马尔尼菲青霉基因功能研究工具载体pSilent-GFP的构建

目的 建立一种基于载体pSilent-1介导的对马尔尼菲青霉基因进行功能研究的工具。方法 将绿色荧光蛋白（GFP）基因整合于丝状真菌表达质粒pSilent-1中,构建pSilent-GFP载体,将构建成功的pSilent-GFP载体通过电转化方法转化马尔尼菲青霉酵母细胞,经潮霉素阳性筛选及PCR方法鉴定阳性克隆子,并在荧光显微镜下观察GFP在马尔尼菲青霉中的表达。结果 成功构建了pSilent-GFP表达载体,该载体能转化马尔尼菲青霉酵母细胞并在菌体内稳定表达GFP。结论 pSilent-GFP载体在马尔尼菲青霉中稳定表达GFP,pSilent-1载体可应用于马尔尼菲青霉基因的功能研究。     

构建以eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体

目的:构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法:利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin(100μg/mL)抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3'-AOX/5'-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果:以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论:成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。     

球形孢子丝菌致面部孢子丝菌病

正患者女,56岁,农民。主诉:右面部红色丘疹、斑块1年。现病史:患者于1年前无明显诱因右颊部出现一个针尖大小红色丘疹,后其周围出现类似几个丘疹,并逐渐增大融合成斑块,部分上覆少量黄色和暗红色痂,无明显瘙痒及疼痛。患者曾于外院就诊,具体诊断不详,未予治疗。后类似皮疹逐渐增多,向下蔓延至颏部     

真菌抗原成分及代谢产物在系统性真菌感染诊断方面的应用进展

系统性真菌感染时,真菌可在宿主血、尿及其他体液中持续释放其抗原成分及代谢产物,如(1-3)-β-D-葡聚糖、半乳甘露聚糖、甘露聚糖、D-阿拉伯糖醇等,而这些成分又是细菌、人和动物所不具备的。因此,检测这些特异性的真菌抗原成分及代谢产物,可用于系统性真菌感染的早期诊断、高危人群的监测以及疗效、预后的评价。     

抗真菌药物耐药机制研究新进展

近年来,真菌感染的发生率明显增加,其原因是多方面的。如广谱抗生素和免疫抑制剂的应用,治疗中一些易于造成真菌生长的不当操作、肠道外营养供应、癌症、艾滋病等。复发性和难治性真菌感染也常有报道。真菌是一种与其宿主有相似结构和代谢过程的真核生物,故成功治疗真菌感染     

马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及TNF-α分泌的影响

目的 研究马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及促炎因子TNF-α分泌的影响.方法 马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养24 h,采用流式细胞技术检测巨噬细胞TLR-2、TLR-4及Dectin-1的平均荧光强度;共聚焦显微镜观察荧光染色的受体;ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR检测不同时间段TNF-α的mRNA表达.结果 马尔尼菲青霉可使巨噬细胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1的平均荧光强度均增高,并激活巨噬细胞产生TNF-α.结论 马尔尼菲青霉上调了巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达,巨噬细胞的激活与TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达上调相关.     

16种支孢随机扩增 DNA多态性研究

目的 了解支孢属腐生真菌与致病真菌的基因学特征及二者的关系。方法 采用溴苯提取法提取基因组DNA,以随机扩增DNA多态性法对16种支孢26株菌的DNA指纹图谱作了分析。结果 （1）共选用10个随机引物进行扩增,筛选出2个具有稳定,清晰DNA扩增带型的引物,即引物2：5′-AGGGTCCTCC-3′,引物5：5′-CAGCACCCAC-3′。（2）26株菌DNA带型不完全相同,有一定的种间和种内的遗传变异性,遗传相似性约为37.4%,（3）同种菌具有较高的遗传相似性。（4）部分腐生菌与致病菌位于同一树组中。结论 随机扩增DNA多态性法研究发现支孢属内各种间有一定的遗传相似性。但腐生菌与致病菌的DNA带型性差异。     

尿真菌检查对HIV/AIDS患者马尔尼菲青霉病的诊断意义

【目的】 探讨尿真菌镜检与培养对HIV/AIDS患者马尔尼菲青霉病的诊断意义｡ 【方法】 分别同时对166例HIV/AIDS患者的尿液进行真菌镜检､培养,并作血真菌培养,检测尿标本马尔尼菲青霉的阳性率､灵敏度,并与血液真菌培养进行比较｡【结果】 166例HIV/AIDS患者中,确诊马尔尼菲青霉病患者26例(阳性率15.66%),马尔尼菲青霉血尿检查总阳性24例(14.46%)｡尿镜检阳性3例(1.81%),尿培养阳性14例(8.43%),血培养阳性19例(11.45%)｡尿培养､血培养及两者联合的灵敏度分别为53.84%､73.08%和92.31%,特异度均为100%｡血､尿培养的马尔尼菲青霉阳性率差异无统计学意义,但尿镜检与尿培养,尿镜检与血培养的阳性率之间,以及血培养与尿培养,尿培养与尿镜检之间的关联性存在统计学差异｡ 【结论】 尿真菌培养马尔尼菲青霉敏感性较高,方便快捷,是一种较好的HIV/AIDS患者尤其是取血困难者马尔尼菲青霉病的诊断方法,而尿真菌镜检意义不大｡     

地塞米松对巨噬细胞信号转导接头蛋白MyD88的抑制作用

目的研究地塞米松对马尔尼菲青霉固有免疫反应中巨噬细胞信号转导接头蛋白MyD88的作用。方法马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养,应用地塞米松作用后采用ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR及Western blot法检测MyD88的蛋白及基因表达。结果地塞米松抑制被马尔尼菲青霉激活的巨噬细胞产生TNF-α,并抑制巨噬细胞接头蛋白MyD88的蛋白及mRNA的表达。结论地塞米松对马尔尼菲青霉固有免疫反应抑制作用与其对MyD88的抑制相关。