中国南北方汉族急性淋巴细胞白血病患者HLA基因分型特征

目的 研究中国南北方汉族急性淋巴细胞白血病(ALL)患者人群中人类白细胞抗原(HLA)-A,B,DRB1等位基因的分布特征.方法 根据11个南方省区556名南方汉族和18个北方省区644名北方汉族ALL患者的HLA-A,B,DRB1表型数据,采用最大似然性方法分别计算两个群体的HLA-A,B,DRB1等位基因和单倍型频率并采用卡方检验方法比较其分布特征.结果 南北方汉族ALL患者群体中,A*02,A*11,A*24,A*33,B*13,B*46,B*51,B*60,B*62,DRB1*04,DRB1*08,DRB1*09,DRB1*11,DRB1*12,DRB1*14和DRB1*15均比较常见,另外B*58,B*62和B*75仅在南方群体中较高,而A*30,B*35,B*61和DRB1*07则仅常见于北方患者,7个A,12个B和5个DRB1等位基因的分布存在显著性差异.结论 中国南北方汉族ALL患者人群HLA-A,B,DRB1等位基因的分布有其自身特征,此研究数据可作为ALL患者群体的HLA相关研究和应用的参考数据.     

应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中,当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时,无法得到清晰的结果。 目的：通过完整外显子2/3序列的测定,解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。 方法：初次分型采用常规的测序方法检测320份样本的HLA-DRB1外显子2第一高变区以外的序列,测序反应设置codon86。后期采用一次性扩增外显子2/3,测序反应针对外显子2设置组特异性引物：DRB1*04/07/09为一组,其它基因家族为一组,设置conden86,对初次分型后为歧义结果的样本重新分型。 结果与结论：初次分型有180份样本为歧义结果,占总样本数的56.25 %。其中A类为差异碱基位于测序范围之外,共114例;B类为等位基因对的杂合序列相同,共17例;C类为两种情况同时存在,有49例。3种类别的歧义等位基因数分别为119个、34个、98个,占等位基因总数的33.06%、9.44 %、27.22%。完整外显子2/3序列的测定使歧义结果比例从56.25%下降到14.37%,其中A类103例、B类8例、C类23例样本的等位基因得到确认。此次研究中发现了一个新等位基因,与跟它最相近的等位基因DRB1*110101相比,其外显子3的第381位碱基G>T,导致第98位氨基酸AAG(赖氨酸 Lys)>AAT(天冬酰氨 Asn)。序列已提交Genbank,编号HM807583,2010-08被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-DRB1*1197(编号HWS10010999)。提示,完整外显子2/3序列的测定能大幅降低歧义分型结果的比例。     

基因组序列分析HLA新等位基因B*3818内含子和外显子同时突变

目的 分析HLA新等位基因B*3818的基因组序列.方法 克隆测序方法 对PCRSBT中发现的1个未知HLA-B等位基因的基因组序列进行双向全长测序,并采用微量淋巴细胞毒方法 鉴定该等位基因编码分子的抗原特异性,通过群体调查和家系分析了解该等位基因的群体分布频率和单倍型组成情况.结果 新等位基因HLA-B*3818(序列注册号为FJ561482)与B*380201在第4外显子和第5内含子同时存在1个核苷酸的差异.第4外显子的第660位碱基由C变为A,导致第196个密码子由GAC变为GAA,相应氨基酸由天门冬氨酸变为谷氨酸,与IMGT/HLA中的HLA-B等位基因的序列进行对比,该突变为新的单核苷酸多态性位点.第5内含子的第2133位碱基由A变为C,除此之外,B*3818的内含子序列与B*380101、B*380201和B*3814相同.该新HLA等位基因的血清学特异性为B38,其在中国汉族人群中的分布频率小于0.000 5,家系调查结果 表明携带该新等位基因的单倍型为A*030101-CW*010201-B*3818-DRB1-1312-DQB1*060101.结论 新等位基因HLA-B*3818的内含子和外显子同时存在变异,研究新等位基因的基因组序列可为HLA基因相关研究和应用提供更多的序列信息.     

Penta D、 Penta E和SE33位点基因分型在二联体亲子鉴定中的应用

摘要：目的 研究增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座的检测后,对二联体亲子鉴定RCP值的影响。 方法 对二联体亲子鉴定案例除了进行ABI公司提供的AmpFISTR IdentifilerTM试剂盒中的15个STR位点检测以外,增加美国Promega公司的Penta D、 Penta E和SE33试剂盒复合扩增STR位点的检测,并计算增加检测位点前后的亲子关系指数（PI）和亲子关系相对机会（RCP）。 结果 135例二联体亲子鉴定案件中有109例常染色体RCP值大于99.99%,频率为80.74%。26例RCP值小于99.99%,频率为19.26%。增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座检测后有83.33%的家系由原来的RCP值小于99.99%转变为RCP值大于99.99%。 结论 增加遗传标记物的检测可以有效的提高二联体亲子鉴定的RCP值,从而提高鉴定的准确性。     

地中海贫血患者找到人类白细胞抗原A-B-DR单倍型及抗原全相合供者的可能性

背景：选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键，不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。目的：分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A—B—DRB1单倍型和表型频率分布格局，估算其与骨髓库相合供者相配的概率。设计：病例一对照分析。对象：患者组为2000-06／2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者，广东籍，彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08／2006-12中华骨髓库招募的5352名广东籍健康供者，与患者无血缘关系。方法：应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A，B，DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征，某一个体人类白细胞抗原A，B，DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型仝相同供者的概率P，应用公式P=1-（1-Df）^n计算，Df为供者表型频率。结果：患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33．B58-DR17，A11-B75-DR12，A11-B13-DR15和A33-B47-DR13：患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33-B58-DR17，A2．B46-DR14，A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2，33；B46，581DR9，17，A2，11；B46，751DR9，12，A11，33；B58，75；DR12，17，A2．2；B46，46；DR9，9和A2，11；B13，46：DR9，15；患者组常见的表型为A2，33；B46，58；DR9，17，A2，2；B46，46；DR9，9，A2，2：B46．46：DR9，14，A2，11；1346，60；DR9、12和A2，11；B46，75；DR9，15。两组之间相匹配的表型有19种，表型匹配概率为0．44％（19／4282）。人类白细胞抗原A24-B51-DR8，A3-B38-DR7，A24-B50-DR12，A3-B38-DR4，A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2．33：B46，58；DR9，17，A2，2：B46，46：DR9，9和A2，11；B46，75；DR9，15等67种表型，其频率在正常对照组有不同程度的降低，携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。结论：地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B—DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性，患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。     

中国人群人类白细胞抗原A、B和DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的鉴别

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中，当某些等位基因间的差异碱基位于测序范围外时，无法得到清晰的等位基因结果。 目的：分析中国人群人类白细胞抗原A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的分布规律，探讨其在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原 A、B、DRB1基因的测序分型中的解决方案。 设计、时间及地点：采用随机抽样方法对研究样本进行人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型，并对其中的模棱两可等位基因进行验证性实验，于2006-01/2008-06在深圳市血液中心完成。 材料：658名深圳骨髓库汉族供者乙二胺四乙酸盐抗凝血5 mL。 方法：采用聚合酶链式反应--测序分型方法对658名深圳骨髓库供者的人类白细胞抗原A、B和DRB1基因进行高分辨分型，并采用针对相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物方法对其中由于碱基差异位于检测区外而产生的模棱两可等位基因进行鉴别。 主要观察指标：模棱两可等位基因的分布及确认。 结果：658份标本中，人类白细胞抗原A、B和DRB1三个基因座的模棱两可等位基因分别为9个(2种)、140个(5种)、406个(8种)，占等位基因总数的14.06%(555/3 948)。高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物鉴定结果显示，中国报道的DRB1*1401被全部确认为DRB1*1454；12例B*0705/B*0706中，有1例被确认为B*0706，其他13种等位基因的鉴定结果分别为A*6801、A*7402、B*2705、B*3501、B*4402、B*5801、DRB1*0101、DRB1*0406 、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*1201、DRB1*1302 和DRB1*1502。 结论：在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原基因的测序分型中可以应用直接鉴别的方法区分模棱两可等位基因，但在临床移植前的高分辨确认试验中则需要采用实验方法进行精确分型。     

2000-2006年中华骨髓库等待造血干细胞移植白血病患者的人口学及临床分布特征

目的 研究2000-2006年中华骨髓库中等待造血干细胞移植的白血病患者的分布特征和规律,为白血病的预防、干预提供科学依据.方法 采用Microsoft SQL 2005数据库操作平台对3708例中国籍汉族白血病患者数据,分组计算患者年龄、性别、地区等分布曲线,并采用X2 检验方法 比较其分布差异.结果 2000-2006年间,中华骨髓库中3708例白血病患者,年龄范围7个月至69岁,中位年龄为24.5岁,标准差为±6.7岁;男女患者总体比值1.95:1(2451/1257);慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者1435例,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者1202例,急性非淋巴细胞自血病(acute myeloid leukemia,AML)患者1066例,慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphoblastie leukemia,CLL)患者5例,以CML最为多见;自血病患者的分布高峰值在15～岁至30～岁年龄组,15～岁年龄组542例,20～岁年龄组559例,25～岁年龄组514例,30～岁年龄组522例;20～岁以下年龄组(儿童组),其中ALL占49.36%(613/1242),AML占27.78%(245/1242),CML占22.78%(283/1242),CLL占0.08%(1/1242),以ALL患者构成比居多;白血病患者在我国30个地区的分布构成不均一,最低0例,最高494例,中位数101例.结论 2000-2006年间,中华骨髓库中等待造血干细胞移植的白血病患者构成以儿童和青少年为主,男性高于女性,儿童白血病分类以ALL为主,应加强这一群体的健康教育和白血病防治工作.等待造血干细胞移植的白血病患者在各地区分布不均一,江苏、广东、浙江和山东地区患者有较高的分布格局.     

定期无偿献血者T细胞免疫功能的研究

目的通过对定期无偿全血捐献者、定期无偿血小板捐献者2个特殊健康人群的T细胞数量以及细胞活化、细胞因子分泌功能的研究,评价定期献血对机体T细胞免疫功能的影响。方法采用流式细胞术对3组人群(定期无偿全血捐献者、定期无偿血小板捐献者、对照组)外周血中T细胞总数、CD4+T细胞群及CD8+T细胞群进行数量分析;分离外周血淋巴细胞体外培养,加丝裂原植物凝集素PHA刺激T细胞活化,流式细胞术检测CD4+CD25+活化T细胞群;Lum inex 100多功能液相分析平台检测细胞因子IL-2的分泌量。结果定期无偿全血捐献组及定期无偿血小板捐献组的T细胞总数及CD4+T细胞群、CD8+T细胞群的数量与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);T细胞活化指标CD25+、CD69+均在培养d4(72h)表达最高;定期无偿捐献全血组CD4+CD25+活化T细胞以及IL-2分泌量与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);定期无偿捐献血小板组CD4+CD25+活化T细胞以及IL-2的分泌量高于对照组(P<0.05)。结论机体通过强大的正负免疫调节,使定期献血者T细胞的数量和功能维持稳定状态。     

中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型

目的：通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原A．B．DRB1基因的序列分析，探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法：实验于2000—08／2004—03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院，供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因进行序列分析，观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果，则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果：①高分辨与低分辨分型结果比较：114对无关供受者对中，110对人类白细胞抗原-A，B，DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨（等位基因星号后两位数）DNA分型结果相吻合，4对聚合酶链式反应．测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1高分辨配对分类结果：39％的中国汉族供受者对完全配合，但61％的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因家族配对分布结果：3个座位的错配率分别为A（23％），B（10％），DRB1（17％）；A和DRB1座位的错配比较集中，A座位仅见于A＊02，A＊11和A＊24家族，DRB1座位见于DRB1＊04，DRB1＊08，DRB1＊12，DRB1＊14和DRB1＊15家族；而B座位的错配则比较分散，比较高的是B＊35，B＊48，B＊61和B＊62。④供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1错配等位基因组合结果：3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性，比较常见的几种组合为A＊0201／0207，A＊1101／1102．A＊0201／0206，A＊0203／0207，B＊4002／4006，DRB1＊1201／1202和DRB1＊1501／1502。结论：中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性，在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。     

人白介素2体外诱生与检测方法的建立

本研究旨在建立流式磁珠免疫荧光方法，并通过Luminex 100多功能液相分析平台对细胞培养上清液中的IL-2进行定量分析。用密度梯度离心法从ACD抗凝人外周血中分离淋巴细胞，用植物凝集素刺激其分化，在48小时后收集培养上清液，于-20℃冻存待测。用Luminex 100多功能液相分析平台检测IL-2标准品以及样品的相关荧光单位值（RFU），通过标准曲线求出样本中IL-2浓度。结果表明：得出标准品系列的回归方程为Lg（RFU）=1．547＋0．867LgC。方差分析显示F=301．7427，P〈0．05（v=6）；回归系数t检验显示，t=17．3707（v=6），P〈0．05。结论：建立了人IL-2体外诱生和检测的方法。该方法所得标准曲线有统计学意义。细胞上清液中的IL-2含量（对数）与荧光强度（对数）之间有直线关系。