免疫组化辅助病理诊断应用范例（一）——阑尾类癌？腺癌？

病例资料患者男性，36岁，以慢性阑尾炎急性发作住院手术治疗。术中见腹腔内淡黄色渗出液约ldri，阑尾表面脓苦附着，盲端与盲肠粘连。病理检查阑尾长5cm，直径1cm，浆膜面高度充血并见片状纤维素附着。切面各层结构清楚。镜检：呈急性化脓性阑尾炎改变，另于阑尾盲端粘膜肌层内见一个低倍视野范围的上皮样细胞巢.细胞小、大小形态一致、圆形，边界不清；核呈圆形、椭圆形；未见核分裂。细胞排列成腺管样、条索状或实性巢，巢间有纤维组织间隔（图1）。病理分析：根据上述的上皮样细胞巢出现于粘膜肌层，与粘膜腺体无连续，加之细胞巢间纤维…     

新疆不同民族食管癌血浆代谢组学差异分析

Objective To investigate the metabonomic variation between patients with esophageal cancer (EC) and healthy controls, and to analyze the variation between patients with EC. Methods 1H-MR and orthogonal partial least-squares discriminant analysis (OPLS-DA) was performed on 108 plasma specimens from EC patients and 50 health controls, and the metabonomic variation between patients with EC and healthy controls analyzed. Results OPLS-DA analysis might correctly separate all plasma specimens from health controls and patients with EC ,leucine(0. 0043±0. 0006,0. 0040±0. 0006) ,alanine(0. 0039±0. 0007,0. 0033±0. 0006), isoleucine (0. 0067±0. 0010,0. 0063±0. 0009), valine (0. 0037±0. 0005,0. 0035±0. 0006) ,glycopretein(0. 0123±0. 0043,0. 0102±0. 0022), lactate(0. 0342±0. 0113,0. 0258±0. 0085), acetone (0. 0027±0. 0023,0. 0017±0. 0008), acetate (0. 0007±0. 0001,0. 0006±0. 0001),choline(0.0035±0.0006, 0.0029±0.0007), isobutyrate (0.0020±0.0004, 0.0018±0.0003),unsaturated lipid (0. 0072±0. 0013,0. 0059 + 0. 0018), VLDL (0. 1209±0. 0589,0. 0879±0. 0269), LDL (0. 0885±0. 0328,0. 0785±0. 0288), 1-methylhistidine(O. 0005±0. 0001,0. 0004±0. 0005)decreased in EC patient' s plasma with statistical significance (r total>0. 27, P<0. 05), dimethylamine (0. 0004±0. 0001,0. 0005±0. 0001), α-glucose (0. 0079±0. 0013,0. 0081±0. 0016), β-glucose (0. O139±0. 0024,0. 0142±0. 0029) ,citric acid (0. 0044±0. 0008,0. 0106±0. 0058) increase in the EC patient's plasma (r total<-0. 27 ,P<0. 05). There were clear variation between Han and Kazak patients,alanine(0. 0031±0. 0005,0. 0029±0. 0004), glutamine (0. 0010±0. 0001,0. 0009±0. 0001), tyrosine (0. 0009±0. 0001,0. 0008±0. 0001), 1-methylhistidine (0. 0005±O. 0001,0. 0004±0. 0001) increased in the Han patients (r>0. 35, P>0. 05), carnitine (0. 0028±0. 0006) was higher in Kazak patients than in Han patients (0. 0025±0. 0004), which had statistical siginificance (r=-0. 40, P<0. 05). Unsaturated lipid (0. 0059±0. 0018,0. 0047±0. 0011), isoleucine (0. 0062±0. 0011,0.13058±0. 0007), alanine (0.0032±0. 0007, 0. 0028±0. 0004) ,glycoprotein (0. 0096±0. 0019,0. 0086±0. 0011) ,glutamine (0. 0011±0. 0001,0. 01309±0. 0001) ,tyrosine(0. 0009±0. 0001, 0. 0008±0. 0001), 1-methylhistidine (0. 0005±0. 0001, 0. 0004±0. 0001)were increased in Uygnr patients as compared with Kazak patients, having statistical significance (r>0. 33 ,P<0. 05), carnifine (0. 0027±0. 0005) was higher in Kazak patients than in Uygur patients (0.0025±0.0004)(r=-0.36,P<0.05). Conclusion The results indicate that1H-MR spectra of plasma analyzed by OPLS-DA statistical methods might completely separate the EC patients from health controls. The metabonomic approach should be helpful in screening of EC patients.     

新疆哈萨克族和维吾尔族及塔吉克族人群中谷胱甘肽转硫酶M1基因多态性分布

目的探讨谷胱甘肽转硫酶M1（Glutathione-S-Transferase M1，GSTM1）基因在新疆哈萨克、维吾尔、塔吉克族人群中基因多态性的分布。方法用PCR与电泳技术分析1121名健康人群（男442名，女679名；其中哈萨克族654名、维吾尔族412名和塔吉克族55名）中GSTM1基因的多态性分布状况。结果GSTM1基因在维吾尔、塔吉克和哈萨克族中的缺失率分别为62．6％、50．9％和47．4％，其中，维吾尔族中GSTM1基因缺失型（GSTM1 null）明显高于哈萨克族（OR：1．859，CI为1．445—2．391，X^2=23．71，P=0．000），而维吾尔族与塔吉克族之间、哈萨克族与塔吉克族之间GSTM1 null基因型的分布差异无统计学意义。结论GSTM1 null基因型在维吾尔族和哈萨克族人群中分布频率明显不同，提示GSTM1基因在新疆哈萨克族、维吾尔族人群中的分布存在多态性。     

高压氧对脑缺血再灌注小鼠抗氧化酶类及血脑屏障通透性的影响

目的　探讨高压氧 (HBO)在脑缺血再灌注损伤中对自由基的产生及血脑屏障 (BBB)通透性的影响。方法　昆明种小鼠 3 2 0只 ,随机分为假手术组、HBO组、脑缺血再灌注组和HBO 脑缺血再灌注组 ,每组各 80只。复制清醒脑缺血再灌注模型 ,并于术后经 0 .2 5MPaHBO治疗 5次 ,采用比色法检测各组小鼠海马组织SOD、CAT、GSH PX活性和MDA及EB的含量。取小鼠海马组织常规制片 ,透射电镜下观察并进行比较。结果　脑缺血再灌注组与假手术组比较 ,SOD、CAT及GSH PX活性明显下降 (P <0 .0 1) ,MDA含量明显升高 (P <0 .0 1) ,与脑部EB含量增高相一致。HBO 脑缺血再灌注组与脑缺血再灌注组相比 ,SOD、CAT、GSH PX活性明显升高 (P <0 .0 5 ) ,MDA含量明显下降 (P <0 .0 1) ,并与脑部EB含量减少相一致。HBO组与假手术组相比 ,GSH PX酶活性明显增高 (P <0 .0 5 )。电镜下示脑缺血再灌注组神经元坏死明显 ,星形胶质细胞胞体水肿 ,微管、微丝明显减少 ;HBO 脑缺血再灌注组神经元坏死不明显。结论　高压氧可增强脑缺血再灌小鼠脑组织抗氧化酶类活性 ,恢复星形胶质细胞功能 ,降低BBB通透性。     

cDNA微阵列分析穿刺手术所致BALB/c小鼠肝损伤基因表达谱变化

目的分析肝穿刺术后BALB/c小鼠肝脏基因表达谱的变化。方法10只BALB/c随机分为两组;实验组和正常组,每组各5只;实验组小鼠开腹直视下肝左叶注生理盐水,8天后采集肝组织标本并提取RNA,cDNA微阵列分析25 000个基因在实验组和正常组小鼠肝组织中的表达水平差异。结果肝穿刺术后共有82条差异基因,其中52条基因表达上调,30条基因表达下调;功能聚类可分为代谢、转录调节、转运、信号转导、炎症反应、细胞增殖与凋亡、细胞周期与细胞骨架及细胞粘附等8类。结论肝穿刺术所致小鼠肝脏基因表达谱发生的改变,涉及多个基因表达调控途径。     

细粒棘球蚴细胞外信号调节激酶基因克隆、序列分析及功能的初步鉴定

目的 从新疆株细粒棘球蚴中克隆细胞外信号调节激酶(EgERK1)基因,进行序列测定、生物信息学分析,蛋白表达及功能初步鉴定.方法 设计特异性引物,从新疆株细粒棘球蚴中提取总RNA,RT-PCR法扩增EgERK1基因,构建pET28a-EgERK1原核表达质粒,测序确定序列并进行生物信息学分析.构建正确的pET28a-EgERK1原核表达质粒,经诱导、表达EgERK1重组蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹检测其生物学功能.结果 RT-PCR扩增出的条带经测序,结果显示其长度为1125 bp,编码374个氨基酸,等电点为6.34,BLAST比对结果提示为一薪基因,命名为EgERK1(EU701008).同源性比较表明,EgERK1与多房棘球绦虫ERK基因(EmMPK1)同源性为95.45%,与线虫、酵母、果蝇和人类等ERK基因的同源性为43.04%～61.88%.进化树分析发现EgERK1和EmMPK1相聚集.功能分析预测EgERK1具有ERK类激酶T-X-Y结构保守区和酶激活功能域.Western印迹显示,原核诱导表达的EgERK1重组蛋白能与抗人ERK1/2抗体发生特异性免疫反应.结论 成功克隆细粒棘球蚴EgERK1新基因,发现EgERK1重组蛋白具有与ERK1/2抗体结合的功能,为进一步研究该基因在寄生虫与宿主相互作用中的功能奠定基础.     

HPLC法测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量

目的建立高效液相色谱法测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量.方法采用Agilent高效液相色谱仪,流动相为乙腈-水(40∶60),流速1.5mL·min-1,检测波长240 nm,柱温:35℃.结果醋酸地塞米松在7.812～85.932μg·mL-1范围内,线性关系良好,r=0.999 9,回收率为99.3%.结论本法可准确测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量,适用于产品的质量控制.     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性关系的研究

目的 为探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的关系. 方法 运用病例-对照研究的方法,PCR-RFLP技术检测新疆哈萨克族食管癌51例及非癌对照109例的MGMT 84C>T和MGMT 135G>T单核苷酸多态(SNPs)的基因型. 结果 MGMT 84C>T位点的三种基因型CC,CT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为76.5%(39/51) 、17.6%(9/51) 、5.9%(3/51),对照组分别为77.0%(84/109)、18.3%(20/109)、4.6%(5/109),两组间分布差异不显著(P=0.938,P>0.05);MGMT 135G>T位点的三种基因型GG,GT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为90.2%(46/51)、7.8%(4/51)、2.0%(1/51),对照组分别为82.6%(90/109)、16.5%(18/109)、0.9%(1/109),两组间分布差异不显著(P=0.295,P>0.05);MGMT 84C>T位点和MGMT 135G>T位点联合分析,在食管癌组0突变等位基因与1-4突变等位基因所占比例分别为68.6%(35/51)、31.4%(16/51);对照组分别为:63.3%(69/109)、36.7%(40/109),两组间分布差异也不显著(P=0.511,P>0.05). 结论 MGMT 84C>T和MGMT 135G>T SNPs与哈萨克族食管癌易感性可能无关联.     

原花青素对脑缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子、一氧化氮合酶和血脑屏障的影响

目的探讨葡萄籽原花青素对缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子、一氧化氮合酶和血脑屏障通透性的影响。方法采用夹闭小鼠双侧颈总动脉30 min再灌注72 h的脑缺血再灌注模型,并于双侧颈总动脉夹闭时及再灌注后每隔24 h分别腹腔注射蒸馏水、葡萄籽原花青素(10、20及40 mg/kg)和尼莫地平(2 mg/kg)。在处死动物前1 h经尾静脉注射2%伊文思蓝,采用ABC-ELISA法检测脑组织中白细胞介素1β和白细胞介素10含量,采用分光光度法检测脑组织中一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量。同时光镜观察小鼠海马CA1区脑组织的病理变化。结果与假手术组相比,缺血再灌注组脑组织中白细胞介素1β含量、一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量明显增高(P<0.01),而白细胞介素10含量降低,但无统计学意义。与缺血再灌注组相比,葡萄籽原花青素及尼莫地平治疗组脑组织中白细胞介素1β含量、一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量有不同程度的降低,而白细胞介素10含量有不同程度的升高。病理学组织检查发现,葡萄籽原花青素能改善脑缺血再灌注所造成的神经细胞损伤,减少神经细胞坏死。结论葡萄籽原花青素可能通过降低小鼠脑缺血再灌注时一氧化氮合酶活性和促炎因子白细胞介素1β含量,提高抗炎因子白细胞介素10含量进而降低血脑屏障的通透性而发挥脑保护作用。     

抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的 建立能分泌与细粒棘球绦虫(简称包虫)成虫特异结合的抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用包虫成虫抗原免疫BALB／c小鼠后，获取免疫的脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合。结果 ELISA方法筛选出1株能持续稳定分泌抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株，1F5E3C9E9D5杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可以与包虫成虫、棘球蚴结合，与囊液抗原呈边缘性阳性反应，而与泡球蚴EM2抗原呈阴性反应。冻存1个月后复苏，仍能稳定分泌。经免疫组织化学检测发现，该单克隆抗体与棘球蚴的生发层，棘球蚴原头节虫体呈阳性反应。结论 1F5E3C9E9D5是一株稳定的杂交瘤细胞株，所分泌的抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体在粪抗原的检测方面有应用前景。