运用蛋白质指纹图谱技术建立系统性红斑狼疮诊断模式的研究

目的 运用蛋白质指纹图谱技术筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的特异性蛋白标志物,建立SLE疾病相关的蛋白质组学诊断模型.方法 联用弱阳离子磁珠与蛋白质芯片阅读仪绘制64例SLE患者组及168例对照组的血清蛋白质指纹图谱,用Biomarker Patterns Software 5.0(BPS)软件筛选特异性的血清蛋白标志物并建立SLE诊断模型.结果 在SLE患者组和对照组之间找到60个差异蛋白峰(P<0.05),其中28个蛋白峰在SLE患者表达增高,32个蛋白峰表达降低.由BPS软件筛选的4个蛋白标志物(质荷比为3376.02、4070.09、7770.45、28045.10)建立的诊断模型能很好的把SLE患者与其他自身免疫性疾病和健康对照者区分出来,经过盲法验证,其对SLE的诊断敏感性为78%,特异性为96%.结论 采用蛋白质指纹图谱技术能筛查识别出与SLE疾病相关的特异性血清蛋白标志物,由4个质荷比分别为3376.02、4070.09、7770.45和28045.1的SLE特异性血清蛋白标志物建立的SLE疾病诊断模型具有高敏感性及特异性.     

高血压病痰湿壅盛证患者血清蛋白质组学研究

目的：对高血压病痰湿壅盛证患者血清蛋白质组学进行研究,试图寻找与痰湿壅盛证相关的特异蛋白质。方法：纳入59例高血压患者,将其分为痰湿壅盛组（39例）和非痰湿壅盛组（20例）,并选择30例健康体检者作为正常对照。采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白质,Ciphergen PBS-Ⅱc型蛋白质芯片阅读检测仪绘制成蛋白指纹图谱。所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard3.1分析之后用Biomarker PatternsSoftware5.0识别痰湿壅盛证特异表达的蛋白质,并建立诊断模型。结果：高血压病痰湿壅盛证（痰湿壅盛）与对照组之间共检测出有显著差异的蛋白质峰102个（P〈0.05）。以质荷比（mass to charge ratio,m/z）为9334.958（表达增高）、9280.191（表达降低）、8030.794（表达增高）和2941.551（表达增高）4个蛋白峰组成的诊断模型能很好地将痰湿壅盛区分出来。该诊断模型的敏感性为93.103%（27/29）,特异性为92%（23/25）,假阳性率为8%（2/25）,假阴性率为6.897%（2/29）,Youden指数为85.103%。盲法检验其敏感性为90%（9/10）,特异性为88%（22/25）,假阳性率为12%（3/25）,假阴性率为10%（1/10）,Youden指数为78%。结论：差异表达的蛋白质很可能是高血压病痰湿壅盛证的物质基础,筛选出的差异蛋白质是该证型患者血清蛋白标记物中区别于正常人和非此证型的高血压患者的共性特异蛋白。以此建立的分子生物学诊断模型,为中医辨证提供了一种更加客观准确的辨证手段。     

转化生长因子βⅡ型受体在狼疮肾炎患者外周血单个核细胞表达的意义

目的 探讨狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMCs)转化生长因子βⅡ型受体(TβR Ⅱ) mRNA表达水平及其与疾病活动性的关系.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测44=例LN患者(均为活动期患者)、21例其他非LN患者和40名健康对照组PBMCs中TβRⅡ mRNA的表达水平,LN患者中未使用与使用激素和(或)免疫抑制剂患者分别为16例和28例.结果 LN患者PBMC中T13R H mRNA水平1.7±1.0显著低于非LN组4.0±3.1及健康对照组4.1±2.5(P<0.01);LN患者中未使用激素和(或)免疫抑制剂组T13R H mRNA的表达水平1.3±1.0低于用药组2.0+0.9(P<0.05);LN患者PBMCs中的T13RII mRNA表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)评分标准(r-0.309,P<0.05)及抗双链DNA抗体(r-0.401,P<0.01)呈显著负相关,与补体C3呈显著正相关(r=0.621,P<0.01).结论 LN患者PBMCs中的TβRⅡmRNA表达水平降低,TβRⅡ参与了LN的发病过程,并与疾病的活动性显著相关;应用激素和(或)免疫抑制剂可以提高TTβRⅡ mRNA的表达,减轻炎症损害.     

一些简单的预防措施可减少许多院内跌倒

一项来自国家病人安全局的报告称：如果能够采取一些简单的预防措施，英国医院内近乎1／5的跌倒事件可以避免。自2005年9月以来的一年多时间里，上报给国家病人安全局的报告和学习系统的跌倒事件共有205000多起，该报告即由此总结而得.     

Serum protein fingerprint of patients with pancreatic cancer by SELDI technology

Objective： To study the serum protein fingerprint of patients with pancreatic cancer and to screen for protein molecules closely related to pancreatic cancer during the onset and progression of the disease using surface-enhanced laser desorption and ionization time of fight mass spectrometry （SELDI-TOF-MS）. Methods： Serum samples from 20 pancreatic cancers, 20 healthy volunteers and 18 patients with other pancreatic diseases. WCX magnetic beans and PBSII-C protein chips reader （Ciphergen Biosystems Ins.） were used. The protein fingerprint expression of all the Serum samples and the resulting profiles between cancer and normal were analyzed with BiomarkerWizard system. Results： Agroup ofproteomic peaks were detected. Four differently expressed potential biomarkers were identified with the relative molecular weights of 5705 Da, 4935 Da, 5318 Da and 3243 Da. Among them, two proteins with m/z5705, 5318Da down-regulated, and two proteins with m/z 4935, 3243 Da were up-regulated in pancreatic cancers. Conclusion： SELDI technology can be used to screen significant proteins of differential expression in the serum of pancreatic cancer patients. These different proteins could be specific biomarkers of the patients with pancreatic cancer in the serum and have the potential value of further investigation.     

13715例抗环瓜氨酸肽抗体和抗角蛋白抗体检测临床分析

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)和抗角蛋白抗体(AKA)在临床就诊患者疾病分布及在类风湿关节炎(RA)诊断中的临床意义。方法分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和间接免疫荧光法(IIF)检测13 715例患者血清抗CCP抗体和血清AKA,分析抗CCP抗体的疾病分布和在不同疾病中的阳性率。结果 13 715例中,抗CCP抗体阳性率为30.02%,男性为25.41%,女性为31.60%;在2716例确诊RA、3808例疑似RA的关节炎/关节痛患者和1909例确诊其他非RA患者中,抗CCP抗体阳性率为34.74%,高于AKA 16.71%的阳性率,差异有统计学意义(χ2=2810.0,P=0.00),两者的一致性中度(K=0.52,P=0.00)。抗CCP抗体对RA的敏感性为64.10%,特异性为85.4%;AKA对RA的敏感性为32.29%,特异性为93.92%。抗CCP抗体诊断RA的敏感性高于AKA(P0.05),特异性低于AKA(P0.05)。抗CCP抗体与AKA联合检测RA特异性为94.55%。RA患者抗CCP抗体阳性率为64.10%,干燥综合征(SS)、银屑病关节炎(PsA)、骨关节炎(OA)和系统性硬化症(SSc)患者中抗CCP抗体阳性率分别为36.69%、25.00%、18.60%和18.60%,在白塞病(BD)和成人斯蒂尔病(AOSD)中抗CCP抗体阳性率为0。结论抗CCP抗体主要出现于RA患者,抗CCP抗体可以满足临床对RA患者的筛查,对于抗CCP抗体检测结果与临床表现不符合的患者有必要进行AKA检测,减少漏诊和误诊。     

蛋白指纹图谱技术筛选神经精神狼疮的生物标志物

目的 通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)联合弱阳离子交换(WCX)磁珠法分析神经精神狼疮(NPSLE)患者脑脊液蛋白质谱,建立树形分类模型并验证其诊断价值.方法 MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠法生成脑脊液蛋白质谱,比较NPSLE治疗前组(27例)与对照组(27例)蛋白质谱,采用t检验、Kruskal-WallisH检验和Wilcoxon检验分析2组间及NPSLE组治疗前后差异峰,建立NPSLE树形分类模型.以独立样本(12例NPSLE、12例腰椎间盘突出和9例其他自身免疫病的中枢神经系统受累患者)肓法检验该树形分类模型对诊断NPSLE的敏感性和特异性.结果 NPSLE治疗前组与对照组、NPSLE治疗前组与治疗后组相比,分别有12个和4个差异峰.以质荷比(m/z) 8595、7170、7661、7740和5806差异峰建立NPSLE树形分类模型,对54例建模组的敏感性和特异性均为92.6％,对33例独立样本盲法检验的敏感性和特异性分别为91.7％和85.7％.结论 本研究首次建立了MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠法检测NPSLE脑脊液蛋白质谱的方法,据此建立的NPSLE树形分类模型对诊断NPSLE具有较高的敏感性和特异性.     

应用蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化患者血清特异性标志物

目的: 探讨蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物.方法: 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBSII-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱.所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后用Biomarker Pattems Sofiware 5.0识别最终可能用于PBC诊断的蛋白标志物并优化组合建立诊断模型.结果: 在PBC患者和对照组之间找到69个差异蛋白峰(P<0.05).其中质荷比(m/z)为3445,4260,8133和16 290的蛋白峰建立PBC诊断模型.该诊断模型能很好地把PBC患者从其他肝脏疾病患者和正常人群中区分出来,其敏感性为93.3%,特异性为95.1%.经双盲实验验证,该模型对PBC诊断的敏感性为92.9%,特异性为82.4%. 结论: 采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测PBC患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的PBC诊断模型.     

天疱疮相关自身抗体的检测及其临床意义

目的评价抗细胞间抗体、抗桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)抗体和抗桥粒芯糖蛋白3(Dsg3)抗体联合检测对于天疱疮诊断的临床意义,以及各项检测指标之间的相关性。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测30例天疱疮患者、14例类天疱疮患者血清中的抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体,采用间接免疫荧光法检测抗细胞间抗体。结果抗细胞间抗体、抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体在天疱疮患者中的阳性率分别为53.33%(16/30)、46.67%(14/30)、53.33%(16/30)。3项检测指标在天疱疮患者和类天疱疮患者中的阳性率差异有统计学意义。抗细胞间抗体与抗Dsg1抗体在天疱疮患者中的阳性率差异无统计学意义,2种检测结果显著相关。抗细胞间抗体与抗Dsg3抗体在天疱疮患者中的阳性率差异无统计学意义,2种检测结果显著相关。他们之间有交叉重叠现象。结论3种检测指标的联合应用可以提高临床上诊断天疱疮的敏感性。     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.