碱性成纤维细胞生长因子与瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的代谢☆

背景：研究证实碱性成纤维细胞生长因子有促进创面愈合的作用,然而其在促进创面愈合的同时是否会引起成纤维细胞的增殖而导致瘢痕增生已受到学者的广泛关注。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成和降解的调控作用。 方法：增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养瘢痕成纤维细胞。取第2代细胞,采用氯胺T法、RT-PCR和Western blot法检测不同浓度(0~500 µg/L)碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕来源的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及细胞基质金属蛋白酶1合成和分泌的影响。 结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达均无促进作用。低质量浓度碱性成纤维细胞生长因子对细胞基质金属蛋白酶1的表达无明显影响,但随着质量浓度的升高表现为增高趋势,以50,100,500 µg/L组增高最显著(P < 0.05或P < 0.01)。同时,细胞基质金属蛋白酶1的表达在细胞与上清中变化一致。说明高质量浓度碱性成纤维细胞生长因子可以通过增加细胞基质金属蛋白酶1的合成来促进胶原蛋白降解,从而避免细胞外基质的过度沉积。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子;成纤维细胞;细胞基质金属蛋白酶1;瘢痕;胶原蛋白     

积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7表达的影响

目的 研究积雪草甙对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7的影响。方法 用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞术、免疫细胞化学检测其在正常状况和应用积雪草甙后细胞周期的改变与磷酸化Smad2和Smad7的改变。结果 积雪草甙可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期,减少成纤维细胞中磷酸化Smad2的含量,增加细胞中Smad7的含量。结论 积雪草甙抑制瘢痕的作用可通过Smad通路。     

解毒烧伤膏的抗菌作用研究

实验用药 解毒烧伤膏（广东皮宝制药有限公司生产，国药准字Z20030117，产品批号20040701）；聚维铜碘软膏（广东白云山中药厂生产，国药准字H44024098，产品批号04032008）；京万红软膏（天津达仁堂制药二厂生产，国药准字z12020440，产品批号203316）；湿润烧伤膏（北京光明中医烧伤创疡研究所美宝烧伤膏制药厂生产，国药准字Z2000004，产品批号20040401）。     

磺胺嘧啶银美蓝霜在烧伤创面削、切痂手术的应用

1980年Davies氏等报告用磺胺嘧啶银美蓝霜对烧伤创面坏死组织染色,作为判断削痂深度和范围的客观依据。1980年9月～1982年12月,我们在50例不同时期、不同深度的烧伤病人创面上使用了1%磺胺嘧啶银美蓝霜(以下简称蓝霜),其中削痂、切痂手术30例次,现报告如下。一、临床资料(一) 性别与年龄:男25例,女25例;成人37例,儿童13例。(二) 烧伤原因:火烧伤37例,热液烫伤     

Inhibition of α_1(Ⅰ) collagen gene in vitro transcription by antisense oligodeoxynucleotides

Tab I collagen is an ~ component of etri~ Inatrices and edestS in a Vallety Of hssues and or~ such as the skin, ho, tendon etC[l'2]. It is oompe Of 2 al chains and I ac chain which interact witheach other to form a characteristic triple hells. The abnorInality Of ac 1 collagen is Often caused by mUtation or abnonhal ~ Of one Of its geneS, halting in cof itS Physiolopcal abationS[3-6].Antisense nucleic aCids are ethehve in ~the~ or UnoontIDlled gene ~on. aam stlatng OfhaCription blwha…     

人工反义寡核苷酸对人Ⅰ型胶原基因体外转录体系的抑制作用

目的和方法过量Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积是增生性瘢痕组织和瘢痕疙瘩形成的重要原因。采用两个自行构建的ＳＰ６体外转录系统,通过掺入同位素（ａ３２ＰＧＴＰ）进行放射自显影,探讨不同反义寡核苷酸对Ⅰ型胶原基因体外转录的抑制作用。结果和结论位于ＳＰ６转录起始位点区域的寡核苷酸能够有效抑制体外转录反应;而位于ＳＰ６转录起始位点下游约２００ｂｐ的寡核苷酸和作为对照的随机寡核苷酸对转录的抑制作用不明显。     

胶原蛋白海绵在多种创面修复中的应用

目的：探讨胶原蛋白海绵在不同类型创面上有无促进创面愈合的作用。方法：选择56例患有不同类型创面的患者，用胶原蛋白海绵敷贴于取皮区、Ⅱ度烧伤、慢性溃疡创面上或填塞于压疮所致的窦道的底部为实验组．常规治疗为对照组；观察愈合的经过、愈合的时间，并作组织病理学检查。结果：14例取皮区创面使用胶原蛋白海绵的愈合时间是(2．86&;#177;0．86)d,对照组为(4．14&;#177;0.86)d，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0.01；Ⅱ度烧伤创面治疗组愈合时间是(6．75&;#177;1．39)d．对照组为(10．63&;#177;1．19)d．两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)；肉芽创面、慢性溃疡创面、压疮创面总显效率83．3％，总有效率100％；组织病理：对照组肉芽组织中可见较多内皮细胞增生形成的实性细胞簇及扩张的新生毛细血管．在毛细血管周围有散在新生的纤维母细胞。可见大量的胶原纤维形成，胶原纤维排列无序，部分融合。实验组早期及中期成纤维细胞及毛细血管数量明显多于对照组，成纤维细胞转化为纤维细胞的时期较对照组早，胶原纤维的产生增加，排列更有序。结论：胶原蛋白海绵对创面修复及愈合，加速肉芽组织的生长、促进慢性溃疡和压疮创面生长等方面均有显著的作用。     

解毒烧伤膏对深Ⅱ度烫伤创面愈合中肿瘤坏死因子α及表皮细胞生长因子表达的调控

目的:烫伤创面给予解毒烧伤膏治疗后,观察肿瘤坏死因子α及表皮细胞生长因子在愈合过程中表达水平的变化。方法:实验于2004-09/11在中山大学北校区实验动物中心完成。选取广东产成年杂种猪8只,用自制恒温恒压水浴循环烫伤仪建立猪深Ⅱ度烫伤模型,于猪背部两侧以98℃热水烫12s,各制作一个直径8cm的圆形创面。一侧为解毒烧伤膏治疗侧,创面外用解毒烧伤膏,1次/d,另一侧为空白对照侧。用免疫组织化学方法结合图像数据分析,分别在烫伤后第1,3,5,7,9,11天检测肿瘤坏死因子α及表皮细胞生长因子表达水平的变化。结果:实验纳入猪8只,均进入结果分析。①猪深Ⅱ度创面烫伤后不同时间两侧的大体观察:解毒烧伤膏治疗侧创面愈合时间明显比空白对照侧提前[分别为(8.0±0.4),(10.3±0.6)d,P<0.05]。②猪深Ⅱ度创面烫伤后不同时间两侧的病理学观察结果:伤后第1天解毒烧伤膏治疗侧开始有基底层细胞增生,第5天可见明显增生的表皮细胞,细胞胞体较大,排列紧密,由单层上皮细胞向复层上皮细胞转化,并以毛囊区附近增生活跃。而空白对照侧第2天开始有局部细胞增生,至第7天增殖明显,细胞体积较小,分布疏松,以单层上皮细胞为主。③猪深Ⅱ度创面烫伤后不同时间肿瘤坏死因子α免疫组织化学观察结果:肿瘤坏死因子α在解毒烧伤膏治疗侧和空白对照侧于伤后的表达均有两个高峰,空白对照侧高峰时间分别为伤后第3天和第9天,解毒烧伤膏治疗侧的第1个高峰也是伤后第3天,峰值略低于空白对照侧(17.71±3.32,17.79±3.43,t=1.37,P>0.05),第2个高峰则位于伤后第7天,较空白对照侧明显提前(P<0.01)。早期肿瘤坏死因子α主要表达在中性粒细胞,后期主要表达在单核细胞,部分血管内皮细胞亦见表达。④猪深Ⅱ度创面烫伤后不同时间表皮细胞生长因子免疫组织化学观察结果:解毒烧伤膏治疗侧在伤后第1天开始表达(7.32±1.79),主要位于基底细胞,第5天显著表达(18.18±3.46),第7和9天维持高水平表达。空白对照侧在伤后第1天基本无表达(2.31±1.12),第3天表达较弱,细胞数量少,于第7天表达出现高峰(18.26±3.56),并于第9和11天维持高水平表达。表皮细胞生长因子在解毒烧伤膏治疗侧的表达明显早于空白对照侧(t=2.21～3.95,P<0.01)。结论:解毒烧伤膏能够促进表皮细胞生长因子在创面修复的早期表达,并抑制肿瘤坏死因子α在创面修复后期的过度表达,有利于创面愈合。     

人增生性瘢痕组织中肥大细胞分离的条件优化

目的探讨分离人增生性瘢痕组织中肥大细胞(MC)所用的I型胶原酶和透明质酸酶的最佳浓度;获取MC,用于瘢痕瘙痒研究。方法用不同浓度的I型胶原酶和透明质酸酶消化分离MC;甲苯胺蓝染色和番红复染,鉴定并计数MC。结果MC体积大、核呈蓝色,胞浆内含紫红色分泌颗粒。当透明质酸酶浓度为1mg/ml时,与I型胶原酶浓度为1、2mg/ml组比较,Ⅰ型胶原酶浓度为3、4mg/ml组分离出的MC占有核细胞的百分比明显增加,差异均有显著性(P<0.01);但3mg/ml组与4mg/ml组之间的差异不明显(P>0.05)。当Ⅰ型胶原酶浓度为3mg/ml时,与透明质酸酶浓度为0.5mg/ml组比较,透明质酸酶浓度为1、2mg/ml组分离出的MC占有核细胞的百分比明显增加,差异均有显著性(P<0.01);但1mg/ml与2mg/ml组之间的差异不明显(P>0.05)。培养12h的细胞悬液中大部分黏附能力强的细胞已贴壁、溶解,而MC黏附性较差,轻轻摇动就可重新悬浮于培养液中。结论用Ⅰ型胶原酶和透质酸酶可以成功分离出人增生性瘢痕组织中的MC,最佳浓度分别为3、1mg/ml。分离的MC存活时间较长,可满足实验需求。     

P物质对人增生性瘢痕肥大细胞中刺激性G蛋白α亚基mRNA表达的影响

目的 探讨P物质（SP）与增生性瘢痕瘙痒发生的关系及可能的机制。方法 Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶消化分离肥大细胞,用荧光分光光度法检测G蛋白失活剂NEM对人增生性瘢痕、非增生性瘢痕以及皮肤中肥大细胞释放组胺的影响;RT-PCR法分析SP对刺激性G蛋白（Gs）α亚基mRNA表达的影响。结果 （1）与对照组比较,SP均明显增强三种组织中MCs分泌组胺的效应,而NEM对其效应有明显的抑制作用。（2）对照组中,GsαmRNA在上述三种组织中的表达差异无显著性;SP作用后,GsαmRNA在三种组织中的表达均明显增强,增生性瘢痕组与正常皮肤组和非增生性瘢痕组比较差异有显著性。结论 SP通过上调GsαmRNA在肥大细胞中的表达促进组胺的释放,这可能是增生性瘢痕瘙痒发生的机制之一。