CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性探讨

BACKGROUND:Existing evidence has shown that CM-Dil-labeled mesenchymal stem cells have delivered better results in experiments in vivo and in vitro. OBJECTIVE:To investigate the effect of in vitro CM-Dil labeling on biological characteristics and directed migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS:Mesenchymal stem cells were isolated and cultured from the bone marrow of Sprague-Dawley rats. The specific surface antigens, CD29, CD44, CD11b, CD45, were detected by flow cytometry. The rat bone marrow mesenchymal stem cells were labeled with CM-Dil, and then were cultured and passed continually. Thereafter the morphology and proliferation ability of labeled cells were assessed. The strength and duration of fluorescence after CM-Dil labeling were detected. Transwell chambers were used to investigate the migration ability of labeled cells towards the homogenate of the gastrocnemius muscles of mdx mice. RESULTS AND CONCLUSION:The cultured cells were markedly positive for CD29 and CD44, but negative for CD11b and CD45, which were in accordance with the features of bone marrow mesenchymal stem cells. CM-Dil-labeled cells were not different from unlabeled cells in the aspect of morphology and proliferation. Fluorescence was still visible after passage; however, a reduction in fluorescent intensity was observed under an inverted fluorescent contrast phase microscope after labeling. The labeled cells showed no different migration ability from the unlabeled cells (P > 0.05). In conclusion, the procedure of CM-Dil labeling is safe, simple and effective. CM-Dil could be a good choice for labeling and tracing rat bone marrow mesenchymal stem cells.     

经颅直流电刺激在脑卒中后失语症康复中的应用

失语症是指脑损伤病人语言功能的受损或丧失,是脑卒中常见的并发症之一,严重影响病人的生活,因此,失语症的治疗显得尤为重要。临床中单纯的语言治疗效果缓慢,如何更加有效地治疗失语症已成为研究的热门话题。经颅直流电刺激(tDCS)作为一种非侵入性的脑刺激技术,可通过微电流作用于大脑皮层,刺激皮层神经元,进而引起相关功能区兴奋性的改变,达到促进语言相关功能(听理解、图命名、阅读、书写、复述等)恢复的目的。经颅直流电刺激能有效地促进失语症的恢复,尤其是听理解、图命名、词图匹配等能力的恢复。现就经颅直流电刺激在脑卒中后失语症中的应用及疗效做一综述。     

抗生素治疗时限对化脓性脑膜患儿脑脊液细菌16s rRNA基因检测的影响

目的：研究抗生素治疗时限对化脓性脑膜患儿脑脊液细菌16s rRNA基因检测的影响。方法：选取2014年2月至2016年3月在我院收治的化脓性脑膜炎患儿60例。对所有患儿予以16s rRNA基因检测和脑脊液细菌培养检测，比较两种方法检测结果，观察抗生素使用对两种检测方法的影响。结果：脑脊液细菌培养阳性率显著低于16s rRNA基因芯片检测阳性率[15%(9/60) vs.35%(21/60)](P<0.05)。抗生素应用早期的16s rRNA基因检测阳性率和抗生素使用后期的阳性率比较差异不显著[36.67%(11/30) vs.33.33%(10/30)](P>0.05)；抗生素使用早期的脑脊液细菌培养阳性率显著高于抗生素应用后期的阳性率[13.33%(4/30) vs.0.00%(0/30)](P<0.05)。结论：和脑脊液培养相比，16s rRNA基因芯片法检测化脓性脑膜患儿脑脊液细菌受抗生素治疗时限的影响更小。     

联合应用配体和单克隆抗体亲和层析纯化人血浆天然MBL蛋白

目的优化从人血浆分离纯化天然甘露聚糖结合凝集素（MBL）的方法。方法联合应用甘露聚糖-Sepharose 4B层析柱和抗人MBL-CRD单克隆抗体-Sepharose 4B层析柱，3次上柱亲和层析分离，分别用EDTA、D-甘露糖、Gly-HCl（pH2．4）溶液洗脱结合蛋白。以SDS-PAGE、Western blot和ELISA等技术鉴定纯化产物。结果所获纯化MBL为Mr28000和Mr32000肽链构成的功能性寡聚体，其纯度较高，可与配体甘露聚糖结合并有效凝集酵母菌，还能与U937细胞胶凝素受体结合。结论联合使用配体亲和层析和单克隆抗体亲和层析从血浆中分离纯化MBL，获得高纯度、高活性的天然MBL蛋白。     

MBL与人单核细胞系THP1/CD14细胞结合及其特性研究

采用Cell-ELISA和流式细胞术,发现人单核细胞系THP1/CD14在生理条件下可结合甘露聚糖结合凝集素(MBL),这种结合具有Ca2+依赖性,能被甘露糖、N-乙酰葡糖胺、D-葡萄糖、半乳糖、蔗糖、海藻糖等及重组人MBL-CRD蛋白和MBL-CLR蛋白所部分抑制,但C1q或抗人C1qR单克隆抗体对之无影响。还发现,炎性状态下的THP1/CD14细胞与MBL的结合增强。结果表明,THP1/CD14细胞表达Ca2+依赖的、糖敏感的MBL受体或结合蛋白,包括对CLR特异和CRD特异的两种受体,均与C1q受体无关;炎性刺激可上调THP1/CD14细胞MBL受体或结合蛋白的表达。     

手足口病并发脑干脑炎19例临床分析

目的总结广东地区手足口病并发脑干脑炎患儿的临床特征,为手足口病并发脑干脑炎的诊断和治疗提供依据。方法收集2008年5～7月诊断为手足口病并发脑干脑炎患儿的临床资料,分析临床表现、实验室检查、神经电生理检查、影像学检查、治疗及转归等特征。选择同期诊断为手足口病并发病毒性脑炎的患儿作为对照组,进行脑干脑炎危险因素的单因素和多因素Logistic回归分析。 结果19例手足口病并发脑干脑炎患儿进入分析。①临床表现：19例患儿均有发热和皮疹;神经系统症状多见于肢体震颤（15例）,眼球异常运动（游动或上翻）（12例）,烦躁和惊恐（8例）;脑神经损害多见于单侧脑神经损害（14例）,舌咽和迷走神经麻痹（9例）。15例出现呼吸衰竭,3例出现肺出血。②实验室检查：外周血WBC升高8例;血糖在正常范围;脑脊液压力升高4例。③神经电生理检查：8例EEG异常,14例脑干听觉诱发电位（BAEP）异常。④影像学检查：3例胸部X线检查提示双肺渗出性病变;15例行头颅CT检查均未见异常;3例头颅MRI检查提示脑干异常信号病灶。⑤转归：2例死于中枢性呼吸和循环衰竭,余17例治愈出院,随访6个月未见神经系统症状。⑥单因素Logistic回归分析显示,肢体震颤、呼吸节律改变、呼吸衰竭、眼球异常运动（游动或上翻）、饮水呛咳、口角歪斜、舌体震颤、末梢循环不良、交叉瘫及BAEP异常与脑干脑炎的发生有关;多因素Logistic回归分析显示,肢体震颤和眼球异常运动（游动或上翻）和BAEP异常是手足口病并发脑干脑炎的危险因素（OR分别为436.9,52.2和93.5）。 结论外周血WBC、血糖以及脑脊液检查对手足口病并发脑干脑炎的诊断不具有特异性。手足口病患儿如出现肢体震颤、眼球异常运动（游动或上翻）等症状,应警惕脑干脑炎的发生。 BAEP检查对脑干损伤有较好的诊断价值。及时和规范治疗后大多数患儿的预后良好。     

异体骨髓干细胞移植后假肥大型肌营养不良症模型鼠膈肌dystrophin表达及病理改变

目的探讨骨髓干细胞移植对假肥大型肌营养不良症(DMD)模型鼠-mdx鼠膈肌的治疗效果。方法取雄性SD大鼠骨髓干细胞经尾静脉植入放疗处理后的8周龄雌性mdx鼠(n=18)。于移植后4、8、12周各取6只mdx鼠的膈肌行 HE染色、抗肌萎缩蛋白(dystrophin)免疫荧光检测以及dystrophin mRNA的RT-PCR分析,同时用正常C57鼠及放疗而未移植的mdx鼠作为对照,另进行PCR反应检测实验鼠膈肌内Sry(Y染色体的性别决定区)基因。结果移植后mdx 鼠膈肌间质内炎性细胞浸润较放疗而未移植mdx鼠有所减少;移植后核中心移位纤维比例[移植后4、8、12周分别为 (15．58±0．91)％、(12．50±1．87)％、(10．17％±1．17)％]较未移植mdx鼠(19．5±1．87)％显著减少。移植后dystrophin免疫荧光阳性细胞比例[移植后4、8、12周分别为(1．00±0．32)％、(6．00±1．05)％、(11．92±1．11％)]较未移植mdx鼠(O．17±0．41)％显著增加。RT-PCR结果显示C57鼠膈肌的dystrophin mRNA相对含量(0．63±0．04)最高;而未移植mdx鼠的膈肌中未检测到dystrophin mRNA;移植后的mdx鼠膈肌中mRNA的表达水平(移植后4、8、12周分别为0．19±0．05、0．26±0.06、0．36± 0．04)随时间推移逐渐增高;移植后各时间点mdx鼠膈肌Sry基因均为阳性。结论骨髓干细胞系统移植mdx鼠可以恢复部分膈肌的dystrophin表达,改善膈肌的病理,骨髓干细胞移植有希望成为全身治疗DMD的有效方法。     

晚期糖基化终末产物对糖尿病小鼠角膜树突状细胞活化的影响及作用机制

目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对糖尿病小鼠角膜中树突状细胞(DCs)活化功能的影响及其作用机制.方法 将6周龄小鼠随机分为正常对照组(A组)和1型糖尿病组(B组),分别连续5d腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或链脲佐菌素(60 mg/kg),通过Western Blot方法检测A、B组小鼠角膜中AGEs蛋白的表...     

脑脊液细菌16S核糖体RNA基因检测在抗生素治疗后化脓性脑膜炎患儿中的应用价值

目的 探讨脑脊液细菌16S核糖体RNA(16S rRNA)基因检测在抗生素治疗后化脓性脑膜炎患儿中的应用价值.方法 选择化脓性脑膜炎患儿60例,在抗生素使用早期及后期采集脑脊液标本,同时进行16S rRNA基因检测及细菌培养,比较两种方法的检测阳性率,分析抗生素应用时间对两种检测方法结果的影响.结果 脑脊液16S rRNA基因检测阳性21例(35.0％),脑脊液细菌培养阳性9例(15.0％),16S rRNA基因检测阳性率高于细菌培养(P＜0.05).抗生素应用早期16S rRNA基因检测阳性率略高于抗生素应用后期,但差异无统计学意义(P＞0.05);抗生素应用早期脑脊液细菌培养检测阳性率高于抗生素应用后期(P＜0.05).结论 对于抗生素治疗后化脓性脑膜炎患儿,脑脊液16S rRNA基因检出阳性率高于脑脊液细菌培养,且可能更少受抗生素应用时间的影响.