| 炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析 |
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| 引用本文： | 许小明,郑 峰,周婷婷,熊四平,刘 鹏,王长军,冯振卿,周 玮,朱 进.炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析[J].南京医科大学学报,2015(3):340-345. |
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| 作者姓名： | 许小明 郑 峰 周婷婷 熊四平 刘 鹏 王长军 冯振卿 周 玮 朱 进 |
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| 作者单位： | 蚌埠医学院附属解放军第八二医院内分泌科,江苏 淮安 223001;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002;南京医科大学病理学系,江苏 南京 210029;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002;南京医科大学病理学系,江苏 南京 210029;蚌埠医学院附属解放军第八二医院内分泌科,江苏 淮安 223001;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002;南京医科大学病理学系,江苏 南京 210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31170884);江苏省自然科学基金项目(BK2012527) |
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| 摘 要： | 目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。
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| 关 键 词： | 炭疽 致死因子 表达 活性分析 |
| 收稿时间： | 2014/8/11 0:00:00 |
Preparation and activity analysis of truncated anthrax lethal factor 253 |
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| Xu Xiaoming,Zheng Feng,Zhou Tingting,Xiong Siping,Liu Peng,Wang Changjun,Feng Zhengqin,Zhou Wei and Zhu Jin.Preparation and activity analysis of truncated anthrax lethal factor 253[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2015(3):340-345. |
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| Authors: | Xu Xiaoming Zheng Feng Zhou Tingting Xiong Siping Liu Peng Wang Changjun Feng Zhengqin Zhou Wei and Zhu Jin |
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| Institution: | The 82nd Hospital of PLA Affiliated to Bengbu Medical College,Huaian 223001;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002;Department of Pathology,NJMU,Nanjing 210029,China;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002;Department of Pathology,NJMU,Nanjing 210029,China;The 82nd Hospital of PLA Affiliated to Bengbu Medical College,Huaian 223001;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002;Department of Pathology,NJMU,Nanjing 210029,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | anthrax lethal factor expression activity analysis |
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