骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠的实验研究

目的　研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠 (mdx鼠 )的效果。方法　取 4～ 5周龄昆明鼠骨髓干细胞 ,体外培养 3d ,静脉移植到 7Gyγ射线预处理 7～ 8周龄mdx鼠体内。临床监测受体鼠移植物抗宿主病 (GVHD)表现 ,并对移植 12周mdx鼠的运动功能、肌电生理、dystrophin蛋白表达情况进行检测。 结果　 5只 7Gy剂量放疗mdx鼠 ,静脉移植 4 8× 10 6骨髓干细胞 ,3个月后 ,肌电图指标有了部分改善 ;10 %肌纤维表达了dystrophin蛋白。结论　静脉移植同种非同系鼠骨髓干细胞治疗mdx鼠有效 ,显示骨髓干细胞移植治疗DMD有着理想的前景。     

Duchenne 型肌营养不良模型鼠骨髓移植后的行为学观察

目的确立Duchenne型肌营养不良模型鼠(mdx鼠)骨髓移植前的有效放疗剂量，观察不同数量、不同成分的骨髓细胞对受体mdx鼠造血功能的重建和保护作用。方法用不同数量的体外培养6～8周C57BL/6雄鼠的骨髓细胞、骨髓基质细胞、骨髓悬浮细胞，经鼠尾静脉注射给不同剂量放疗后的mdx鼠，观察受体鼠的存活率及行为学改变。结果10只mdx鼠移植前3天12Gyγ射线照射，在移植后7天内全部死亡，且注射细胞数较多者，存活时间相对较长，而8Gyγ射线照射的6只mdx鼠，移植后30天5例存活，1例死亡。结论本实验条件下，移植前8Gyγ射线放疗较合理，在有效剂量放疗破坏受体骨髓造血系统后，移植同系鼠的骨髓细胞、基质细胞、悬浮细胞，mdx鼠均能耐受并存活，且以移植细胞数量为1×10     

干细胞移植前TX小鼠有效放疗剂量的探索

目的探索TX小鼠适合的干细胞移植前的放疗剂量,为细胞移植治疗用于WD动物模型提供优良的预处理方案。方法雌性7~8周龄TX小鼠分组接受8Gy、7Gy、6Gy和5Gyγ射线放疗,后接受DL雄性小鼠骨髓干细胞移植,移植后追踪12周考察受体鼠的一般情况,移植物抗宿主病(GVHD)、肝功能、血清铜蓝蛋白和供体细胞在受体鼠肝脏存活情况。结果8Gy组和7Gy组100%、6Gy组50%动物于移植后2周内死亡;5Gy组动物12周内完全存活,且GVHD反应轻微,移植后12周时肝功能和铜蓝蛋白较6Gy组改善更明显;从供体细胞在受体鼠肝脏中的存活情况来分析,5Gy和6Gy组间相比无统计学意义。结论TX小鼠模型用于细胞移植研究的适合预处理放疗剂量是5Gy。     

Micro-dsytrophin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植后mdx鼠腓肠肌病理改变及micro-dystrophin的表达

目的探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带micro-dystrophin基因在移植鼠体内分化为有功能肌细胞的可能性。方法采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs,通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,在移植后不同时间点对腓肠肌进行HE染色、计数核中心移位纤维(CNF)比例,并用免疫荧光法检测micro-dystrophin的表达。结果移植后各时间点腓肠肌病理改变较对照组有所改善,CNF比例下降,差异有统计学意义,部分肌细胞膜能表达micro-dystrophin蛋白,并随移植时间延长micro-dystrophin阳性肌纤维比例增加,分别达到3%(8周时)、6%(12周时)和8%(16周时)。结论自体mMSCs可携带外源性micro-dys-trophin基因在受体鼠体内分化为micro-dystrophin阳性肌细胞。     

Duchenne肌营养不良模型鼠骨髓移植后dystrophin的表达

目的　观察Duchenne型肌营养不良模型鼠 (mdx鼠 )不同成分骨髓细胞移植后dystrophin的表达。方法　用体外培养的C57BL雄鼠的骨髓细胞、骨髓悬浮细胞、骨髓基质细胞分别经鼠尾静脉注射到放疗后的mdx鼠体内 ,动态观察受体雌性mdx鼠骨骼肌dystrophin的表达 ,并取受体mdx雌鼠血 ,用聚合酶链反应进行Sry基因检测。结果　骨髓细胞、悬浮细胞、基质细胞移植后 1～ 2个月 ,较少肌纤维表达dystrophin(<1 % ) ,3～ 4个月分别约有 7%、6 %、4 %的肌纤维表达dystrophin。Sry基因检测均扩增出受体雌鼠Y染色体上 449bp的DNA片段 ,提示供体细胞在受体内存活。结论　骨髓细胞、悬浮细胞、基质细胞分别移植到mdx鼠体内后 ,mdx鼠骨骼肌均有dystrophin的表达     

骨髓移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型鼠后dystrophin相关蛋白表达

目的观察骨髓移植治疗Duchenne型肌营养不良症(DMD)模型鼠—mdx鼠后，β-dystroglycan和α-sarcoglycan在肌膜上的表达情况。方法以正常C57鼠作为供体，以mdx鼠作为受体进行骨髓移植，在移植后2、4、6个月分别进行mdx鼠骨骼肌的β-dystroglycan和α-sarcoglycan免疫荧光染色，计算阳性细胞的荧光积分光密度，与C57鼠及未移植的mdx鼠进行比较。结果在骨髓移植后2、4、6个月mdx鼠骨骼肌肌膜上β-dystroglycan和α-sarcoglycan的表达量均有随时间的延长逐渐增加的趋势．至移植后6个月时，二者的表达量明显高于未治疗的mdx鼠。结论骨髓移植可使mdx鼠的dystrophin相关蛋白在病损骨骼肌细胞膜上表达增加．其对维持肌膜的稳定性、促进肌肉的恢复有重要意义。     

mdx鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及向肌细胞的诱导分化

背景：自体干细胞移植治疗可以克服异体干细胞移植治疗的局限性,但目前对于进行性肌营养不良模型mdx鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及肌分化潜能研究未见报道。 目的：拟建立体外分离培养mdx鼠骨髓间充质干细胞的方法,并观察其成肌分化能力。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2006-01/07在中山大学附属第一医院神经病学实验室完成。 材料：4~6周龄纯系雄性mdx鼠10只,购自美国Jackson实验室,饲养于中山大学北校区动物实验中心。碱性成纤维细胞生长因子和兔抗鼠MHC抗体为Chemicon公司产品。 方法：全骨髓法体外分离mdx鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁法纯化扩增,胰酶+EDTA消化传代。取传至第3代的细胞,按1×104/孔接种于24孔板,置于含两性霉素B、碱性成纤维细胞生长因子、胎牛血清的DMEM培养基中向肌细胞方向诱导分化,2周后更换为不含两性霉素B、但添加马血清的DMEM培养基继续培养2周。 主要观察指标：鼠骨髓间充质干细胞形态、表面标志、生长曲线及成肌诱导分化。 结果：原代培养24 h后,鼠骨髓间充质干细胞约80%贴壁生长,第3代细胞多呈梭形,形态比较均一。鼠骨髓间充质干细胞表达CD29和CD44等间质类细胞的表面分子,不表达CD11B和CD45等淋巴造血细胞的表面分子。接种后第一两天细胞处于潜伏期,第3天细胞增殖旺盛,进入对数生长期,至第4天细胞数增长一倍,第5天进入平台期。两性霉素B诱导后细胞有少量死亡,停用后更换马血清促进细胞成肌,7~10 d可见有肌管样细胞形成,免疫荧光染色可见肌管样细胞呈MHC阳性,DAPI复染后可见肌细胞内有多个细胞核。 结论：在两性霉素B与马血清依次诱导条件下,体外可成功分离培养基因缺陷mdx鼠骨髓间充质干细胞,并证明其具有成肌分化潜能。     

骨髓基质干细胞在肌营养不良模型鼠中的分布及移植途径对分布的影响

目的研究干细胞在mdx鼠体内较长时间的动态分布以及移植途径对它的影响。方法用3H-TdR掺入标记骨髓基质干细胞,用4×106个/只静脉及腹腔移植放疗mdx鼠各30只,在24h、48h、2周、1个月、2个月、4个月时间点处死小鼠,取血、心、肝、脾、肺、肾、肌、脑、骨髓消化测定放射计数,计算%ID/g值。结果①静脉移植的mdx鼠脑、骨髓在2周才达到它自身的最高水平,心肌、骨骼肌4个月时达到高峰;而每个时间点各器官含量相比早期基本是肺、肝、骨髓分布多,心肌、肌肉2个月后仅次于骨髓。②腹腔移植mdx鼠血、肺、肾、肝、脾脏、脑到达它各自的高峰比静脉注射均有不同时间延迟,早期还是在骨髓、肝、肺分布多,肌肉2个月后仅次于骨髓。③心、肌肉、脑、骨髓含量静脉移植比腹腔移植高,均具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论干细胞移植mdx鼠后4个月达高峰,移植途径对干细胞的分布有影响,3H-TdR能长时间动态观察干细胞分布。     

mdx小鼠骨骼肌组织成肌、成脂、成骨基因的特异性表达**

背景：干细胞移植是治疗肌营养不良症的有效方法之一,但移植的干细胞在病理骨骼肌中成肌表达较低。 目的：通过比较mdx小鼠和C57小鼠的骨骼肌形态及成肌、成脂、成骨基因表达的差异,探讨mdx小鼠骨骼肌病理改变的可能机制。 方法：取mdx小鼠与C57小鼠的骨骼肌组织行冰冻切片,苏木精-伊红染色和Vonkossa染色观察两种小鼠肌肉组织的形态特征;提取mdx小鼠和C57小鼠骨骼肌组织总RNA,real-time PCR检测成肌、成脂、成骨相关基因的表达。 结果与结论：mdx小鼠骨骼肌有肌纤维坏死和再生,伴有轻度脂肪、纤维结缔组织增生,Vonkossa染色可见钙结节沉积,而C57小鼠的骨骼肌细胞形态清晰,核位于细胞周边。与C57小鼠比较,mdx小鼠肌肉组织成骨、成脂基因表达有不同程度的上调(P < 0.05),而成肌基因表达下调(P < 0.05)。dystrophin基因缺失及成肌基因表达下调、成骨和成脂基因上调是造成mdx小鼠肌肉组织变性坏死的原因。     

Duchenne型肌营养不良症模型小鼠神经肌肉接头特征研究

目的观察Duchenne型肌营养不良症模型小鼠骨骼肌肌膜抗肌萎缩蛋白(dystrophin)表达变化和神经肌肉接头形态,分析其可能机制。方法 C57BL/6和mdx小鼠各8只,HE染色观察肌细胞组织学形态,免疫荧光染色检测腓肠肌肌膜dystrophin蛋白表达变化和神经肌肉接头形态。结果C57BL/6小鼠腓肠肌肌细胞大小基本一致,呈多角形,胞核位于细胞周边、极少数位于肌纤维中心;肌膜均匀表达dystrophin蛋白;神经肌肉接头形态完好。Mdx小鼠腓肠肌肌细胞大小不一致,呈圆形,部分胞核趋中心化;仅少量或个别肌细胞表达dystrophin蛋白;mdx种鼠突触后膜乙酰胆碱受体断裂成小片段,突触前膜神经末梢突起增多、变细,而mdx幼鼠神经肌肉接头形态与C57BL/6小鼠基本一致;mdx小鼠神经肌肉接头数目明显减少,突触前膜和突触后膜横截面积明显减小,肌细胞间神经轴突明显变细。结论Mdx小鼠骨骼肌肌膜dystrophin蛋白缺失并非导致神经肌肉接头改变的直接因素,可能与病情进展有关。     

杆状病毒修饰后的脂肪干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究

目的利用经杆状病毒基因载体系统进行micro-dystrophin基因修饰后的脂肪干细胞(ADSCs)移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型(mdx)鼠,探讨ADSCs移植治疗DMD的安全性及可行性。方法 Mdx鼠60只,分为mdx对照组(30只)和mdx移植组(30只);正常C57小鼠为C57对照组(30只)。体外分离培养小鼠ADSCs,利用杆状病毒基因载体进行micro-dystrophin基因修饰;将基因修饰后的ADSCs经尾静脉移植到mdx鼠体内。于移植后检测mdx鼠的运动功能(采用主动牵引实验和被动转棒实验)、血清CK水平、肌肉病理改变以及肌肉micro-dystrophin表达水平。结果经micro-dystrophin基因修饰的ADSCs移植后,能够重建mdx鼠的micro-dystrophin表达,一定程度上减轻并逆转肌肉的病理损害,进而降低血清CK水平,mdx鼠整体运动功能也有一定改善。结论 ADSCs治疗mdx鼠后,可部分重建模型鼠的dystrophin表达,改善肌肉的病理损害,表明ADSCs是有希望治愈DMD的方法之一。     

Sca-1+造血干/祖细胞重建致死剂量辐射小鼠造血功能的作用**☆

背景：近年来,造血干细胞移植在国内外已广泛开展,移植的造血干细胞能否有效重建造血成为造血干细胞移植领域的研究热点问题之一。 目的：观察Sca-1+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,Sca-1+HSC/HPC)对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。 方法：雌性C57BL/6受体鼠给予致死剂量60Coγ射线照射后分2组,对照组：输注无菌PBS;移植组：移植免疫磁性分选法分离纯化的同系雄性C57BL/6小鼠Sca-1+HSC/HPC;检测受体鼠生存时间;外周血白细胞、红细胞比容、血小板的变化;脾湿质量及脾集落数;PCR检测Y染色体(Sry基因)表达确定受体小鼠重建造血的细胞来源。 结果与结论：移植组受体鼠30 d存活率、白细胞、红细胞比容、血小板、脾湿质量及脾集落数均明显高于对照组(P < 0.05);Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建造血的细胞来源于雄性供体。提示Sca-1+HSC/HPC移植后能重建造血衰竭小鼠造血功能。     

硼中子俘获疗法诱导U87胶质瘤细胞凋亡

目的 探讨硼中子俘获疗法(BNCT)对人脑胶质瘤细胞株U87的增殖抑制和诱导凋亡的作用及可能机制.方法 实验分为未照射组(0 Gy)、γ射线对照组(4、8 Gy)、反应堆组(3.5 Gy)、BNCT组(4、8 Gy).采用形态观察、流式细胞仪Annexin V/PI荧光染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法等方法观察BNCT对U87细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,以免疫组织化学技术检测P53蛋白的表达,应用western blot检测BCL-2、BAX蛋白表达的变化.结果 硼中子照射后细胞出现典型的凋亡形态改变.BNCT 4、8 Gy组处理后48 h细胞的凋亡率分别为65.1%、85.9%.BNCT 4、8 Gy组细胞生长抑制作用显著高于同等剂量的γ射线照射组(P＜0.01).未照射的U87细胞P53蛋白表达阴性,BNCT4、8 Gy照射后P53蛋白表达阳性.BNCT4、8 Gy照射后BCL-2蛋白表达下降,BAX蛋白上升.结论 BNCT对U87细胞具有显著的增殖抑制作用,并有剂量、时间依赖性特点.     

小鼠脂肪源间充质干细胞在重型再生障碍性贫血中的应用

背景：骨髓间充质干细胞联合造血干细胞移植是最有希望解决造血重建缓慢的策略之一，但临床实施中，抽取骨髓进而分离、扩增间充质干细胞尚不能为大部分健康供者所接受。 目的：探讨小鼠脂肪源间充质干细胞对异基因重型再生障碍性贫血模型鼠造血功能的影响。 设计、时间及地点：细胞学体内实验，于2007-05/11在河南省肿瘤医院中心实验室完成。 材料：雄性6~8周龄BALB/c（H-2Kd）小鼠20只，雌性7~8周龄C57BL/6（H-2Kb）小鼠50只，均购于河南省实验动物中心。 方法：贴壁法体外分离培养20只雄性BALB/c小鼠脂肪源间充质干细胞；反复吹打20只雌性C57BL/6（H-2Kb）小鼠骨髓细胞，加入EDTA-NH4Cl液去除红细胞，即为骨髓有核细胞。剩余30只雌性C57BL/6（H-2Kb）小鼠均给予一次全身3.0 Gy 60Co-γ照射，照射后第4，5，6天皮下注射环磷酰胺及氯霉素，建立重型再生障碍性贫血模型。模型鼠随机分为3组，联合组经尾静脉输入骨髓有核细胞2×107个+脂肪源间充质干细胞3×106个，骨髓有核细胞组单纯输入骨髓有核细胞2×107个，对照组输入生理盐水0.2 mL，10只/组。 主要观察指标：定期检测外周血和股骨有核细胞数以及巨噬细胞/粒细胞集落形成单位数的变化，PCR法鉴定Y染色体，流式细胞仪检测移植小鼠骨髓及脾脏CD3和H-2Kd阳性表达情况。 结果：细胞移植后第2周，联合组外周血有核细胞数、股骨有核细胞数、巨噬细胞/粒细胞集落形成单位数均明显高于骨髓有核细胞组（P < 0.05），且随移植时间的延长，各种细胞数量逐渐恢复（P < 0.05）。细胞移植后第4周（即造血恢复期），联合组外周血可特异性地扩增Y染色体的SRY基因片段，移植小鼠骨髓及脾脏中CD3和H-2Kd双阳性细胞达6.66%，提示在受体小鼠体内有供体细胞的存在。 结论：脂肪源间充质干细胞能够重建重型再生障碍性贫血小鼠的造血功能，促进小鼠造血系统的恢复。     

Duchenne肌营养不良模型鼠基因型及肌肉病理的研究

目的研究Duchenne肌营养不良(DMD)模型鼠mdx基因型及肌肉病理改变。方法分别采用光镜、免疫荧光、EvansBlue染料、电镜等方法研究mdx小鼠与正常对照组C57/BL6小鼠腓肠肌病理改变,并检测mdx小鼠的基因型。结果经Dys-3、δ-sarcoglican抗体染色后mdx小鼠肌膜基本未见绿色荧光,正常对照组C57/BL6小鼠肌膜呈明显网状绿色荧光;荧光显微镜观察EvansBlue红色荧光染料,mdx小鼠肌纤维呈明显红色荧光,而肌膜完整的正常对照组C57/BL6小鼠肌纤维不摄取红色荧光染料。mdx模型鼠肌丝排列紊乱,方向不一,肌细胞核位于肌纤维中央,Z盘模糊,肌膜局部不连续,C57/BL6小鼠肌丝排列整齐,Z盘清晰可见。结论mdx小鼠以肌纤维变性、坏死为特征,肌细胞膜缺损是mdx小鼠主要病理改变之一。mdx小鼠dystrophin基因缺陷同时伴有dystrophin相关蛋白缺失,mdx小鼠肌肉病理为DMD进一步治疗研究奠定了基础。     

骨髓基质细胞条件液联合神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为认知功能的影响：效果优于单纯神经干细胞移植吗？

背景：将骨髓基质细胞和神经干细胞分别单独移植于帕金森病模型鼠脑内已取得良好效果,但尚未见联合移植的报道。 目的：观察骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植对帕金森病模型大鼠行为认知功能的影响,并与单纯神经干细胞移植效果进行比较。 方法：用Neurobasal+B27培养3~6代的骨髓基质细胞24 h后,收集并离心上清液,即为骨髓基质细胞条件液。体外分离培养大鼠神经干细胞后,行BrdU标记。55只大鼠随机取8只作为正常组,剩余47只采用立体定向仪单侧黑质致密部和腹侧被盖区注射6-羟基多巴胺建立帕金森病动物模型。32只造模成功,随机分为3组,选取右侧纹状体两个坐标点为移植点,单纯神经干细胞组每点注入神经干细胞悬液5 μL,联合组每点注入神经干细胞悬液+骨髓基质细胞条件液5 μL,模型组不注入任何液体。观察帕金森病大鼠旋转行为的改变,通过水迷宫试验对大鼠认知功能进行评价,免疫组织化学染色检测 黑质区酪氨酸羟化酶蛋白的表达及移植区BrdU的表达。 结果与结论：与模型组比较,移植后1~8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠旋转次数均显著减少(P < 0.01),移植后第4,8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠逃避潜伏期均明显缩短(P < 0.05),在平台象限的游泳时间百分比、游泳距离百分比、穿越平台次数均明显增加(P < 0.05);后2组间各指标比较均无明显差异(P > 0.05)。移植后第8周,各组大鼠6-羟基多巴胺注射侧黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元和神经纤维表达基本缺失;单纯神经干细胞组、联合组移植区可见一定数量的BrdU阳性细胞表达,多数位于针道附近,部分细胞沿胼胝体迁移。提示骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植能改善帕金森病模型大鼠的旋转行为和认知能力,与单纯神经干细胞纹状体移植的效果基本相似。     

mdx小鼠与C57小鼠骨髓基质细胞体外分化能力的比较**

背景：肌营养不良症是一种渐进性致死性X连锁隐性遗传性肌肉疾病,目前无特效治疗。肌营养不良症模型鼠(mdx小鼠)的骨髓基质细胞增殖及定向分化能力是否正常,自身骨髓移植是否合适还有待研究。 目的：观察mdx小鼠骨髓基质细胞体外培养时的增殖及多向分化能力。 方法：取mdx小鼠与C57小鼠胫股骨骨髓基质细胞体外培养,经吉姆萨染色后观察其形成成纤维细胞集落形成单位的能力;通过不同诱导液使骨髓基质细胞定向分化为成骨、成脂、成肌细胞,观察其形态学特性;并分别用Von kossa 染色、油红O染色、免疫荧光检测desmin阳性细胞对已分化细胞进行鉴定和分化率比较;培养1周时,提取分化细胞总RNA,反转录后,用real-time PCR检测各分化细胞相关基因表达。 结果与结论：mdx小鼠骨髓基质细胞形成的成纤维细胞集落形成单位数目和体积均小于C57小鼠。其成骨、成肌分化的效率均明显低于C57小鼠(P < 0.01),两种小鼠的骨髓基质细胞成脂分化效率差异无显著性(P > 0.05)。real-time PCR检测结果显示,与C57小鼠相比,mdx小鼠的骨髓基质细胞成骨、成肌基因表达均有不同程度下降,而成脂基因表达无明显差异。结果提示,mdx小鼠的骨髓基质细胞体外培养时的增殖及定向分化能力较C57小鼠下降,与Dystrophin 基因缺失有关,mdx小鼠自体骨髓移植将会受限。     

Mdx小鼠骨骼肌纤维化及Spp1基因表达

目的通过观察Duchenne型肌营养不良的模型鼠mdx小鼠骨骼肌中纤维化情况,研究Spp1基因在mdx小鼠及其对照鼠中不同时期的表达,探讨在mdx小鼠中Spp1与肌纤维化的关系。方法选取雄性C57BL/10Sc Sn-Dmdmdx/JNju鼠为实验组,雄性C57BL/6Sc Sn小鼠为对照组,根据年龄分为2w组、4w组、8w组、12w组。每组选取6只,3只用于冰冻切片的苏木精-伊红染色及马松(masson)染色,3只用于基因芯片及q RT-PCR。结果 2w及4w时mdx小鼠无明显结缔组织增生,8w时,mdx小鼠可见轻度结缔组织增生;12w时,mdx小鼠结缔组织增生程度较8w稍加重,仍为小片状区域的纤维化,对照组小鼠不同时期均未见纤维化;mdx小鼠2w与12w股四头肌基因芯片表达谱对比,其中Spp1基因在mdx小鼠2w与12w相比fold-change值为-15.1354,变化明显;Spp1在mdx小鼠股四头肌不同时期表达量比较:8w组较4w组明显升高,12w组较8w组表达量下降,但仍高于4w组,8w组与12w组Spp1表达量较同期对照组明显升高,差异具有统计学意义。结论 mdx小鼠早期(2w~4w)肌纤维化表现不明显,8w时骨骼肌内可见少量结缔组织增生,随后缓慢进展。2 Spp1基因在mdx小鼠成熟期(8w~12w)表达量明显增加,推测其在mdx小鼠肌纤维化中发挥一定作用。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肾脏辐射损伤

背景：研究发现骨髓间充质干细胞可向包括肾脏系膜细胞在内的肾实质细胞分化,且肾损伤后骨髓间充质干细胞具有修复肾脏结构和功能的作用。 目的：观察肾脏辐射损伤大鼠模型接受骨髓间充质干细胞移植后肾脏组织学及功能学变化。 设计、时间及地点：细胞学体外实验,于2009-01/10在珠江医院血液科实验室完成。 材料：清洁级雄性SD大鼠35只,20只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余15只随机分为正常对照组、模型组、细胞移植组,5只/组。 方法：全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,细胞达90%融合时胰酶消化传代。模型组、细胞移植组大鼠建立辐射损伤模型,接受X射线全身照射,剂量率为500 cGy/min,距靶源100 cm,每次剂量6 Gy,1次/周,连续3周。接受照射完毕后24 h,取处于对数生长期的第3代骨髓间充质干细胞,细胞移植组大鼠经尾静脉注射1 mL细胞悬液,含3×106个细胞,共3次;正常对照组、模型组大鼠尾静脉注射同等体积的生理盐水。 主要观察指标：肾脏组织学苏木精-伊红染色结果,血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶及丙二醛的表达,血清中肌酐和尿素氮的表达。 结果：①肾脏组织病理显示,模型组肾皮质变薄,间质增多;肾小体分布不均匀;肾小球结构紊乱,肾小球血管及出、入球血管变窄,肾小囊腔部分消失;可见部分肾小球变性硬化表现。细胞移植组肾皮质较模型组明显增厚,结构较清晰,间质充血水肿明显减轻;可见较多完整的肾小体;部分肾小球仍存在变性、硬化表现,可见明显的肾小囊腔。②氧自由基检测结果显示,与模型组比较,细胞移植组大鼠血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶的活性均明显升高(P < 0.05),丙二醛水平均明显降低(P < 0.05)。③肾功能检测结果显示与模型组比较,细胞移植组大鼠血清中肌酐和尿素氮浓度明显降低(P < 0.05)。 结论：骨髓间充质干细胞移植具有对抗和修复辐射损伤大鼠肾脏的作用,能够有效改善肾脏功能。     

成肌细胞治疗DMD模型-mdx鼠体内骨骼肌细胞dystrophin/utrophin蛋白的表达

目的 研究成肌细胞移植入放疗的mdx鼠后dystrophin/utrophin的表达变化.方法 培养大鼠L6骨骼肌成肌细胞株(L6 SkM),进行肌内注射于Duchenne型模型鼠-mdx鼠.移植后1个月、2个月、3个月分别取实验鼠的四肢骨骼肌,运用免疫荧光法、Western blot检测dystrophin及utrophin的表达情况.另分别取5只正常C57BL/6鼠和mdx鼠作阳性和阴性对照.结果 成肌细胞移植后1、2和3个月后mdx鼠的dystrophin表达随移植时间延长增多,而utrophin的表达随移植时间延长下降.结论 成肌细胞移植后dystrophin表达对utrophin有一定的抑制作用,两者存在互补关系.