PCNA、Survivin蛋白在人绒癌细胞株BeWo合体化过程中表达变化的研究

目的:通过检测人绒癌细胞株Be Wo合体化过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化,探讨滋养细胞合体化后增殖性的变化,为恶性滋养细胞肿瘤,尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的临床治疗提供新的思路和方法。方法:利用毛喉素(forskolin)诱导Be Wo细胞株融合;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测促融素(Syncytin)在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用蛋白质印迹(Western blotting)检测PCNA、Survivin蛋白在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用噻唑蓝比色分析实验(MTT)法检测forskolin作用不同时间的绒癌细胞株Be Wo的增殖能力。结果:1forskolin作用后的Be Wo细胞株Syncytin基因的表达增强,且随着forskolin作用时间的延长,Syncytin的表达更强,于48 h达到高峰。2forskolin作用后的Be Wo细胞株PCNA、Survivin蛋白的表达降低。3forskolin作用后的Be Wo细胞株的增殖能力下降,且不同作用时间的差异有统计学意义;forskolin作用的时间越长,Be Wo细胞株增殖能力下降越明显。结论:人绒癌细胞株Be Wo合体化后PCNA、Survivin蛋白的表达降低,说明人绒癌细胞株Be Wo合体化后增殖性降低,推测诱导滋养细胞合体化可能对临床治疗恶性滋养细胞肿瘤具有一定作用。     

胃癌CHFR基因异常甲基化对微管抑制剂临床疗效的重要影响

背景：该研究了胃癌中有丝分裂前期检查点（CHFR）的基因甲基化水平及其与微管抑制剂（MI）疗效的相关性。方法：选取46份胃癌切除术标本，检测其中9份标本的细胞系，启动子甲基化采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测，CHFR mRNA的表达水平通过定量逆转录PCR检测，MI介导的生长抑制反应通过标准的MTT方法检测。结果：在9份胃癌细胞系中，有3份细胞系的CHFR表达被异常的启动子甲基化所抑制，CHFR mRNA的表达水平与MI处理细胞（R=M10．889；P=0．005）的IC，o密切相关。在46例胃癌术后患中，有24例（52％）出现CHFR异常甲基化，其中12例因晚期肿瘤或术后复发而接受MI治疗。MI治疗有效包括29％的CHFR甲基化和20％的CHFR非甲基化患。然而，在7例CHFR甲基化患中，有6例（86％）出现肿瘤消退或不再进展的迹象。反之，在5例CHFR非甲基化患中有4例（80％）出现病情恶化。     

人透明软骨抗OS-732细胞系浸润的研究——细胞培养及透射电镜观察

本文研究成骨肉瘤OS-732细胞系浸润软骨的机理,指出经盐酸胍处理后的软骨可被瘤细胞所浸润,这些浸润细胞在电镜下见其有生长、代谢旺盛的特点,提示正常软骨内含有抑制肿瘤细胞浸润的因子存在。     

079 扫描新的分子结构及药物靶点

ZiPA-FtsZ抑制剂 原核微管蛋白类似物FtsZ是G^-和G^＋菌细胞分裂过程中一种必需蛋白。在细胞分裂中起着重要的作用。ZiPA为存在于E．coli中与FtsZ结合的一种蛋白，由于ZiPA是某些G^-菌细胞分裂的必需条件，所以抑制ZiPA-FtsZ的相互作用代表了一类有前途的抗菌作用的新靶标。通过确定的细菌ZiPA，发现小分子FtsZ结合抑制剂，同时在G^-菌中搜寻ZiPA类似物的项目已得到报道。     

转化生长因子β1对人牙髓细胞微丝骨架的重组作用

目的:了解转化生长因子β1(TGF-β1)对人牙髓细胞微丝和微管骨架的作用。方法:I型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞,以20ng/ml的TGF-β1处理细胞,分别在第30min、1、6和24h收集细胞爬片,BODYPY-Phalloidin对微丝作直接荧光染色、Rhodamine RedTM对微管蛋白α(tubulin-α)作间接免疫荧光染色,采用激光扫描共聚焦显微镜观察TGF-β1作用于牙髓细胞后不同时间点微丝和微管的变化情况。结果:TGF-β1作用于人牙髓细胞后,微丝出现解聚重组现象,在30min时间点,肌动蛋白(actin)在细胞膜下聚合成纤维形肌动蛋白F-actin,同时胞质内的F-actin解聚,6h解聚最明显,24h后可见胞质内微丝重组。观察的各时间点,微管结构未见明显解聚重组现象。结论:TGF-β1能够使牙髓细胞微丝骨架重组。     

微管与微管靶点药物

微管靶点药物是抗肿瘤药物的重要组成部分。以往认为此类药物是通过增加或减少细胞的微管束起作用的，现有研究认为，低浓度的微管靶点药物通过抑制微管动力使有丝分裂受阻，细胞凋亡。现就微管及其聚合动力与几种微管靶点药物的不同作用机制作一综述。     

1例紫杉醇用药护理体会

紫杉醇是90年代应用较多的治疗晚期卵巢癌的有效新药。它是一种新型的具有抗微管作用的抗肿瘤药物，是从紫杉的树皮中提取的，它可通过促进纺锤体外微管蛋白亚单位的聚合而促进微管的装配；即使在正常微管装配所需要的介质（如三磷酸鸟甘，GTP）缺失的情况下也可产生这种作用，从而形成稳定的、无功能的微管。通过干扰微管系统中的动态平衡，使细胞停止在细胞周期G2晚期和有丝分裂期，从而抑制了细胞的复制并使神经组织的功能受到损伤。[第一段]     

快速眼动睡眠剥夺后大鼠脑内神经元骨架蛋白及超微结构的变化

目的探讨经历不同时间快速眼动（REM）睡眠剥夺对大鼠皮质及海马各区神经元形态结构的影响。方法选择微管相关蛋白（MAP2）和神经丝（NF）作为正常神经元结构的标识物，利用免疫组织化学法和Western blot技术观察REM睡眠剥夺1、3、5、7 d4个时间点大鼠皮质及海马MAP2和NF表达的时空变化规律。同时运用电镜技术观察睡眠剥夺后神经元超微结构的变化。我们的实验是用改良的多平台睡眠剥夺模型进行REM睡眠剥夺，结合免疫组织化学染色技术和蛋白质电泳以及电镜超微结构分析。结果REM睡眠剥夺后5d大鼠皮质、海马CA1及齿状回神经元结构蛋白MAP2和NF表达较对照组明显减少（P〈0．05）；电镜神经元核仁偏位，胞质中出现少量肿胀的线粒体和内质网；部分神经轴突的髓鞘溶解与浓集。环境对照组、REM睡眠剥夺5d和7d组，皮质中超微结构改变的神经元所占比例分别为1．2％、3．6％和5．8％。结论REM睡眠剥夺能够导致大鼠脑内神经元的超微结构发生异常变化。     

JWA 蛋白与α-微管蛋白结合和对微管稳定性的调节

目的：探讨了JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布和相互关系，特别是在有丝分裂过程中的动态变化及与微管蛋白的关系。方法：用荧光显微镜技术研究低温处理、处理后恢复的NIH3T3细胞JWA蛋白和微管蛋白的相互作用：用激光共聚焦技术检测NIH3T3细胞的JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布。结果：JWA蛋白在细胞内与α-微管蛋白的分布基本平行。结论：JWA蛋白，作为一种新的微管相关蛋白，在微管动力学变化过程和有丝分裂过程中与α-微管蛋白有交互作用，与α-微管蛋白结合，可能对微管稳定性起一定的调节作用。     

碱性成纤维细胞生长因子治疗猫急性脑梗死的作用机制研究

目的:观察碱性成纤维生长因子(bFGF)处理的缺血再灌注不同时程的猫脑组织中微管相关蛋白(MAP-2)和神经丝蛋白(NTP)的表达,探讨bFGF治疗缺血性脑损伤的可能作用机制。方法:健康家猫30只,随机分为生理盐水对照组和bFGF治疗组。采用左侧眼眶入路制作大脑中动脉缺血再灌注模型。于术前和再灌注24h、48h和7d,采用Philip的猫脑缺血神经功能评分标准进行神经功能缺损评分;应用免疫组织化学SP法检测缺血再灌注不同时程的脑组织MAP-2及NTP蛋白表达,进行免疫阳性细胞计数。结果:缺血再灌注48h后,治疗组动物神经功能受损程度较对照组明显减轻,MAP-2及NTP蛋白阳性细胞数目较对照组也显著增加。结论:bFGF通过诱导MAP-2及NTP蛋白的表达,减轻了缺血再灌注脑组织的神经元损伤和促进了神经纤维生长,从而改善受损的神经功能。