吡格列酮对高糖环境中大鼠腹膜间皮细胞氧化应激及单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 观察吡格列酮(降血糖药)对高糖培养条件下大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)活性氧及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA、蛋白表达的影响.方法 用胰蛋白酶消化法分离培养大鼠腹膜间皮细胞;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞;通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度,测得细胞内活性氧(ROS)水平;分别用RT-PCR和ELISA法检测MCP-1 mRNA及蛋白含量.结果 正常组和甘露醇组比较,ROS水平和MCP-1表达差异无统计学意义,高糖组ROS水平较正常组明显增高(P＜0.01);采用吡格列酮和乙酰半胱氨酸干预后,ROS水平显著降低(P＜0.01);高糖组MCP-1mRNA及蛋白表达显著高于正常组(P＜0.01);而小剂量吡格列酮干预组和乙酰半胱氨酸组的MCP-1 mRNA及蛋白表达显著低于高糖组(P＜0.01);大剂量较小剂量吡格列酮干预组的ROS和MCP-1水平进一步降低.结论 吡格列酮通过抑制氧化应激而降低高糖所诱导的MCP-1表达,这可能是吡格列酮保护腹膜功能的作用机制之一.     

慢性肾脏病矿物质和骨代谢紊乱血清生化学指标变化的临床分析

目的综合分析骨代谢的状态,指导临床上慢性肾脏病矿物质及骨代谢紊乱(CKD-MBD)的诊断、分型及治疗。方法对2008年11月至2009年2月在中国医科大学附属第一医院肾内科住院的56例CKD4期、5期及长期血液透析(5年以上)三组不同分期的慢性肾功不全患者清晨空腹抽血化验血清钙、磷、iPTH、bAP、TRACP,并行骨密度检查。结果三组不同分期慢性肾功不全患者CKD-MBD的发生率分别为36.4%、73.0%、87.5%(χ2=6.861,P0.05),其中高转运性骨病占65.79%,低转运性骨病占34.21%。高转运性骨病患者血清bAP和TRACP活性明显升高,而低转运性骨病患者血清bAP和TRACP活性降低。结论CKD-MBD是慢性肾功不全患者常见的并发症,以高转运性骨病为主,但低转运性骨病不容忽视。bAP和TRACP是反映成骨细胞和破骨细胞活性的敏感指标,临床上可作为鉴别高、低转运性骨病的可靠依据,结合血清钙、磷、iPTH、骨密度的改变,可以综合分析骨代谢状态,指导CKD-MBD的诊断、分型、药物的选择和综合治疗。     

骨髓干细胞移植治疗慢性马兜铃酸肾病大鼠的实验研究

目的:观察骨髓源性干细胞能否向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏细胞分化及移植后相关生化指标的动态变化。方法:制备雌性Wistar大鼠CAAN动物模型,亚致死剂量X线照射后经尾静脉移植同系雄性大鼠骨髓干细胞,于移植后第60d处死大鼠,留取血、尿及肾组织标本。生化检测观察移植后相关生化指标的改善情况,Y染色体荧光原位杂交(Y-FISH)观察雌性受体大鼠肾脏中雄性骨髓源性干细胞的分化情况。结果:骨髓移植60d后在肾小球及肾间质中均发现Y染色体阳性的供体源性细胞,相关生化指标得到改善。结论:骨髓源性干细胞具有向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小球及间质细胞分化的潜能。     

罗格列酮对脂多糖作用下及高糖对大鼠腹膜间皮细胞TLR2 mRNA表达的影响

目的观察罗格列酮对脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响;观察高糖对RPMC的TLR2mRNA表达的影响。方法胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组。正常对照组:不同浓度LPS(1,10,100μg/ml)作用8h组;10μg/mlLPS作用不同时间(2,6,12h)组;10μg/mlLPS预孵育2h后,加入罗格列酮(10μmol/L)再作用4h组;不同浓度葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%)作用8h组;2.5%葡萄糖作用不同时间(5,10,20h)组。RT-PCR技术检测TLR2mRNA的表达。结果LPS及高糖均可刺激RPMC的TLR2mRNA表达显著增加,呈剂量依赖性(P<0.05),并且LPS作用下RPMC的TLR2mRNA表达增加在12h内呈时间依赖性(P<0.05),高糖作用下RPMC的TLR2mRNA表达增加在20h内呈时间依赖性(P<0.05);罗格列酮可抑制由LPS刺激导致的TLR2mRNA表达上调(P<0.05)。结论LPS及高糖可上调体外培养RPMC的TLR2mRNA表达,罗格列酮可拮抗LPS对TLR2mRNA的表达上调作用。     

蛋白激酶C对高糖作用下腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1调节作用

目的观察蛋白激酶C(PKC)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)胞膜上葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的调节,以探讨长期腹膜透析时如何避免腹膜损伤、改善腹膜透析疗效。方法胰酶消化法提取雄性Wistar大鼠的PMCs细胞进行培养,分别加入不同浓度葡萄糖及PKC抑制剂Go6976,间接免疫荧光法检测PMCs上GLUT1表达,流式细胞仪检测作用前后细胞膜上GLUT1量的改变,生化分析仪检测培养液内葡萄糖浓度的变化。结果高糖可增加细胞膜上GLUT1的表达,同时伴有PMCs对葡萄糖的转运增加(P0.05)。Go6976明显抑制了高糖对GLUT1的诱导,且葡萄糖的转运亦下降。结论葡萄糖以浓度依赖方式上调PMCs细胞膜上GLUT1的蛋白表达,同时伴有PMCs对葡萄糖转运的增加。PKC通路在其中发挥重要作用,应用PKC抑制剂可拮抗高糖对GLUT1表达的诱导作用。     

肾脏病理检测技术的发展及肾脏病动物模型的应用

1.肾脏病理检测技术的发展 (1)首创体外标记法:在国内外首次用体外标记法观察到肾小球基膜上的负电荷。 (2)组织染色技术的改进:①改良了胶态铁单一染色法,简化了负电荷的研究方法:②在国内外首次用改良地依红染色法检测肾组织上的HBsAg。     

姜黄素对透析相关性腹膜炎大鼠腹膜IL-6表达的影响

目的 研究姜黄素在腹膜透析相关性腹膜炎中对大鼠腹膜内白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法 腹腔注射表皮葡萄球菌诱发大鼠急性腹膜炎,应用免疫组织化学染色、Western blot及RT-PCR方法 ,分别在注射后3 h,24 h及48 h检测姜黄素处理组与无姜黄素处理组大鼠腹膜内IL-6的表达情况.结果 腹腔注射表皮葡萄球菌诱导大鼠产生急性腹膜炎后,免疫组化、Western blot及RT-PCR的检测结果 证实,腹膜内IL-6的表达自感染后3 h到24 h出现时间依赖性升高.与无姜黄素处理组相比,姜黄素处理组大鼠腹膜IL-6的表达水平降低.此外,姜黄素处理组腹膜细胞损伤较无姜黄素处理组轻.结论 姜黄素在由表皮葡萄球菌引起的腹膜透析相关性腹膜炎中具有保护作用.     

白细胞介素-10受体1基因多态性与系统性红斑狼疮ds-DNA抗体水平关系的研究

系统性红斑狼疮(SLE)是一种病因尚未完全明了的自体免疫性疾病,其特征性表现为针对自身核蛋白的高滴度抗体形成,严重时会形成免疫复合物沉积在基底膜上,导致肾小球肾炎和终末期肾衰竭.免疫异常是本病发生的关键,涉及T、B淋巴细胞、单核、自然杀伤(NK)细胞等几乎所有单个核细胞及众多细胞因子网络.其中血清白细胞介素-10(IL-10)浓度和分泌细胞数量与SLE发病相关,且与启动子区的多态性有关,然而在人类尚未发现与炎症反应直接相关的IL-10通路异常.     

Rho／Rho激酶信号通路及其在腹膜纤维化中的作用

腹膜透析是终末期肾脏病患者肾替代治疗方法之一,其利用腹膜作为半透膜通过弥散和超滤而发挥透析作用。然而,长期腹膜透析患者因反复腹膜感染及腹透液的生理不相容性等诸多因素最终导致腹膜纤维化的发生。 Rho／Rho激酶信号通路是机体各组织中普遍存在的一条信号转导通路。它能被多种炎症介质和细胞因子受体后耦联机制的活化而激活,通过激酶级联反应直接调节细胞内微丝骨架的聚合状态,参与细胞的多种生物学行为。近年研究发现,Rho／Rho激酶信号通路参与多种器官及组织纤维化的发生过程。本文对该通路的组成、活化、调节等生物学特征及其在器官纤维化疾病中的作用特别是在腹透相关性腹膜纤维化中的作用作一综述。     

水飞蓟宾对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:研究水飞蓟宾(SB)对脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)整合素连接激酶(ILK)、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组:(1)正常对照组;(2)不同浓度的LPS(1mg/L、10mg/L、100mg/L)作用24h组;(3)不同时间LPS组:10mg/LLPS分别作用于RPMC12h、24h、48h、72h;(4)水飞蓟宾组:不同浓度的SB(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)分别预孵育2h,加入10mg/LLPS再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMAmRNA的表达;Western印迹法检测ILK蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的表达。结果:与正常对照组相比,LPS可刺激RPMCILKmRNA和蛋白的表达增高,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMCα-SMAmRNA呈时间和剂量依赖性表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMCTGF-β1蛋白表达升高,呈现时间和剂量依赖性(P<0.01);水飞蓟宾组能浓度依赖性地降低LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达(P<0.05),随水飞蓟宾浓度的增加,抑制作用越强。结论:LPS可以上调RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达;水飞蓟宾可以抑制LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的过度表达。ILK参与了腹膜透析相关性腹膜炎腹膜纤维化的病理过程,水飞蓟宾对腹膜透析相关性腹膜炎具有一定的抑制作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。