日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的模拟抗原在成虫,虫卵？…

应用免疫组化和免疫电镜技术观察了日本血吸虫单克隆ａｎｔｉ－ａｎｔｉ－ｉｄ ＮＰ３０的模拟抗原在成虫、虫卵的分布和定位。单克隆ａｎｔｉ－ｉｄＮＰ４１作为第一抗体。实验结果表明，ＮＰ３０的模拟抗原定位于成虫的体膜、消化管上皮、子宫内膜上皮及虫卵的卵膜。提示ＮＰ３０的模拟抗原具有其共同抗原的特性，ＮＰ３０具有作为抗病疫苗候选分子的潜能。     

胃癌组织中nm23蛋白表达与微血管密度及其转移的关系研究

目的探讨胃癌组织中nm23蛋白的表达与癌组织微血管密度与转移的关系.方法用免疫组织化学LSAB方法检测85例胃癌癌组织微血管(MVD)及mn23蛋白的表达;在第Ⅶ因子相关抗原(FⅦRAg)染色切片上检测其微血管密度.结果nm23表达阳性淋巴结转移率明显低于nm23表达阴性组,而且差异有显著性.nm23表达阳性组与阴性组比较,nm23表达与MVD呈负相关.结论nm23基因受抑制时,MVD增加,淋巴结转移率增高.因此时nm23及MVD的检测,可作为预测胃癌转移及判断预后的可靠指标之一.     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导保护性免疫

作者应用正交设计观察了单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫诱导的保护性免疫力。对照组接种SP2/0 腹水。实验结果表明,根据不同的免疫方案,NP30主动免疫可产生22.36％～50.46％的减虫率,并确定了最优化免疫方案。本文提示NP30主动免疫对尾蚴攻击可产生一定的保护力,具有血吸虫疫苗候选分子的潜能。     

Preliminary study on immunotoxin for the prevention of Schistosomiasis japonica

Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ (ｂｉｏ ｍｉｓｓｉｌｅ)ｏｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ ＴｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙＮＰ11 4 ,ｌｏｃａｔｅｄｉｎｏｕｔ ｌａｙｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｏｆａｄｕｌｔｗｏｒｍ ,ｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｃｅｒｃａｒｉａｅ ,ｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｕｌａ ,ｓｈｅｌｌｏｆｅｇｇａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｍｉｒａｃｉｄｉｕｍｉｎｅｇｇ ,ｗａｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈａｒｔｅｓｕｎａ…     

脊髓损伤后bFGF和GFAP的变化及其意义

目的：研究脊髓损伤后碱性成纤维细胞因子和胶质纤维酸性蛋白的变化及其两者的相关性,探讨脊髓损伤后脊髓的自身保护机制以及星形胶质细胞在脊髓损伤中的作用。方法：用免疫组织化学,组织学染色和图像分析的方法检测损伤脊髓碱性成纤维细胞及胶质纤维酸性蛋白表达的动态变化。结果：脊髓损伤后1d损伤脊髓中碱性成纤维细胞的表达明显增高,7d达到高峰,14d末回落,而胶质纤维酸性蛋白表达则在1－14d内呈进行性增高趋势,两指标相关性显著（r=0.777,P=0.001),结论：脊髓损伤后反应性星形细胞胶质化对脊髓的再生和自身修复起着重要作用,提示脊髓本身存在自身保护机制。     

日本血吸虫单克隆抗独特抗体NP30对山羊的保护性免疫作用

目的 观察日本血吸虫克隆抗独特型抗体ＮＰ３０主动免疫对山羊的保护性免疫作用。方法 将２２只山羊随机分为两组：（１）实验组：１２只,每只山羊 ＮＰ３０的免疫剂量为１０００μｇ／次,后腿肌肉注射,连续免疫３次,最后１一８周进行尾蚴攻击。（２对照组：１０只,肌肉注射ＳＰ２／０４腹水。尾蚴攻击感染后第１２ 睛死。结果 ＮＰ３０主动免疫山羊可放 减虫率,肝组织减弱率为３５．８３％,粪减卵率为２５％,并可明显     

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达

目的：应用抑制差减杂交技术（supression subtractive hybridization,SSH）结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因.进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白（annexinⅡ）在肝细胞中的表达及作用.方法：以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因.进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达.结果：成功构建了肝细胞癌差减杂交文库.芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实.免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达（P＜0.05）.在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势.结论：SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因.肝细胞癌中高表达基因annexin Ⅱ可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关.     

人源日本血吸虫Fab抗体库的构建及抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建人源日本血吸虫Fab抗体库,筛选出日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:以3名晚期血吸虫患者切除的脾脏为源,构建人源日本血吸虫Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,库容为4.3×106,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过5轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取60个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(A3、B6、C4、C17),其中B6经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体B6,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。     

炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析

目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响

目的:制备重组慢病毒载体pLMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖?迁移?侵袭的影响?方法:利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表达载体plv-GFP中,通过酶切?测序验证,将重组慢病毒载体pLMP2A与包装质粒pdelta-8.91?pVSVG共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌细胞CNE1,经单克隆筛选后,用RT-PCR?免疫荧光和Western blot检测LMP2A在人鼻咽癌细胞CNE1的表达,CCK8法检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响,划痕实验?Transwell侵袭实验检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭的影响?结果:酶切及测序结果表明,成功制备了重组慢病毒载体pLMP2A;RT-PCR?Western blot?免疫荧光结果显示筛选出的细胞克隆能高表达EBV-LMP2A,CCK8结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1增殖,划痕实验结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1迁移,Transwell侵袭实验结果显示LMP2A能提高人鼻咽癌细胞CNE1侵袭能力?结论:成功制备了慢病毒载体pLMP2A,包装的慢病毒能够成功感染人鼻咽癌细胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表达,并发现LMP2A能够促进人鼻咽癌细胞株CNE1增殖?迁移?侵袭,为进一步探讨EB病毒在鼻咽癌中的发病机制及基因治疗奠定了基础?