应激活化蛋白激酶信号通路及其靶基因对氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

背景 白内障的发生与氧化应激诱导的晶状体上皮细胞(LECs)凋亡有关,而BH3-only蛋白是凋亡机制启动的关键因素,其过程可能与c-Jun N末段激酶(JNK)通路激活有关,但氧化应激诱导的LECs凋亡与JNK通路的关系尚未完全阐明.目的 探讨JNK/c-Jun通路及其靶基因Bim与PUMA在氧化应激诱导的LECs凋亡中的作用.方法 将人LECs系HLEC-B3在含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基中培养和传代.将80％融合的细胞接种在24孔板并随机分为无H2O2或H2O2(50 μmol/L)处理4、8、12h组,Hoechst 33258染色观察细胞形态并计数细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组HLEC-B3细胞中JNK/c-Jun通路的激活情况和Bim、PUMA蛋白的表达水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测c-Jun、Bim、PUMA mRNA在HLEC-B3细胞中的表达.在H2O2处理的细胞培养基中加入JNK/c-Jun通路抑制剂CEP11004或SP600125处理4h,以无H2O2或H2O2+DMSO处理的细胞分别作为阴性和阳性对照组,Hoechst 33258染色观察各组LECs的凋亡情况并检测JNK/c-Jun通路的激活情况和Bim、PUMA蛋白的表达.当培养细胞达60％融合时,将200 pmol/L的Bim或PUMA小分子干扰片段转染细胞24 h,然后用H2O2处理细胞采用Western blot法和RT-PCR法检测Bim、PUMA蛋白及其mRNA在HLEC-B3细胞中的表达.结果 H2O2处理HLEC-B3 4、8、12h后,其细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义(F=1909.433,P=0.000),H2O2处理HLEC-B3 4、8、12h细胞凋亡率分别为(4.30±1.15)％、(27.08±0.74)％和(46.59±0.91)％,与无H2O2处理组(2.74±0.21)％比较差异均有统计学意义(P=0.049、0.000、0.000).与无H2O2处理组比较,不同时间H2O2处理组JNK/c-Jun通路的激活和Bim、PUMA蛋白及其mRNA在HLEC-B3细胞中的表达强度均明显增加;加入CEP11004或SP600125后,上述因子表达下调,与DMSO培养组比较凋亡率显著下降,差异均有统计学意义(均P=O.000).转染Bim或PUMA小分子干扰片段后,H2O2处理HLEC-B3 12 h组的细胞凋亡率明显高于Bim基因敲除组和PUMA基因敲除组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 H2O2诱导JNK激活并引起Bim、PUMA和c-Jun蛋白及其mRNA表达上调,其作用呈时间依赖性;抑制JNK/c-Jun通路及干扰Bim或PUMA的表达能对H2O2诱导的人LECs的凋亡起保护作用.     

程序性死亡因子1及其配体在糖尿病视网膜病变患者外周血单个核细胞中的表达

目的 观察程序性死亡因子1(PD1)及其配体PD-L1和PD-L2在糖尿病视网膜病变(DR)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达.方法 临床检查确诊为DR的40例患者(DR组)以及同期行体检的健康志愿者20名(对照组)纳入研究.DR组40例患者中,非增生型DR(NPDR)20例,增生型DR(PDR) 20例.抽取两组受检者晨起空腹静脉血2 ml,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测PD-1、PD-L1、PD-L2 mRNA的表达水平.对比分析DR、对照组之间,PDR与NPDR组之间各指标表达水平的差异.结果 荧光定量PCR检测发现,DR组患者PBMCs中PD-1、PD-L1 mRNA相对表达量显著低于对照组,差异有统计学意义(t=-2.060,-2.562;P=0.043,0.013);PD-L2 mRNA相对表达量较对照组无明显变化,差异无统计学意义(t=-0.857,P=0.395).PDR组患者PBMCs中PD-1 mRNA相对表达量较NPDR组有降低趋势,PD-L1、PD-L2 mRNA相对表达量有升高趋势,但差异均无统计学意义(t=-1.335,0.987,0.131;P=0.190,0.334,0.897).结论 DR患者PBMCs中PD-1、PD-L1 mRNA相对表达较正常者低,PD-L2 mRNA相对表达较正常者无明显变化.     

关注糖尿病视网膜病变的信号通路研究 指导糖尿病视网膜病变的靶向治疗

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病患者视力损害的主要原因.近年来,DR相关信号通路的研究更好地揭示了DR的发病机制,为DR的临床治疗研究提供了新的思路,为开发靶向治疗的药物提供了理论依据.阐明生物信号通路在DR发生和发展中的生物学功能,有助于临床医师正确进行医疗决策,选择性、针对性地对其进行干预,大大改善DR的治疗效果.如何在医疗实践中将信号通路的研究和靶向治疗结合起来是推进DR治疗的重要环节.因此我们应注重转化医学研究,重视信号通路研究对靶向治疗的引导作用,使医学基础研究与临床应用研究有机结合起来.     

HER-2表达与乳腺癌超声造影及声脉冲辐射力成像表现的关联性研究

目的探讨HER-2表达水平与乳腺癌超声造影(CEUS)及声脉冲辐射力成像(ARFI)表现的关联性。方法 108例乳腺癌患者术前进行CEUS及ARFI检查,术后对其肿块进行HER-2表达水平的测定,分析HER-2表达水平与乳腺癌CEUS以及ARFI的关系。结果 (1)不同HER-2表达水平组超声造影的造影剂分布、穿支血流、超范围、灌注缺损以及TIC曲线的峰值时间、上升支斜率、曲线下面积的差异具有统计学意义(P0.05)。(2)不同HER-2表达水平组的VTQ表现上差异有统计学意义(P0.05)。(3)CEUS的增强强度、峰值强度及ARFI的VTI技术与HER-2表达水平的比较上,差异无统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌CEUS及ARFI表现与HER-2表达水平之间存在一定的关联性,主要反映在灌注缺损、穿支血流、VTQ等。     

褪黑素抗人晶状体上皮细胞焦亡作用及其机制

目的:探讨褪黑素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)焦亡的影响及其机制。 方法:取传代培养的HLECs分为5个组,其中正常对照组常规培养,模型对照组于100 μmol/L H 2O 2条件下培养,褪黑素组、维生素E组和维生素E溶剂组分别...     

糖尿病黄斑水肿患者白内障围手术期应用抗VEGF药物的疗效观察

目的 观察糖尿病黄斑水肿(DME)患者真实世界中白内障手术前后玻璃体内注射抗血管内皮生长因子(VEGF)药物的效果,进而观察DME患者白内障围手术期积极接受玻璃体内注射抗VEGF药物疗效.方法 回顾性临床队列研究.回顾性分析2018年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院眼二科接受白内障超声乳化手术和玻璃体内注射抗...     

PUMA介导氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡

目的探讨PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelialcell,HLEC)凋亡中的作用。方法体外培养的HLEC-B3,用50μmol·L-1H2O2刺激不同的时间后,Hoechst33258染色,凋亡细胞呈核固缩、碎裂形态,计数细胞凋亡率;采用West-ern blot方法检测PUMA及Caspase-3蛋白的表达水平。采用RT-PCR方法检测PUMAmRNA表达水平;设计合成针对人PUMA基因的小干扰片段(siPUMA1、siPUMA2)和一条阴性对照,用lipofectamine2000转染细胞后,验证干扰有效性,观察其对氧化应激诱导的HLEC凋亡的影响。结果 H2O2刺激HLEC4h、8h、12h后,细胞凋亡率分别为3.30%±0.25%、27.16%±0.31%、48.14%±0.57%,凋亡相关蛋白Caspase-3发生时间依赖的表达上调。H2O2可诱导PUMA mRNA及蛋白质表达上调。干扰PUMA的表达能减少H2O2诱导的细胞凋亡,H2O2处理HLEC-B312h后细胞凋亡率为48.24%±0.84%,而敲除PU-MA的表达后细胞凋亡率显著降低为13.72%±1.06%(siPUMA1)和17.56%±0.51%(siPUMA2)。结论 PUMA介导了H2O2诱导的HLEC凋亡,可能在白内障的发生发展中发挥重要作用。     

瞳孔成形术的临床观察

目的 评价瞳孔成形术在眼外伤修复中的作用.方法 回顾性分析我院自2011年2月至2012年2月诊治的伴有虹膜瞳孔损伤的18例(18眼)临床资料.均为眼外伤导致的伴有虹膜瞳孔异常的白内障、晶状体脱位患者,并行瞳孔成形联合白内障摘出人工晶状体植入和(或)前段玻璃体切除术.术后随访2～6个月.结果 术后18眼视力均提高;患眼瞳孔呈圆形或类圆形,瞳孔位于中央或近中央16眼,瞳孔偏位2眼.术中前房积血2眼;术后曾有眼压升高6眼.结论 瞳孔成形术能够恢复虹膜完整性,提高视力和视觉质量,减少并发症的发生,在眼外伤修复中具有重要作用.     

瞳孔成形术的临床观察

目的评价瞳孔成形术在眼外伤修复中的作用。方法回顾性分析我院自2011年2月至2012年2月诊治的伴有虹膜瞳孔损伤的18例（18眼）临床资料。均为眼外伤导致的伴有虹膜瞳孔异常的白内障、晶状体脱位患者,并行瞳孔成形联合白内障摘出人工晶状体植入和（或）前段玻璃体切除术。术后随访2～6个月。结果术后18眼视力均提高;患眼瞳孔呈圆形或类圆形,瞳孔位于中央或近中央16眼,瞳孔偏位2眼。术中前房积血2眼;术后曾有眼压升高6眼。结论瞳孔成形术能够恢复虹膜完整性,提高视力和视觉质量,减少并发症的发生,在眼外伤修复中具有重要作用。     

地塞米松玻璃体腔植入剂治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变

目的:探究地塞米松玻璃体腔植入剂(DEX)治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的效果和安全性,以及不同病程的应答反应。方法:回顾性研究。纳入2018-01/2020-12在郑州大学第一附属医院诊断为NAION的患者70例70眼,根据治疗方式不同分为两组,常规治疗组35例35眼仅接受常规注射用甲泼尼龙琥珀酸钠冲击、改善微循环和营养神经治疗,联合治疗组35例35眼接受常规治疗联合DEX治疗。比较两组患者以及不同病程的患者治疗前和治疗后3mo最佳矫正视力(BCVA)、平均视野缺损(MD)、模式标准差(PSD)、视盘视网膜神经纤维层平均厚度(RNFL)和眼压。结果:两组患者治疗后3mo BCVA和MD较治疗前均改善(P<0.05),联合治疗组治疗前后PSD无差异(P>0.05),常规治疗组较治疗前恶化(P<0.05)。联合治疗组治疗后3mo BCVA和MD及PSD较常规治疗组改善(P<0.05),联合治疗组治疗后3mo总有效率较常规治疗组高(P<0.05),两组治疗后3mo RNFL平均厚度无差异(P>0.05)。在病程≤15d患者中,联合治疗组...