微囊完好率(91.2±1.57)%、皱缩率(3.1±0.81)%、破损率(5.7±2.62)%;冰箱梯度组为微囊完好率(85.3±1.42)%、皱缩率(5.2±0.74)%、破损率(9.5±3.81)%;直接冻存组为微囊完好率(14.5±1.57)%、皱缩率(84.1±3.47)%、破损率(1.4±2.62)%。冻存复温后,各组完好的APA微囊膜通透性无改变。结论程控降温法可较好地低温保存APA微囊并维持其通透特性。     

蛛网膜下植入微囊化牛肾上腺嗜铬细胞对癌痛患者脑啡肽含量及镇痛作用的影响

目的：了解海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微胶囊)植入癌痛患者脊髓蛛网膜下产生镇痛的同时对脑脊液中内源性阿片肽类物质含量的影响。方法：将APA-BCC微胶囊注射入晚期癌症并伴有中、重度疼痛患者的腰段脊髓蛛网膜下腔内；分别采取移植前、移植后6～8d的脑脊液，部分患者又采取了移植后13～17d的脑脊液；用放射免疫法检测脑脊液中亮氨酸脑啡肽(L-EK)、β-内啡肽(β-EP)、强啡肽(DynA)的含量。结果：与移植前比较，移植后患者脑脊液中OEK的含量明显升高，其中移植剂量为1．0&;#215;10^7时，升高最为显著；而移植后脑脊液中β-EP和DynA的含量无明显改变。结论：APA-BCC微胶囊植入对癌痛患者的镇痛效应可能与脑脊液中OEK的含量升高有关。     

混合型生物人工肝治疗重型肝炎的临床研究

目的 观察以血浆置换和猪肝细胞型生物人工肝构成的混合型生物人工肝对急性或亚急性重症肝炎肝功能衰竭的治疗效果并了解其安全性。方法 5例重型肝炎患者分别诊断为急性重型(ALF)3例和亚急性重型(sALF)2例,在内科治疗基础上配合混合型生物人工肝(HBL)治疗。于治疗前、治疗中、治疗后分别观察临床症状、体征、肝功能、血氨、PTA及内毒素水平变化。结果 5例患者4例乏力、腹胀明显减轻,3例伴肝性脑病患者意识状态均有好转。与治疗前比较,患者TBIL明显降低(P<0.01),PTA及CHE显著升高(P<0.05),血清内毒素水平降低(P<0.01)。治疗中未发生出血、过敏等不良反应。2例患者痊愈,1例1周后成功实施肝移植,其余2例分别存活8日和21日。结论 混合型生物人工肝可有效改善重型肝炎肝衰竭患者乏力、腹胀等临床症状及肝功能,升高PTA,降低内毒素水平。患者耐受较好,未见严重不良反应。     

分泌人内皮抑素基因工程细胞系的建立

目的建立稳定的基因工程细胞系。方法将含有白细胞介素-2（IL-2）分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pSNA2.0,产生重组质粒pSNA2.0/hEndostatin,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK293细胞中,G418筛选后得到阳性克隆hED/293,采用Western-blot检测转染细胞上清中endostatin蛋白的表达。结果hED/293细胞株培养上清中有endosta-tin蛋白的表达,分子量为20000。结论重组pSNA2.0/hEndostatin真核表达载体构建正确,转染HEK293细胞后可有效的表达人endostatin蛋白,并能分泌到细胞外。     

微动敏感床垫应用于睡眠呼吸障碍和睡眠质量监测的回顾性分析

目的通过对自诉有睡眠问题的受检者进行床垫式睡眠呼吸监测,分析受检者睡眠呼吸暂停和低血氧症等的发生率、程度及影响因素。方法采用RS-611微动敏感床垫式睡眠监测系统,对627例患者进行睡眠呼吸监测,以专用软件对呼吸暂停-低通气指数、血氧饱和度、睡眠周期、夜间周期性腿动及体重指数等进行统计分析。结果 97.9%的受检者存在睡眠障碍问题,其中阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征91.7%,低氧血症90.7%,深睡眠比例减少或觉醒时间增加的为50.3%,夜间周期性腿动为17.9%。体重指数、年龄等因素与睡眠呼吸障碍的发生率有关。结论自诉有睡眠问题的人群中存在高发的睡眠呼吸障碍和睡眠质量问题。通过对检查者进行睡眠干扰甚小的微动敏感床垫式睡眠监测系统检测,可便捷地从自然睡眠中检出睡眠呼吸障碍,判断睡眠质量。     

微囊化人血管抑素基因工程细胞对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的了解海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊化人血管抑素基因工程细胞对人脐静脉内皮细胞(Huecv304)增殖的影响。方法采用APA制备微囊包裹的表达人血管抑素(human angiostatin,hAS)的基因工程细胞(APA-hAS/293细胞微囊)或空载体转染的基因工程细胞(APA-0/293细胞微囊)。分别将上述两种细胞微囊以不同浓度与人脐静脉内皮细胞Huecv304细胞共培养,于培养0、24、48及72h时,以MTT法测定Huecv304细胞的增殖情况。结果 APA-hAS/293细胞微囊对共培养的Huecv304细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),且具有良好的量效关系。而对照组APA-0/293细胞微囊对Huecv304细胞的增殖无明显抑制作用。结论体外培养的表达人血管抑素基因的工程细胞的分泌物可以通过微囊膜并对人脐静脉内皮细胞的增殖产生显著的抑制效应。     

体外培养下可持续分泌人血管抑素和内皮抑素基因工程细胞对血管生成的抑制效应

背景:以往实验构建了可持续分泌人血管抑素和内皮抑素的基因工程细胞,即人血管抑素/293细胞和人内皮抑素293细胞,并已证明可持续分泌人血管抑素蛋白和人内皮抑素蛋白.但尚不了解其分泌物是否能发挥血管生成的抑制作用.目的:观察以基因工程技术构建的人血管抑素/293细胞和人内皮抑素,293细胞对鸡胍尿囊膜血管新生的抑制效应.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-0612007-01在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成.材料:Hek/293细胞为人胚胎肾细胞,由解放军军事医学科学院提供.人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞由课题组前期构建.SPF级鸡胚购自北京维通利华实验动物有限公司.方法:将鸡胚消毒后,置于37℃无菌恒温箱中孵育5 d,在距胚头1 cm两条卵黄静脉之间的卵壳投影部位磨切暴露尿囊膜,制成假气室,用无菌滤纸封闭窗口.制成鸡胚尿囊膜模型,备用.用灭菌蒸馏水配制体积分数为0.5%甲基纤维素溶液,制成甲基纤维素小杯.卵壳开窗后第3天,分别吸取浓缩的293细胞、人血管抑素/293细胞、人内皮抑素/293细胞培养上清液各20 μ L.或人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞培养上清液各10 μ L,加于甲基纤维素小杯中,将其置于鸡胚 尿囊膜的两条大血管之间的无血管区.主要观察指标:观察尿囊膜血管生成的变化.结果:共培养9 d时,与单纯293细胞上清液组相比,人血管抑素/293细胞上清液或人内皮抑素/293细胞上清液组,甲基纤维素小杯内及邻近区的鸡胚尿囊膜血管明显发育不良,血管分布稀疏,数量明显减少,其一级血管数量盟未明显减少,但其管径较细,而二级血管和二级以下的血管数量明显减少、管径明显变细,伸入尿囊膜边缘区的血管数量减少,管径明显变细.与人血管抑素/293细胞组或人内皮抑素/293细胞组相比,人血管抑素/293细胞+人内皮抑素/293细胞组的一级血管数量和管径未见明显变化,而其二级血管和三级以下血管数量明显减少,血管树消失.结论:人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞的分泌物对鸡胚尿囊膜的血管新生均具有明显的抑制作用,且联合用药抑制作用增强.