短串联重复序列监测异基因造血干细胞移植后的植入状态及其演变过程

目的：监测和观察异基因造血干细胞移植后的植入状态及其演变过程。方法：于2003—01／2004—12在中国造血干细胞库深圳分库采集完成人类白细胞抗原配型的6对供受者标本。采用荧光标记复合扩增短串联重复序列检测技术，对6对供受者标本移植前后的系列血样进行DSS1179，1321S11，D18S51，D5S818，D13S317，D7S820，D3S1358，vWA，FGA共9个短串联重复序列位点和Amelogenin性别位点的检测，找出供受者间的差异基因，通过移植后不同时间段患者基因型的转变情况，判断供者细胞是否植入以及嵌合体类型。结果：供受者6对样本均获得满意的9个短串联重复序列位点和1个性别位点的分型结果。6对移植标本短串联重复序列差异基因由受者型向供者型转化的时间为14～23d。6对样本间存在明显差异。第3对、第5对在第14天已为供者完全嵌合状态，而第1对在第16天、第4对在第18天尚为供受者混合嵌合体。但6对样本都是一个从混合嵌合向完全嵌合发展的良好趋势。结论：①6对移植标本短串联重复序列差异基因由受者型向供者型转化的时间为14～23d，6对样本都有从混合嵌合向完全嵌合发展的良好趋势。②采用荧光标记复合扩增短串联重复序列方法可精确地测量聚合酶链反应产物的数量，描述造血干细胞的植入程度及植入的整个演变过程。     

一个新的等位基因:HLA-A~*1114克隆和序列分析

目的　识别确认中国人群的HLA新等位基因。方法　使用PCR SSP以及以测序为基础的分型 (SBT)技术 ,在HLA分型常规工作中发现 1个与HLA A 110 2基因相关的新基因 ,以基因克隆及DNA测序 ,分析该基因和A 110 2基因序列的差异。结果　该基因和A 110 2基因序列的差异在于外显子 3区域中 ,5 2 4A >G ,5 2 6G>C以及 5 2 7C >G等 3个碱基的取代 ,使密码子 175由组氨酸变为精氨酸 ,密码子 176由丙氨酸变为精氨酸。结论该基因为HLA新等位基因 ,2 0 0 2年 9月已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA A 1114。用PCR SSP方法 ,在 30 0 0名随机造血干细胞供者中 ,未发现其他带有A 1114基因的个体。     

A3等位基因的分子遗传分析

为了研究血型血清学鉴定为A3型的4例样本，其中2例样本为一个家系，用血清学方法检定其3例为A3型，1例为A3B型。通过PCR-SSP与测序分析其Exon 6与Exon 7及部分内含子，与A101等位基因参比序列进行了比较。结果发现在2例A、型样本中单倍体分别为常见的A102等位基因与O1—2等位基因，1例A，样本中单倍体分别为常见的A102等位基因与少见的O^1V-4等位基因，1例A3B样本在A基因中发现838C→T(Leu280Phe)，此研究结果提示血清学表现为A3型的分子遗传背景存在多态性，A3B型的838C→T可能是A3低转移酶活性的分子基础。     

深圳地区妊娠期孕妇血清IgG抗体效价与产后HDN的相关性

目的探讨深圳地区1069例妊娠期孕妇血清中红细胞血型IgG类抗体特异性、效价对母婴血型不合引起的新生儿溶血病（HDN）的影响,为新生儿免疫溶血性疾病的早期诊断及预防提供依据。方法对深圳地区的1069例与丈夫红细胞血型不合的孕妇血清进行IgG类抗体筛选,对不规则抗体阳性者鉴定抗体的特异性,采用以间接抗球蛋白法定期检测相应抗体的效价。并随访高胆红素血症的新生儿,对其进行红细胞直接抗球蛋白试验、血清游离试验和红细胞放散试验等,以了解黄疸患儿中因红细胞血型IgG抗体引发HDN的构成。结果1069例样本中,IgG抗A／B效价≥64者765例,产生HDN的457例;IgG抗A／B效价〈64者236例,产生HDN的61例。ABO-HDN占总调查人数45．65％。IgG抗D、C、D＋C、M、Mur≥16者57例,产生HDN的54例;IgG抗D、C、D＋C、M、Mur〈16者11例,产生HDN的1例。非ABO-HDN占总调查人数5．14％。结论深圳地区的孕妇血清中IgG类抗体效价与新生儿溶血病密切相关,HDN发病率有明显偏高的现象。定期筛选与鉴定孕妇体内IgG类抗体可预测新生儿溶血病的发生、评估HDN的严重程度及提高HDN的治愈率。     

应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估HLA相合供者的概率

目的探讨不同类型白血病汉族患者群体找到HLA-A、B和DRB1低分辨全相合无关供者可能性。方法依据1201名急性淋巴细胞白血病(ALL)、1065名急性非淋巴细胞白血病(AML)和1432名慢性粒细胞白血病(CML)汉族患者群体HLA-A、B和DRB1低分辨分型结果,计算这3类白血病汉族患者群体的HLA-A、B和DRB1抗原频率,单体型频率和表型频率,联合应用中华骨髓库(CMDP)中健康汉族供者HLA表型频率数据,进一步推导出这3类白血病汉族患者群体找到至少1名HLA低分辨全相合供者概率及回归方程。结果ALL、AML、CML汉族患者群体表型种类数分别为416851、373903和464373种,其中31%的表型频率均>1/100万;ALL、AML、CML汉族患者群体在CMDP的汉族供者群体中找到至少1名HLA表型相同供者回归方程分别为:P=0.0824LgN-0.3667、P=0.0825LgN-0.3636和P=0.0829LgN-0.3644;计算出81.6%的ALL、81.9%的AML、82.4%的CML汉族患者要找到1名HLA低分辨表型相同的无关供者,CMDP中汉族有效供者群体数平均146.7万。结论应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估患者找到HLA相合供者概率较仅以健康供者群体HLA遗传学数据评估更为精确。为有效地提高患者的移植效果,需要征募更多的无关供者。     

中国人群人类白细胞抗原A、B和DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的鉴别

背景:人类白细胞抗原基因测序分型中,当某些等位基因间的差异碱基位于测序范围外时,无法得到清晰的等位基因结果.目的:分析中国人群人类白细胞抗原A,B,DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的分布规律,探讨其在中华骨髓库大样本人类自细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型中的解决方案.设计、时间及地点:采用随机抽样方法对研究样本进行人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型,并对其中的模棱两可等位基因进行验证性实验,于2006-01/2008-06在深圳市血液中心完成.材料:658名深圳骨髓库汉族供者乙二胺四乙酸盐抗凝血5 mL.方法:采用聚合酶链式反应-测序分型方法对658名深圳骨髓库供者的人类白细胞抗原A、B和DRB1基因进行高分辨分型,并采用针对相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物方法对其中由于碱基差异位于检测区外而产生的模棱两可等位基因进行鉴别.主要观察指标:模棱两可等位基因的分布及确认.结果:658份标本中,人类白细胞抗原A、B和DRB1三个基因座的模棱两可等位基因分别为9个(2种)、140个(5种)、406个(8种),占等位基因总数的14.06%(565/3 948).高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物鉴定结果显示,中国报道的DRB1*1401被全部确认为DRB1*1454;12例B*0705/B*0706中,有1例被确认为B*0706,其他13种等位基因的鉴定结果分别为A*6801、A*7402、B*2705、B*3501、B*4402、B*5801、DRB1*0101、DRB1*0406、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*1201、DRB1*1302和DRB1*1502.结论:在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原基因的测序分型中可以应用直接鉴别的方法区分模棱两可等位基因,但在临床移植前的高分辨确认试验中则需要采用实验方法进行精确分型.     

安徽汉族HLA-A、B、DRB1基因多态性和单倍型的分布特征

目的分析安徽汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)-A、B、DRB1基因和单倍型的分布特征。方法根据2816例安徽汉族无关骨髓供者的HLA基因型数据,分别采用方根法和最大似然性方法计算HLA-A、B、DRB1基因频率和单倍型频率,并进行群体比较。结果安徽汉族中共检出78个HLA基因,其中A*02、A*11、A*24、A*33、A*30、B*13、B*46、B60、B62、B*58、B61、DRB1*09、DRB1*15、DRB1*04、DRB1*07、DRB1*12、DRB1*08、DRB1*13、DRB1*11和DRB1*14最常见。440条A-B单倍型和481条B-DR单倍型中,A2-B46、A30-B13等26条A-B单倍型以及B13-DR7、B46-DR9等27条B-DR单倍型最常见;另外,至少80条A-B单倍型和102条B-DR单倍型呈现显著的正连锁不平衡,其中A2-B46、A30-B13、A33-B58、A33-B44、A2-B38等17条A-B单倍型以及B13-DR7、B46-DR9、B58-DR17、B44-DR13、B54-DR4、B52-DR15、B58-DR3、B57-DR7等18条B-DR单倍型表现为强连锁不平衡。3488条A-B-DR单倍型中,537条A-B-DR单倍型的频率大于等于3.55×10-4,A30-B13-DR7和A2-B46-DR9等27条单倍型频率高于0.005。结论安徽汉族人群HLA-A、B、DR基因和单倍型的分布比较接近中国北方汉族人群,但一定程度上受到南方汉族人群的影响。     

HLA PCR-SSP及SBT高分辨方法定型结果的对比研究

目的在HLA等位基因的高分辨鉴定中,对应用顺序特异性引物PCR扩增(PCR-SSP)和以测序为基础的分型技术(SBT)而出现模棱两可结果的标本进行分析,寻找出现模棱两可鉴定结果的主要原因,确保HLA高分辨配型的精确度。方法对78例UCLA(美国加利福尼亚大学洛杉矶分校)质控标本采用PCR-SSP和SBT方法进行HLA-A、B、DR位点高分辨定型,与UCLA结果相比较。结果采用PCR-SSP方法,有16例标本出现模棱两可定型结果,分布比例分别为HLA-A 7．7％,HLA-B 9．0％,HLA-DRB1 6．4％;采用SBT方法,有23例标本出现模棱两可定型结果,分布比例分别为HLA-A 7．6％,HLA-B 12．8％,HLA-DRB1 19．2％。结论HLA等位基因分型若使用单一技术,包括PCR-SSP及SBT方法,均会有相当比例的结果是模棱两可、不能确定的;若配合使用,则能大大提高定型能力和定型结果的精确度。     

应用ABO和STR基因分型技术鉴定混合血样

目的探讨应用分子生物学方法鉴别混合血液样本的价值。方法应用STR基因分型和ABO基因分型方法检测2份血样(标本1、标本2)的15个STR基因座和ABO基因型。结果标本2为A型血样,而标本1为标本2与另-B型或AB型血的混合样本。结论STR和ABO基因分型等分子生物学技术可为疑难样本的鉴定提供一种简便、快速、可靠的方法。