深圳市无偿献血影响因素的调查

目的了解本市献血的相关信息,以制定有针对性地宣传招募策略,提高固定献血者的比例。方法以无记名问卷调查表方式进行调查,内容涉及献血目的、获得献血信息的渠道、影响献血的因素和献血感受等4大类问题。发放调查表1 000份,有效答卷659份,并进行统计分析。结果 1)56.6%初次和74.0%的重复献血人群表示其献血目的为"挽救生命"和"社会责任",男女献血人群中无统计学差异(P0.05)。2)男、女性重复献血人群因"无意间看到献血站(车)"而获得献血信息的分别占64.7%和47.8%,从"新闻媒体"得知献血消息的占47.0%和35.4%,且男女性间有统计学差异(P0.05),选择"朋友推荐"的则分别占26.9%和27.5%。3)男、女重复献血人群选择"没有时间献血"的分别占68.9%和43.4%,"担心献血医用品安全"的占20.5%和25.3%,和"可能影响身体健康"的占16.3%和20.7%(P0.05)。16.9%的女性重复献血者易受到"朋友或媒体的负面宣传"的影响。4)重复献血人群献血过程中和献血后积极感受与不良感受的比例分别为36.9%和8.4%,初次献血人群分别为10.6%和2.5%,存在显著差异(P0.01),且女性高于男性。结论深圳无偿献血"挽救生命、社会责任"的宣传已经获得广泛认同,而今后的无偿献血的宣传发动的重点内容包括:应针对性地在人流大的闹市区域增加献血点,延长时间;继续加强"献血安全、无碍健康"的宣传;和发挥献血志愿者自身的宣传作用,带动亲朋好友参加献血,不断扩大献血人群队伍,提高献血者中固定献血者(含骨髓志愿者)的比例。     

混合脐血成人移植定量监测植入状态的实验研究

为了定量监测和研究双份异基因脐血用于成人白血病患者移植后两份脐血的植入状态、嵌合体类型、供者细胞相对数量的动态变化及演变规律 ,采用荧光标记复合扩增短串联重复 (STR)位点嵌合体定量检测技术 ,对 1例急性髓细胞白血病成人患者移植两份 (脐血 1有核细胞数为 2 .5× 10 7/kg ,脐血 2有核细胞数为 1.5 3× 10 7/kg)HLA各 1个位点不相合的异基因脐血前后的序列血样进行 9个STR位点的检测 ;利用供、受者之间的差异位点定性判断脐血是否植入以及嵌合体类型 ;而后根据 377XLDNA测序仪上荧光扫描后两供者差异基因检出峰的峰面积计算脐血植入后患者体内两份脐血的细胞相对数量 ,定量分析供体细胞植入程度及演变规律 ;并与采用HLA差异基因对植入状态的分析结果进行对比。结果表明 :移植后 15天两份脐血同时植入 ,植入状态为完全双份供者嵌合体 ,患者体内脐血 1的相对细胞数量占 5 1.3% ,脐血 2占 4 8.7% ;30天时脐血 1嵌合体细胞上升为 70 .0 % ,脐血2嵌合体细胞下降为 30 .0 %。 5 2天时只检测到脐血 1的基因 ,植入状态转为完全单份供者嵌合体 ,有核细胞数少的一份脐血被排斥 ,有核细胞数多的一份长期植入。结论 :荧光标记复合扩增STR嵌合体定量检测可精确地描述两份脐血的植入程度及变化过程 ,为临床脐     

2 210例江西籍汉族骨髓供者的HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型频率

目的分析江西汉族骨髓供者人类白细胞抗原(HLA)-A、B、DRB1等位基因频率和HLA单倍型频率。方法根据2210例江西汉族无关骨髓供者的HLA基因型数据,采用最大似然性方法计算HLA-A、B、DRB1的基因频率和单倍型频率。结果江西汉族骨髓供者中共观察到72个HLA等位基因,其中A*02、A*11、A*24、A*33、B60、B*46、B*13、B*58、B*51、B75、B62、DRB1*09、DRB1*12、DRB1*15、DRB1*04、DRB1*08、DRB1*11、DRB1*14和DRB1*13的频率高于0.05。358条A-B单倍型中,A2-B46、A11-B60、A33-B58等26条单倍型的频率高于0.01,68条单倍型表现为显著的正连锁不平衡;420条B-DR单倍型中,B46-DR9、B13-DR15、B75-DR12等22条单倍型频率高于0.01,82条单倍型表现为显著的正连锁不平衡;2518条A-B-DR单倍型中,386条单倍型有意义(频率大于等于4.52×10-4),A2-B46-DR9、A2-B46-DR8、A11-B13-DR15、A33-B58-DR13、A33-B58-DR17、A30-B13-DR7等39条单倍型频率高于0.005。结论江西汉族HLA-A、B、DRB1等位基因和HLA单倍型的分布特征接近南方汉族人群,但又有其自身特殊性,本研究群体的HLA等位基因频率和单倍型频率可作为江西汉族人群的参考标准。     

HLA新基因B"非汉字符号"610携带者家系B淋巴细胞系的建立

目的　建立HLA新基因B 5 6 10携带者家系的B淋巴细胞系 ,用于该基因的研究和确证。方法　采集外周血分离淋巴细胞 ,用EBV感染淋巴细胞后 ,加入含 2 0 %FBS、2 μg/mlCsA的RPMI16 4 0进行培养。 结果　 5位家庭成员的无限增殖化B淋巴细胞系新基因稳定遗传。结论　建立的无限增殖化B淋巴细胞系的HLA新基因B 5 6 10遗传稳定 ,为大量保存和繁殖珍贵的生物医学材料奠定了基础。     

Y染色体特异STR位点应用于无创伤性产前胎儿遗传信息的研究

目的 建立利用孕妇血清进行无创伤性产前胎儿分子遗传信息分析的方法。方法 采集53名11～36孕周的孕妇的血清,利用血清中胎儿DNA,采用”Y-PLEX 6”试剂盒,复合扩增DYS393、DYS19、DYS389 Ⅱ、DYS390、DYS391和DYS385等6个Y-STR位点,PCR产物经基因测序仪电泳检测,用相关软件分析Y-STR基因型。结果 ①29名分娩出生证实为男婴的孕妇,均检测出特异性Y-STR等位基因。检测的6个Y-STR位点,以DYS393位点的检出率最高(29/29);其次是DYS19位点,检出率为62.07％(18/29);再次是DYS390位点,检出率为34.48％(10/29);其余的DYS389 Ⅱ、DYS391和DYS385位点的检出率则较低。②24名分娩出生证实为女婴的孕妇,均未检测出特异性Y-STR等位基因。③根据DYS393位点是否检测出特异性等位基因,以及该基因波峰的高度和波峰面积值,鉴定胎儿性别的准确率达100％。④29名妊娠男婴的孕妇的血清样本,检测出的Y-STR等位基因与“丈夫”的相一致。结论 本研究建立的无创伤性Y-STR分子遗传分析方法,具有多态性丰富、灵敏度高、特异性强等特点,提高了无创伤性产前胎儿性别遗传鉴定的准确性,同时为解决妊娠男婴的亲子鉴定提供了理论依据,具有广泛的应用前景。     

中国北方汉族急性白血病和慢性粒细胞白血病患者HLA等位基因及单倍型研究

目的 研究中国北方汉族急性白血病(AL)和慢性粒细胞白血病(CML)患者人群中人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型的分布差异.方法 根据1 270例中国北方汉族AL病患者和803例中国北方汉族CML患者的HLA-A、B、DRB1表型数据,采用最大似然性方法分别计算两个群体的HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型频率,并采用(2检验方法比较其分布差异.结果 两个患者群体中,A位点的A*02、A*03、A*24,B位点的B*37、B*38、B*44、B*45、B*46、B*50、B*51、B*52、B*54、B*60、B*65,DR位点的DRB1*03、DRB1*09、DRB1*10、DRB1*15等位基因的分布有统计学差异.在两个患者群体中有326条A-B单倍型,357条B-DRB1单倍型,1 278条A-B-DRB1单倍型为共有单倍型,其中7.1%(23/326)A-B单倍型,6.2%(22/357)B-DRB1单倍型,4.0%(51/1278)条A-B-DRB1单倍型有统计学差异(x2>3.84,P<0.05).结论 中国北方汉族AL和CML两个患者群体的HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型均具有高度遗传多态性,并有其自身遗传特征.     

短串联重复序列检测在异基因造血干细胞移植植入状态中的应用

背景:移植后造血干细胞植活的判断主要依赖于体内各种遗传标记,其在敏感性和有效性方面各不相同,故亟待建立一种鉴别力强、敏感性高、不受性别限制的检测方法。目的:观察异基因造血干细胞移植供受者移植前及受者移植后不同时间段的血样DNA短串联重复序列遗传位点检测情况。设计:观察测量实验。单位:深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传重点实验室。对象:选择2004-02/2005-12在深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传实验室配型成功并进行造血干细胞移植的18对供受者血样,18例患者中,男10例,女8例,平均35岁。接受血缘关系供者移植6例,无关供者移植12例。所有受试对象均对检测项目知情同意。方法:采用荧光标记复合扩增短串联重复序列(STR)检测技术,对18例进行造血干细胞移植的血液病患者移植后的系列血样及移植前供、受者的血样进行15个STR位点和1个性别位点的检测,找出供受者间的差异基因,观察移植后供者的STR基因在受者体内的植入情况及变化过程,找出最早检测到供者STR基因的时间及完全嵌合体最早出现的时间。主要观察指标:①观察移植前供受者差异基因。②供者STR基因及完全嵌合体最早出现时间。结果:供受者18对均进入结果分析。①供受者中能区分出彼此差别的平均STR差异位点数为12.4(8～15)个。②患者移植后最早可检测到供者STR基因的平均时间为8(5～14)d,由受者型向完全供者型转化的平均时间为14(9～23)d。植入状态由供受者嵌合型转为完全供者嵌合型。结论:荧光标记复合扩增STR检测方法可精确地描述异基因造血干细胞移植植入状态及其演变过程,可为临床提供一个准确、可靠的实验依据。     

1名RhD弱表现型个体携带D~(el)等位基因

目的　探讨 1名RhD弱表现型个体的RH基因型及RHD基因的分子机制。方法　采用常规血清学方法检测RhD、C、c、E和e抗原表型 ,间接抗球蛋白试验确认D抗原 ,用序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)测定RHD/RHCE基因 ,然后分析RHD编码区全长序列 ,并用PCR检测RhD杂合型。结果　血清学结果显示该个例为D抗原弱表现型 ,Rh因子为D +C +c +E e +,PCR SSP检测RHD/RHCE基因与之相符 ;RHD编码区序列析发现第 9外显子存在 1 2 2 7G→A碱基突变 ,其余外显子序列则与正常RHD基因一致 ,表明该个体携带RHD1 2 2 7A等位基因。RhD合子型鉴定结果为RHD +/RHD -杂合型 ,拟定RHCE和RHD为cis遗传 ,提示该个体基因型为CDe/cde。结论　该RhD弱表现型个体携带RHD 1 2 2 7A等位基因 ,而这一等位基因是Del表型的主要等位基因 ,提示该等位基因在不同个体RhD分子的表达效率不同     

深圳汉族人群HLA-Cw，-DQB1基因座等位基因的多态性

背景：HLA复合体是极其复杂的遗传系统，对其多态性的研究在法医学个体识别和亲权鉴定、群体遗传学、移植免疫、疾病相关等医学领域有重要的应用价值。 目的：了解HLA-Cw，-DQB1基因座的等位基因在深圳汉族人群中的分布规律。 设计、时间及地点：样本基因型的统计学分析，于2007-01/2008-06深圳市血液中心免疫遗传研究室完成。 材料：样本来自中国造血干细胞捐献者资料库深圳地区志愿捐献者，使用EDTA-K2抗凝管采集外周血。 方法：采用聚合酶链式反应-序列测定方法对深圳地区226名无关供者HLA-Cw，-DQB1基因座的2，3外显子进行序列测定与分析。等位基因频率采用直接计数法计算，Hardy-Weinberg平衡检验采用x2检验。 主要观察指标：样本HLA-Cw，-DQB1基因座的基因型。 结果：226个样本中共检测到25个Cw等位基因。其中Cw*0102，Cw*0702的频率最高（0.1881），其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304，Cw*0302，Cw*0401及Cw*0801，Cw*0303，Cw*0602。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律（x2=116.00，u=1.78, ν=91，P > 0.05）。226个样本中共检测到17个DQB1等位基因。其中DQB1*0301占绝对优势，其基因频率为0.2124。其他频率较高的等位基因依次为DQB1*0303，DQB1*0601，DQB1*0502，DQB1*0602，DQB1*0302，DQB1*0401。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律（x2=101.34，u=0.78,ν=91，P > 0.05）。经计算HLA-Cw位点的杂合度为0.887 8，个体识别力为0.976 9，非父排除率为0.773 1，多态性信息含量为0.875 7；HLA-DQB1位点的杂合度为0.889 4，个体识别力为0.976 2，非父排除率为0.753 3，多态性信息含量为0.965 9。 结论：深圳汉族人群HLA-Cw及DQB1基因座是高度杂合、具有较高鉴别力和丰富信息含量的遗传标记，能较好地反映群体遗传特征。     

中国人群HLA-DRB1*1454等位基因和HLA-DRB1第3外显子鉴定意义

目的：在中国人群中鉴定人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）DRB1*1454等位基因,分析供受者HLA-DRB1第3外显子DNA序列信息对器官移植、细胞移植及人类遗传学研究的重要现实意义。 方法：应用聚合酶链反应-直接测序分型方法对58例等待造血干细胞移植供受者进行人类白细胞抗原测序分型,1 268例广东地区随机健康供者采用聚合酶链式反应-序列特异寡核苷酸探针反向杂交法进行HLA-DRB1中高分辨基因分型,部分模棱两可结果采用聚合酶链式反应-序列特异引物PCR-SSPHLA-DRB*14高分辨方法分型法。 结果：在1 268例广东地区随机健康人群中检出HLA-DRB1*1403,1406,1410,1412,1418,1425和1454等位基因,HLA-DRB*1401/1434/1454等位基因模棱两可结果的8例样本被确认为HLA-DRB1*1454等位基因,DRB1*1454等位基因可能是广东人群最为常见的HLA-DRB1*14基因。中国人群HLA-DRB1*14第3外显子存在多态性。 结论：中国人群HLA-DRB1*1454等位基因确认了DRB1等位基因第3外显子多态性的存在,进一步明确了开展中国汉族人群及少数民族HLA-DRB1第3外显子检测的意义。