自噬与脂质代谢的研究新进展

自噬是细胞内分解、清除聚合大分子及老损细胞器的一系列重要的代谢过程。肝脏和脂肪组织是脂质代谢的主要部位。“噬脂”是除了胞浆脂肪酶途径外,脂肪分解的另一重要途径。脂质急需期、短期内脂质增加,肝脏自噬水平增强,长期高脂饮食和肥胖者,肝脏自噬水平减弱。同时,自噬干预脂肪细胞分化方向。调控自噬可作为治疗非酒精性脂肪性肝病、肥胖等慢性代谢性疾病的一个新靶点。     

湖南地区野生千斤拔属资源调查及大叶千斤拔野生变家种技术探索

目的:了解湖南地区野生千斤拔属资源分布概况,开展湖南地区大叶千斤拔野生变家种种植技术研究,为实现规模化生产奠定基础。方法:通过踏查法对湖南地区的千斤拔属野生资源进行调查;走访法了解大叶千斤拔种植技术,采用种子育苗繁殖和野生移栽进行大叶千斤拔人工种植试验研究。结果:湖南地区的野生千斤拔属资源仅零星分布;人工种植的大叶千斤拔病虫害较少,种植1年后的亩产(干品根)平均为372 kg,种植后2年半平均亩产为464 kg,在湖南地区适合人工种植。结论:湖南地区野生的千斤拔资源近濒危,非常有必要进行大叶千斤拔野生变家种种植技术推广。     

荷脂细胞胆固醇外向转运的工作模式

荷脂细胞外向转运胆固醇的能力是决定动脉粥样硬化进程与转归的关键.参与调控荷脂细胞胆固醇外向转运的蛋白质很多,经归纳、整理,我们提出“四个体系、一个中心、偶联转运、网络调控“的工作模式.即小凹蛋白1胞内转运体系、三磷酸腺苷结合盒A1跨膜转运体系、高密度脂蛋白受体(清道夫受体B1)跨膜转运体系、高密度脂蛋白-载脂蛋白A1胞外转运体系和小凹转运中心.以小凹为转运枢纽,小凹蛋白1胞内转运体系首先将胆固醇从胞内转运到细胞膜,贮存于小凹;位于小凹中心的清道夫受体B1跨膜转运体系和三磷酸腺苷结合盒A1跨膜转运体系随后将胆固醇交给高密度脂蛋白-载脂蛋白A1胞外转运体系;四个转运体系之间进行网络调控.该工作模式为动脉粥样硬化性疾病的发生发展及治疗提供一个简明的工作思路.     

脂氧合酶抑制剂对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨脂氧合酶抑制剂对HepG2细胞增殖及凋亡的影响及其相关机制。方法应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸（NDGA）处理HepG2细胞，利用MTY比色法、生长曲线、细胞克隆形成观察NDGA对HepG2细胞的增殖作用，H-E染色、流式细胞术观察细胞凋亡并行细胞周期分析，细胞免疫化学或Western印迹技术测定Caspase-3、增殖细胞核抗原（PCNA）、野生型（wt）P53、c-erbB-2蛋白表达水平变化。结果NDGA对HepG2细胞具有明显生长抑制作用，不同浓度NDGA（50、100、150、200μmol／L）处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L；细胞克隆形成率分别为21．63％、17．33％、12．53％、7．97％，明显低于对照组的31．70％。同时NDGA可诱导HepG2细胞凋亡，与细胞周期被阻滞于G1／S期有关。细胞免疫化学、Western印迹分析显示NDGA对HepG2细胞的PCNA、c-erbB-2蛋白表达有抑制作用，并可促进Caspase-3、wtP53蛋白表达。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖，并诱导凋亡，使细胞周期阻滞于G1／S期。此作用与改变某些原癌基因、抑癌基因的蛋白表达水平有关。     

无症状感染者与不可溯源病例在SARS-CoV-2感染和防控中的地位分析

传染性疾病爆发中的无症状感染者、症状轻重不同的感染者以及死亡者,排除医疗条件的影响外,一定程度上是病原体与宿主相互作用的结果。其中不可溯源病例与无症状感染者的相互关系及其对疫情的影响作用和对疫情发展的预测价值值得重视。     

细胞质膜小凹/小凹蛋白1在实验性动脉粥样硬化小鼠血管壁中的表达变化

目的 研究细胞质膜小凹，小凹蛋白1在动脉粥样硬化病变中的表达变化，探索动脉粥样硬化发生过程中细胞胆固醇逆转运障碍的机制。方法采用高脂饲料喂养动脉粥样硬化敏感C57BL／6J小鼠24周，计算机图像分析系统计算动脉粥样硬化病灶面积和主动脉内膜和中膜厚度；电镜观察小凹在主动脉病变区的血管平滑肌细胞表达，Western印迹检测血管壁小凹蛋白1变化情况。结果动脉粥样硬化模型小鼠主动脉病变区的血管平滑肌细胞膜上存在有小凹结构，但排列稀疏，与正常血管平滑肌细胞相比明显减少，泡沫样改变的血管平滑肌细胞未见明显小凹结构的存在。通过Western印迹检测观察到，高脂组血管壁的小凹蛋白1蛋白表达量明显减少，与对照组比较具有显著差异。结论维持细胞内胆固醇平衡的重要结构小凹，小凹蛋白1在动脉粥样硬化病变中明显受损，可能是血管平滑肌细胞胆固醇逆转运障碍重要原因之一。     

单核—巨噬细胞和ECV304内皮细胞表达死亡相关蛋白

为研究单核——巨噬细胞和ECV304细胞是否表达死亡相关蛋白以及影响死亡相关蛋白表达的因素。分别用氧化型低密度脂蛋白(100mg／L)孵育THP-1细胞，H2O2(1mmol／L)孵育ECV304细胞，用逆转录聚合酶链反应检测死亡相关蛋白mRNA的表达。结果发现，THP-1细胞及ECV304细胞均表达死亡相关蛋白，氧化型低密度脂蛋白和H2O2能分别诱导THP-1细胞和ECV304细胞死亡相关蛋白mRNA表达增高。实验结果提示死亡相关蛋白可能参与调节氧化应激诱导的单核—巨噬细胞和内皮细胞的凋亡。     

加味二陈汤对ApoE-/-小鼠炎症标志物IL-6和TNF-α的调节作用

目的　研究加味二陈汤对ApoE^-/-小鼠血清、主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α表达的影响。方法　40只ApoE^-/-小鼠中10只为空白对照组,30只以高脂饲喂养4周构建动脉粥样硬化（As）小鼠模型,均分成模型组、辛伐他汀组、加味二陈汤组,分别用生理盐水、辛伐他汀及加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,Elisa法检测血清中IL-6、TNF-α的含量;免疫组化法检测IL-6、TNF-α在主动脉壁及瓣膜的表达。结果　辛伐他汀组血清IL-6和TNF-α分别为392.06±37.70　pg/mL、189.1±50.4　pg/mL,与模型组相比表达下降（P<0.05）;加味二陈汤组血清IL-6、TNF-α分别为442.41±172.26　pg/mL、47.2±13.3　pg/mL,与模型组相比表达下降（P<0.05）,与辛伐他汀组相比,表达下降（P<0.05）;免疫组化结果显示加味二陈汤可降低IL-6、TNF-α在主动脉壁内的表达。结论　加味二陈汤可降低血清和主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α的表达。     

Daxx与雄激素受体结合的功能片段筛选

目的体外筛选出能与雄激素受体具有相互作用的Daxx结构域。方法应用聚合酶链反应扩增Daxx四个不同功能结构域,分别连接到带有GST标记的原核表达质粒pGEX-6p-1中,构建Daxx四个功能结构域的原核表达载体。经测序鉴定转化E Coli.BL21DE3菌株,经氨苄青霉素筛选并扩增阳性克隆,用IPTG诱导蛋白表达后纯化蛋白,采用GST pu ll-down体外筛选出与雄激素受体具有相互作用的Daxx功能结构域。结果 Daxx不同功能结构域的四个原核表达载体pGEX-6p-1/Daxx/DM1-240、pGEX-6p-1/Daxx/DM241-501、pGEX-6p-1/Daxx/DM502-625和pGEX-6p-1/Daxx/DM626-740经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序分析,证实插入质粒的片段大小正确,无读码框移位和突变。IPTG诱导后蛋白表达具有明显差异性,表达蛋白与预期表达蛋白质分子量大小相当。纯化蛋白进行GST pu ll-down实验结果显示Daxx与雄激素受体具有相互作用。结论 Daxx通过第626-740位氨基酸序列与雄激素受体相互结合。     

药学专业人才培养模式的研究与探索

文章以科学发展观为指导,提出了药学专业人才培养的研究思路——以素质教育、创新教育、实践能力培养为主线,从教育教学理念、教学模式、课程设置与建设、实验室建设与管理、创新性能力评价体系和专业师资队伍建设等方面进行教学改革,系统地提出了药学专业人才培养的思想与措施。