反义微小RNA-21寡核苷酸抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究

目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸(antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21)抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组;②无义寡核苷酸转染组;③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后Tb 3.1细胞生存率;流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡;Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力;Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力;蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原(antigen KI-.67,Ki67)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9)和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调;转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[(53.43±11.83)%]低于其他两组[(91.32±8.02)%和100%](F=27.02,P=0.00);细胞凋亡率显著升高[(12.23±2.92)%,F=26.641,P=0.001];AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组(F=268.231,P=0.000);Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据.

Abstract：

Objective To investigate the effect of micro RNA-21 (miRNA-21) knocking on the Tb3.1 human tongue squamous cell carcinoma growth. Methods Anti-sense miRNA-21 oligonucleotide was delivered with oligofectamine to suppress Tb 3. 1 tongue cancer cell growth in vitro. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the miRNA-21 expression after transfection. Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to determine Tb 3. 1 cell survival rate. Apoptosis were examined by flowcytometry. Matrigel matrix and transwell assay were used to determine Tb 3.1 cell colony formation and migration ability. Antigen KI-67 (Ki67), B cell lymphoma (Bcl-2), phosphatase and tensin homolog (PTEN), matrirx metalloproteinase 2(MMP-2, MMP-9) and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) protein expression in Tb 3. 1 cell were measured by Western blotting. Results miRNA-21 expression was decreased in miRNA-21 antisense oligonucleotide (ASODN) group. The survival rate of Tb 3. 1 cells with AS-miRNA-21 transfection was significantly suppressed (F=27.02, P = 0.00) and early phase apoptosis(F =26. 641 ,P = 0. 001) induced in Tb 3.1 cell. Ki67, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein weredown regulated while PTEN and TIMP-1 protein expression was increased. Conclusions Blocking miRNA-21 expression in Tb3.1 cell could suppress cancer cell growth in vitro and miRNA-21 can serve as a novel target candidate for human tongue cancer gene therapy.     

神经节细胞胶质瘤伴癫痫21例临床分析

目的分析神经节细胞胶质瘤并癫痫的临床特点及影响发作控制结果的因素,并探讨其手术治疗策略。方法回顾2007年至2010年间21例神经节细胞胶质瘤并癫痫患者的临床资料,并统计分析各因素对发作控制结果的影响。结果 21例中,病变手术全切除17例,大部切除4例。10例联合癫痫灶处理。术后3例肢体轻偏瘫,1例部分性视野缺损。发作控制:EngleⅠ级15例,Ⅱ级4例,Ⅲ级1例,Ⅳ级1例。术后无发作(EngleⅠ级)与性别、病变是否全切相关,而与起病年龄、病程、发作类型、是否位于颞叶、是否难治性、病理级别、手术方式(单纯切除还是结合癫痫灶处理)等无明显相关性。结论对神经节细胞胶质瘤伴癫痫患者,应在保障安全前提下尽可能全切,必要时结合神经导航、术中唤醒皮层电刺激功能区定位或颅内电极等技术,对顽固性癫痫应同时处理癫痫灶;神经节细胞胶质瘤手术后发作控制相对良好。     

枸杞子中AA-2βG防护晶状体氧化损伤的实验研究

目的研究枸杞子中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)对晶状体氧化损伤的保护作用。方法体外培养正常兔晶状体,采用H2O2氧化损伤法诱导建立晶状体混浊模型,分别于24,48,72 h培养结束后观察各组晶状体(空白对照组、H2O2氧化损伤组、维生素C组、AA-2βG组)的混浊情况,检测各组晶状体组织的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量变化。结果随时间延长,空白对照组晶状体混浊不明显,H2O2组混浊程度逐渐加重,Vc组和AA-2βG组晶状体混浊明显延迟;和H2O2组相比,Vc组和AA-2βG组SOD、GSH及T-AOC水平都有提高,MDA的含量降低。结论 AA-2βG可以延缓H2 O2诱导的兔晶状体混浊,对晶状体的氧化损伤具有保护作用。     

CDK5 与EMT 相关蛋白在头颈部鳞状细胞癌中异常表达的相关性研究

目的探讨头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）及上皮间充质转化（EMT）相关蛋白N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达,以及CDK5 的表达与患者预后的关系。方法免疫组化方法检测55 例HNSCC 患者癌组织中CDK5 及EMT 相关蛋白的表达情况;分析不同临床病理特征患者CDK5 及EMT 相关蛋白表达的差异,CDK5 与EMT 相关蛋白表达的相关性,以及CDK5 表达与患者生存之间的关系。结果CDK5 高表达率在有淋巴结转移患者中高于无淋巴结转移患者（91.67% vs 30.23%, P < 0.05）,在T3~T4 期患者中高于T1~T2 期患者（85% vs 20%, P < 0.05）;有淋巴结转移患者N-cadherin、Vimentin 高表达率高于无淋巴结转移的患者（75.00% vs 6.98%; 91.67% vs 27.91%, 均P < 0.05）,E-cadherin 高表达率低于无淋巴结转移的患者（8.33% vs 86.05%, P < 0.05）;CDK5 与N-cadherin、Vimentin 表达呈正相关,与E-cadherin 表达呈负相关（rs 分别为0.512、0.443、-0.363,均P < 0.01）;CDK5 高表达患者3 年生存率低于低表达患者（37.5% vs 87.0%,Logrank χ2=12.678,P < 0.01）。结论CDK5 及EMT 相关蛋白在转移性HNSCC 中异常表达;CDK5 的表达状态对预测 HNSCC 患者的预后有一定价值。     

黄热病毒实时荧光定量PCR方法的建立

目的 建立黄热病毒的实时荧光定量PCR检测技术,以实现黄热病毒感染早期的筛选和检测.方法 以带有黄热病毒基因质粒为阳性模板,采用TaqMan探针法,制作标准曲线,以实现对黄热病毒的简单快速的高灵敏度、高特异性实时检测.结果 该方法检测的最低拷贝数可以达到3.457 copies/μl.组内及组间变异系数均低于5％,证明该方法具有良好的敏感性及稳定性.以1～4型登革病毒和乙脑病毒基因组为模板,检测结果为阴性,证明该方法有良好的特异性.结论 该方法可快速、灵敏、特异、定量检测黄热病毒,能用于黄热病毒感染的早期诊断.     

正交试验优选枸杞多糖的超声波降解工艺

目的:优选枸杞多糖的超声波降解工艺.方法:以相对分子质量＜3万的小分子多糖(LBP-s)得率为指标,在单因素试验基础上,通过L9(34)正交试验考察超声频率、超声时间、反应温度对超声波降解工艺的影响.结果:最佳超声波降解工艺为超声频率40 kHz,反应温度40℃,超声时间1.5h,LBP-s得率达80.04％.结论:该降解工艺稳定可行,应用前景良好.     

电话回访式健康教育在肠造口患者中的应用效果

目的:分析电话回访式健康教育在肠造口患者中的应用效果。方法:选取于2013年1月至2014年1月来院治疗的肠造口患者70例作为研究对象,按出院顺序,将所有患者分为对照组和观察组,每组各35例,对照组出院后不实施任何干预,出院后进行电话回访式健康教育,随访1~3个月,对两组患者的自我护理技能进行统计分析。结果:观察组定时排便、护士用品使用、合理饮食、造口周围皮肤护理水平分别为82.86%、85.71%、91.43%、82.86%,均高于对照组对的20.00%、8.57%、37.14%、17.14%,差异有统计学意义(P0.05);观察组造口狭窄发生率为2.86%,低于对照组的34.29%,差异有统计学意义(P0.05);观察组护理满意度为97.14%,对照组护理满意度为77.14%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:对肠造口患者实施电话回访式健康教育的临床效果显著,提高患者自我护理技能,促进患者早日康复,值得临床推广应用。     

协同护理模式对天疱疮患者自我护理能力和自我效能的影响

<正>天疱疮是自身免疫引起表皮棘层细胞松解导致的慢性复发性表皮内大疱性皮肤病,典型表现为红斑基础上的疱壁松弛性水疱、糜烂、尼氏征阳性[1]。由于病情反复发作,患者免疫力下降,极易合并感染、电解质紊乱、蛋白丢失,甚至全身多器官功能衰竭而危及生命[2]。天疱疮病程漫长、治疗效果慢、护理难度大、医疗花费高等问题给患者及家属身心健康和生活质量造成严重影响,而持之以恒的居家护理是天疱疮患者治疗中的关键。因此,如何充分调动患者及家属参与护理治疗积极性,有     

大鼠闭胸式体外循环模型的建立

目的:建立Wistar大鼠闭胸式体外循环模型。方法:采用Wistar大鼠右颈内动脉插管灌注、右颈外静脉置管至右心房引流方法进行闭胸式体外循环,转流时间90min,术中及停机后进行有创血压、心电图监测和动脉血气分析。结果:10只大鼠顺利建立CPB模型,CPB期间平均动脉压维持在60mmHg以上,动脉血气指标正常,停CPB后,大鼠存活2h以上。结论:本实验建立大鼠闭胸式CPB模型是切实可行的,对CPB术后多脏器损伤的病理生理研究具有重要意义。     

老年患者无痛胃镜检查中的护理

总结了无痛胃镜在老年患者中应用的安全性及护理体会。包括心理护理、检查前准备、检查时护理及检查后护理。认为无痛胃镜检查在老年患者中应用安全,但要注意防范麻醉意外及并发症的发生。