多孔陶瓷板固定床生物反应器设计及模拟

设计了一种结构新型的多孔陶瓷固定床生物反应器，与传统的固定床相比，该反应器具有氧传递性能好，能够均匀接种等优点，通过模拟，考察了反应器内的流体流动和气液传递性质，计算证明反应器的供氧能力能够满足链霉菌发酵过程对氧的需求。     

耐磷酸盐土霉素菌株选育和发酵的研究

以土霉素生产菌株138^#为出发菌株，经饥饿培养、5-FU、UV、咖啡因复合诱变处理，再用含高磷酸盐的培养基定向筛选，得到高产突变菌株100^#。该突变株遗传特性稳定，代谢特性优于出发菌株，经57m^3发酵罐生产验证，生产稳定，低效价罐批减少59．5％，在磷酸盐浓度提高到0.04％～0.05％时，统计一年的正常罐批平均发酵效价比对照菌株提高5．76％。     

海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432次级代谢产物研究

目的 研究海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432的化学成分。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶填料（ODS）中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物采用HR-ESI-MS、NMR以及文献比对等方法进行鉴定,新化合物的绝对构型通过计算NMR和圆二色谱（ECD）确定。结果 从菌株Streptomyces parvulus 162432中分离纯化了9个环二肽类化合物,包括1个新化合物链霉菌二肽A（1）和8个已知化合物：环-(D-顺式-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)（2）、环-(D-脯氨酸-D-苯丙氨酸)（3）、环-(L-羟脯氨酸-L-亮氨酸)（4）、环-(L-羟脯氨酸-D-亮氨酸)（5）、环-(D-脯氨酸- L-亮氨酸)（6）、环-(L-脯氨酸-D-亮氨酸)（7）、环-(D-脯氨酸-L-异亮氨酸)（8）、环-(L-亮氨酸-D-缬氨酸)（9）。对分离得到的化合物1～9进行肿瘤细胞增殖细胞毒和抗菌活性评价,活性结果显示,化合物1～9在10 μg/mL下对肿瘤细胞增殖均未显示出明显的细胞毒活性;化合物9对苏云金芽孢杆菌显示抑菌活性,最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）为25 μg/mL。结论 化合物1为新化合物,化合物2和4～9为首次从链霉菌Streptomyces parvulus中分离得到,化合物9具有一定的抗菌活性。     

链霉菌RX-17溶菌酶的产生条件及溶菌特异性研究

通过液体及平板溶菌活性测定，证明了灰色链霉菌(Streptomyces griseus)RX-17发酵液中存在对变链球菌(Streptococcus mutans)lngbritt有强力溶解作用的物质-RX-17溶菌酶。产酶培养基碳、氮源最适配比为蔗糖3％、大豆蛋白胨1．25％、牛肉膏0．2％；最适产酶温度为33℃；高溶氧水平对酶的产生有利。溶菌特异性试验证实了RX-17溶菌酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、乳脂链球菌(S．cremaris)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、短乳杆菌(L．brevis)、产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)及铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等多种G^ 、G^-细菌均有良好的溶解作用。     

云南美登木共生放线菌菌株CS产生的新多羟基环己烷衍生物

从云南美登木共生放线菌菌株(Streptomyces sp.)CS的发酵产物中分离得一个新的多羟基环己烷衍生物,并通过波谱学特征鉴定化合物的结构为1-isobutyroxymethyl cyclohex-1(6)-ene-2,3,4,5-tetrol-2-isobutyrate.     

黄直丝链霉菌生产的新的细胞周期抑制剂(-)-脱水亚胺环己酮和l-亚胺环己酮

采用tsFT210细胞的流式细胞术活性筛选模型,通过活性跟踪分离,从黄直丝链霉菌18522发酵物中分离得到两个具有细胞周期抑制活性的化合物,并根据波谱数据和理化性质分别鉴定为(-)-脱水亚胺环己酮(1)和l-亚胺环己酮(2).活性测试结果表明,1和2将tsFT210细胞的细胞周期抑制在G0/G1期,最低有效浓度分别为23.8 μmol/L(1)和10.8 nmol/L(2).化合物1为新天然产物,也是新的亚胺环己酮类细胞周期抑制剂.     

复合诱变筛选avermectins高产菌株

由Streptomyces avermitilis初始菌株经过自然分离可以得到三种不同类型的菌株，即灰色粉末型、白色和光秃型。其中灰色粉末型产素水平最高，摇瓶发酵效价达到6835．1μg／ml，B1组分达到56．3％。经过紫外线和亚硝基胍对初始菌株的孢子的诱变及对其原生质体的诱变再生。并且经过异亮氨酸和链霉素的定向筛选，得到的高产菌株摇瓶发酵效价达到8542．9μg／ml，B。组分达到64．9％；同时通过对高产菌株进行传代培养检验其传代稳定性，结果表明，传代3代后，菌株开始退化，并且其发酵效价有比较显著的下降。     

前体对纳他霉素生物合成的影响

研究如何通过加入前体来提高生物合成纳他霉素的产量，进行了前体种类选择、前体加入量及加入时间的优化实验，结果表明，丙酸钠是比乙酸钠、丁酸钠、正丙醇更佳的纳他霉素合成前体，乙醇及正丁醇对纳他霉素生物合成无明显促进作用；在发酵24h时向发酵培养基中添加0．6％的丙酸钠．纳他霉素产量达3014．43mg／L，与不添加前体相比提高了185.8％，具有较好的工业应用价值。     

棒状链霉菌中lat基因的置换与克拉维酸的选择性生产

目的提高棒状链霉菌的克拉维酸生产能力 ,去除副产物头霉素C。方法将安普霉素抗性基因片段插入到 4 7kb的lat pcbAB基因片段中 ,采用接合转移方法对棒状链霉菌中头霉素C生物合成的关键基因lat基因进行了置换。结果与结论经PCR验证 ,染色体上正常的lat pcbAB基因被插入失活的基因所替代。对重组菌株的发酵产物进行HPLC检测 ,发现所有的重组菌株均不再合成头霉素C ,并且重组菌株C35 85 lat ::apr、C2 5 1 lat::apr和C16 6 lat::apr的克拉维酸产量较出发菌株分别提高了 2 6 7 6 8%、4 3 6 9%和 35 0 5 %。结果表明基因插入失活是去除多余组分 ,提高目标组分产量的可行途径     

透明颤菌血红蛋白基因在龟裂链霉菌中的表达及其对土霉素合成的影响

目的 考察透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠埃希菌(E. coli)和龟裂链霉菌(S. rimosus)中的表达，研究在不同溶氧条件下表达的透明颤菌血红蛋白(VHb)对龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响。方法 将vgb插入表达型质粒pET-28a中，导入E. coli BL21(DE3)用以表达VHb并测定其活性。以整合型质粒pSET152为载体，利用ermE*启动子组成型表达vgb基因，将构建的质粒通过接合转移整合到S. rimosus M4018基因组上，利用CO差示光谱法和SDS-PAGE鉴定两个重组菌中的血红蛋白。在5L罐上考察不同溶氧条件下VHb的表达对重组龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响。结果 重组大肠埃希菌和重组龟裂链霉菌都能够表达具有生物活性的VHb，发酵结果表明，在117h时与对照菌相比，重组龟裂链霉菌在高氧和低氧条件下的干重分别提高了6%和32%，同时单位干重土霉素的产量分别提高了41%和93%。结论 VHb在重组龟裂链霉菌中成功表达，改善了菌体的生长和土霉素的合成，为解决工业发酵过程中氧限制问题提供了策略。