人脑胶质瘤IDH1突变状态与MGMT启动子甲基化、P53和TERT突变相关性

目的 探讨脑胶质瘤异柠檬脱氢酶1（IDH1）突变与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 （MGMT）启动子甲基化状态、P53和端粒酶逆转录酶（TERT）突变之间的相关性。方法 收集2016年6月至2017年9月手术切除并经病理诊断为胶质瘤标本72例（WHO Ⅱ级14例,Ⅲ级19例,Ⅳ级39例）。采用PCR荧光探针法检测MGMT基因启动子甲基化状态,毛细管电泳法检测基因IDH1、P53、TERT突变情况;采用列联系数分析IDH1突变与MGMT基因启动子甲基化、P53、TERT突变状态的相关性。采用多因素Logistic回归分析检验IDH1突变的相关因素。结果 72例中,IDH1突变率为29.2%,MGMT启动子甲基化率为47.2%,P53突变率为41.4%,TERT突变率为50%。相关性分析发现IDH1突变与MGMT启动子甲基化（列联系数=0.44;P<0.001）、P53突变（列联系数=0.32;P<0.05）均有显著相关性,但与TERT启动子突变无明显相关性（P>0.05）。IDH1野生型胶质瘤中MGMT启动子甲基化与TERT启动子基因突变具有相关性（列联系数=0.28,P<0.05）。IDH1突变型胶质瘤中MGMT启动子甲基化与P53基因突变具有相关性（列联系数=0.27,P<0.05）。多因素Logistic回归分析,结果显示病人年龄、MGMT启动子甲基化是IDH1突变独立相关因素（P<0.05）。结论 胶质瘤IDH1突变可能与MGMT启动子甲基化、P53和TERT突变之间存在复杂的相互调节作用。     

IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化在脑胶质瘤中表达及关联度分析

目的探讨脑胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenases 1,IDH1)突变和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子甲基化状态及二者之间的关联性。方法收集手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织133例,采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,n MSP)法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法联合变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)法检测脑胶质瘤中的MGMT基因启动子甲基化情况,直接测序法检测脑胶质瘤中IDH1基因的突变情况。采用χ2检验进行IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化关联度的统计分析。结果 133例脑胶质瘤患者中MGMT基因启动子甲基化88例(66.17%),IDH1突变62例(46.62%)。IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化存在关联(P=0.01)。结论脑胶质瘤中IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化之间关联显著,提示两者在脑胶质瘤的发生发展中可能存在相互调节的作用;IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化是脑胶质瘤的重要疾病相关因素。     

星形细胞胶质瘤中IDH1基因突变及DNA甲基化分析

目的 分析星形细胞胶质瘤患者IDH1基因突变分布与病理级别、预后的关系;探讨DNA甲基化是否为IDH1基因调控的模式之一.方法 直接测序法检测91例星形细胞胶质瘤组织样本中IDH1的突变分布;重亚硫酸盐测序法检测9例星形细胞胶质瘤中IDH1启动子DNA甲基化水平.结果 91例星形细胞胶质瘤患者中35例存在IDH1突变(38.5％),均为R132H突变.WHO Ⅰ级肿瘤中未检测到IDH1突变;WHOⅡ～Ⅳ级原发性星形细胞胶质瘤中IDH1突变率分别为70.6％、62.1％、12.5％,突变率与病理级别呈负相关(r=0.522,P＜0.001);7例继发性多形性胶质母细胞瘤中有5例(71.4％)发生突变,突变类型与原发肿瘤一致.IDH1突变型胶质瘤患者中位生存期较IDH1野生型患者明显延长(P＜0.05).9例胶质瘤患者IDH1启动子均未检测到DNA甲基化改变.结论 IDH1突变在星形细胞胶质瘤中发生频繁,是预后改善的指标;DNA甲基化可能未参与IDH1基因表达的调控.     

恶性脑胶质瘤MGMT基因启动子甲基化状态与患者临床预后的相关性

目的 探讨恶性脑胶质瘤组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态及MGMT蛋白表达与患者生存预后的关系,评价MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态对脑胶质瘤化疗的意义. 方法 选择自2006至2010年南方医科大学珠江医院神经外科手术治疗且病理证实为恶性脑胶质瘤(WHOⅢ级、Ⅳ级)的39例患者为研究对象,应用免疫组化染色法检测肿瘤组织MGMT蛋白表达,应用MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态,并观察患者化疗后总生存时间. 结果 肿瘤组织中MGMT蛋白表达阳性、弱阳性者与表达阴性者生存时间比较差异有统计学意义(P=0.003),MGMT蛋白表达阳性者比表达阴性者预后更差.肿瘤组织中MGMT基因启动子未甲基化者、低度过甲基化者、中度过甲基化者、高度过甲基化者生存时间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05),MGMT基因启动子过甲基化率越高者预后越好.MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态存在统计学相关性(r=0.697,P=0.000),基因甲基化程度越高者蛋白表达越低. 结论 MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态均可以作为接受烷化剂化疗的恶性胶质瘤患者生存期的预测指标.MS-MLPA技术是一种可靠的检测MGMT基因启动子甲基化状态的方法.     

MGMT基因对脑胶质瘤患者启动子甲基化变化的价值研究

目的探究MGMT基因表达、启动子甲基化与脑胶质瘤患者预后间的关联性。方法择取我院2012-06-2014-09收治的82例行脑胶质瘤个体化综合治疗的恶性胶质瘤患者为研究对象,依据脑胶质瘤MGMT基因表达与启动子甲基化状况进行分组,术后予以同步放化疗,分析各组患者近期疗效、安全性及无进展生存时间。结果 MGMT蛋白表达与恶性胶质瘤MGMT基因启动子甲基化状态呈负相关(P0.05),MGMT基因启动子甲基化组近期疗效(79.54%vs75.00%)高于MGMT蛋白低表达组(P0.05),MGMT甲基化低表达组1、2、3a生存率(90.62%vs 75.00%;56.25%vs41.66%;31.25%vs 16.66%)明显高于MGMT甲基化高低表达组(P0.05)。结果 MGMT基因表达、启动子甲基化与脑胶质瘤患者预后密切相关,临床上应引起足够重视。     

少突-星形细胞瘤病例的临床回顾和整合诊断研究

目的根据2016年WHO中枢神经系统肿瘤分类第4版修订方案(2016年WHO指南),探讨分子标志物对病理诊断和预后的指导意义。方法对既往诊断为少突-星形细胞瘤或间变少突-星形细胞瘤的病例回顾病理检查结果参照2016年WHO指南重新进行整合性诊断。收集2014至2016年,45例经手术切除后组织病理诊断为少突-星形细胞瘤及间变少突-星形细胞瘤的病例。采用直接测序法检测IDH1/2基因突变及TERT启动子区突变,采用荧光原位杂交(FISH)检测1p/19q的共缺失状态,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)甲基化水平。分析TERT启动子突变及MGMT甲基化与患者总生存期和无复发生存期的关系。结果依据2016年WHO指南,结合IDH基因突变、1p/19q共缺失等分子标志物特征,45例整合诊断为:少突胶质细胞瘤(IDH突变型和1p/19q共缺失)22例;弥漫性胶质瘤[IDH野生型(IDH野生型和1p/19q共缺失)]2例;弥漫星形细胞瘤(IDH突变型8例,IDH野生型3例)11例;间变少突胶质细胞瘤(IDH突变型和1p/19q共缺失)2例;间变弥漫星形细胞瘤(IDH突变型3例,IDH野生型1例)4例;少突-星形细胞瘤(未知类型)4例。TERT启动子突变及MGMT甲基化的患者总生存期较短,但差异无统计学意义。结论依据2016年WHO指南和更新的修改建议,并不能把既往诊断为少突-星形细胞瘤的患者进行完全分类;此类混合性胶质瘤的生物学和遗传学特征还需进行深入研究。     

顺铂联合替莫唑胺治疗MGMT启动子非甲基化的 复发高级别胶质瘤

目的 探讨顺铂（DDP）联合替莫唑胺（TMZ）治疗MGMT启动子非甲基化的复发高级别胶 质瘤的疗效。方法 纳入2016 年4 月30 日至2018 年3 月31 日收治55 例MGMT启动子非甲基化的复发 高级别胶质瘤,均经过手术病理证实为高级别胶质瘤（WHO Ⅲ级或Ⅳ级）和MGMT启动子非甲基化。随 访期间经头颅MRI 和（或）再次手术的病理确诊为肿瘤复发,并给予DDP联合TMZ化疗。观察患者的不 良反应和生存情况。结果 WHO Ⅲ级有效率为12.0%（3/25）,中位生存期为42 个月;WHO Ⅳ级有效率 为6.7%（2/30）,中位生存期为17 个月。总有效率为9.1%（5/55）,总生存期为19 个月。不良反应主要为骨 髓抑制、胃肠道症状和肝肾功能损伤,经对症治疗后均恢复。结论 DDP 联合TMZ 治疗MGMT 启动子 非甲基化的复发高级别胶质瘤具有一定的疗效。     

胶质母细胞瘤MGMT基因启动子甲基化、MGMT蛋白表达和预后相关性分析

目的探讨脑胶质母细胞瘤中O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态和MGMT蛋白表达水平与临床预后的相关性。方法收集119例人脑胶质母细胞瘤石蜡包埋样本,提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐修饰,用MethyLight法检测MGMT基因启动子甲基化状态,用免疫组织化学染色法检测MGMT蛋白表达水平,对MGMT基因启动子甲基化状态和MGMT表达水平与患者预后行相关性分析。结果在119例胶质母细胞瘤样本中,有42例检测到MGMT基因启动子甲基化,甲基化发生率为35.3%(42/119例),MGMT基因启动子甲基化与无进展生存期(P=0.011)及总体生存期(P=0.036)延长相关。MGMT蛋白表达水平和临床预后无相关性(P0.05),与MGMT基因启动子甲基化状态之间也无相关性(P0.05)。结论 MGMT基因启动子甲基化与胶质母细胞瘤患者预后呈正相关,由免疫组化法测得的MGMT蛋白表达水平和预后及基因启动子甲基化之间无关联性,MGMT基因启动子甲基化状态可以作为评判预后的生物学指标之一。     

岛叶胶质母细胞瘤的临床特征和预后影响因素分析

目的探讨岛叶胶质母细胞瘤的临床特征和影响预后的临床因素。方法回顾性分析2006年7月至2013年6月中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库中44例岛叶胶质母细胞瘤患者的临床资料。所有患者均行肿瘤切除术,术后27例接受放、化疗联合治疗,另17例未接受。总结所有患者的临床特征,包括是否存在癫痫发作史、异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)甲基化、肿瘤强化情况及临床分型等。采用Kaplan-Meier法分析所有患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。进一步采用多因素Cox回归分析方法探讨影响患者PFS和OS的临床因素。结果44例患者中,33例(75.0%)存在癫痫发作史,11例(25.0%)为IDH1突变型,19例(43.2%)存在MGMT甲基化,42例(95.5%)存在肿瘤强化。Yasargil分型:2例为3A型,27例为3B型,15例为5A/B型;Saito分型:2例局限于岛叶皮质内,9例经前环岛沟向额叶侵袭,16例经下环岛沟向颞叶侵袭,17例经2个以上环岛沟向多方侵袭;Moshe分型:35例对豆纹动脉形成包绕或侵袭,余9例未侵袭;壳核分型:38例对壳核不同程度的侵袭,余6例未累及。Kaplan-Meier法分析结果显示,所有患者的中位PFS为278 d,中位OS为435 d。多因素Cox回归分析结果显示,肿瘤体积小于中位数(HR=0.390,95%CI:0.189~0.802,P=0.011)、IDH1突变(HR=0.391,95%CI:0.175~0.876,P=0.023)及术后放、化疗联合治疗(HR=0.346,95%CI:0.162~0.738,P=0.006)是影响患者PFS的独立保护因素;而MGMT甲基化(HR=0.371,95%CI:0.181~0.758,P=0.007)、肿瘤切除程度≥90%(HR=0.412,95%CI:0.194~0.875,P=0.021)及术后接受放、化疗联合治疗(HR=0.347,95%CI:0.170~0.708,P=0.004)是影响患者OS的独立保护因素。结论岛叶胶质母细胞瘤对脑深部重要的神经血管结构具有很强的侵袭性,手术切除难度大,预后差;最大程度切除肿瘤并规范放、化疗可改善患者的预后。     

胶质瘤分子病理检测的临床应用价值

目的探讨分子病理检测在胶质瘤诊断中的临床价值。方法与结果分别采用组织病理学,以及全外显子组测序、MGMT启动子甲基化和TERT启动子区突变等分子病理检测方法,同时参照2016年WHO中枢神经系统肿瘤分类第四版修订版对3例手术切除胶质瘤患者进行整合诊断。结果显示,例1为胶质瘤切除术后31年复发伴瘤卒中,整合诊断为间变性少突胶质细胞瘤,IDH突变型,1p/19q共缺失,总生存期逾32年,目前仍生存;例2于6个月内行两次胶质瘤切除术,整合诊断为胶质母细胞瘤,IDH野生型,总生存期仅6个月;例3整合诊断为胶质母细胞瘤,IDH野生型,术后辅助放射治疗和替莫唑胺同步化疗,2个月后MRI提示肿瘤复发迹象,以多靶点酪氨酸蛋白激酶抑制剂安罗替尼治疗,2个月后MRI显示病灶明显缩小,病情逐渐缓解。结论分子病理检测有助于临床医师对胶质瘤患者的术后整合诊断、预测预后、筛选敏感药物。     

替莫唑胺胶囊治疗恶性脑胶质瘤30例疗效分析

目的评价替莫唑胺胶囊（TMZ）治疗人脑恶性胶质瘤的临床疗效及不良反应。方法2005年1月至2008年1月对一个单位30例术后确诊的恶性脑胶质瘤且使用TMZ化疗的患者进行随访,观察近期治疗反应、生存期,并分析常规病理和分子病理对治疗效果的影响。结果TMZ治疗结束时,30例患者客观有效率和疾病控制率分别为53．3％和80．0％,O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）对近期疗效无明显影响（P〉0．05）,而不同病理类型的近期疗效存在明显差异（P〈0．05）。随访期间共有12例患者死亡,生存期为0．7～3．7年,中位生存期为1．5年。MGMT阳性和阴性患者的中位生存期分别为1．3年和1．5年,无明显差异（P：0．31）。胶质母细胞瘤和间变型星形细胞瘤的中位生存期分别为1．3年和2．0年,亦无明显差异（P=0．28）。不良反应包括厌食、便秘等消化道症状11例（36．7％）,白细胞减少3例（10．0％）,假性进展2例（6．7％）。结论TMZ对恶性胶质瘤患者有较好的临床疗效,不良反应少,耐受性好,治疗方案简便,是一种理想的恶性胶质瘤术后辅助化疗药物。     

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12基因在脑胶质瘤中的表达及意义

目的基于中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)和癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库分析非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12基因(PTPN12)在脑胶质瘤中的表达和意义。方法回顾性分析CGGA数据库(325例)和TCGA数据库(636例)中脑胶质瘤患者的临床资料和RNA测序数据。分析不同世界卫生组织(WHO)肿瘤级别、四分型亚型、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变状态、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态的患者PTPN12表达量的差异。根据PTPN12的表达量将患者分为PTPN12高表达组和PTPN12低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较两组患者的生存差异。采用单因素和多因素Cox回归分析法判断PTPN12对脑胶质瘤患者的预后作用。进一步通过基因本体(GO)功能富集分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析获得基因相关的功能以及有关的通路。结果两数据库中,PTPN12的表达量均随脑胶质瘤病理级别的升高而升高(均P<0.01);与IDH突变型比较,IDH野生型中PTPN12表达量升高(均P<0.01);MGMT启动子非甲基化者PTPN12表达量高于MGMT启动子甲基化者(均P<0.01);PTPN12在经典型、间质型、神经元型以及前神经元型中表达量的差异均具有统计学意义,间质型中表达量最高(均P<0.01)。两数据库中,PTPN12高表达者均比低表达者的生存期短(均P<0.01)。两个数据库中,多因素Cox回归分析结果均显示,PTPN12表达量为脑胶质瘤患者生存期的独立影响因素(CGGA数据库中,HR=1.433,95%CI:1.094~1.876,P=0.009;TCGA数据库中,HR=1.588,95%CI:1.018~2.477,P=0.042)。GO分析结果显示,PTPN12表达量正相关的基因更多地富集在增殖、凋亡、黏附、蛋白水解、免疫反应、血管生成、药物反应、缺氧反应、肿瘤细胞G2/M期的转化、肿瘤细胞G1/S期的转化等多个与脑胶质瘤恶性进展相关的功能上。KEGG分析结果显示,与PTPN12表达量呈正相关的基因更多地富集在肿瘤相关通路、PI3K-Akt通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、肿瘤坏死因子通路、缺氧诱导因子1通路、p53通路、凋亡通路以及细胞周期通路上。结论不同WHO肿瘤级别的脑胶质瘤患者PTPN12表达量不同,PTPN12表达量可独立用于脑胶质瘤患者的预后判断,且与多个脑胶质瘤恶性进展相关的功能和通路有关。     

基于放化疗敏感性相关基因的原发胶质母细胞瘤预后预测模型的构建和验证

目的筛选原发胶质母细胞瘤放化疗敏感性相关基因,基于相关基因构建原发胶质母细胞瘤患者的预后预测模型并验证。方法回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)2019数据库(102例,试验组)和CGGA数据库(54例,验证组)中术后接受规范放化疗的原发胶质母细胞瘤患者的临床资料及转录组测序数据。在试验组中筛选长生存期亚组(≥18个月,49例)与短生存期亚组(≤9个月,22例)患者的差异基因,进一步将患者的年龄、肿瘤异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变状态、染色体1p/19q共缺失状态、O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)启动子区甲基化状态以及差异基因均纳入多因素Cox回归分析,筛选其中为独立预后因素的目标差异基因,取其风险比的自然对数作为各基因相应的系数,计算预后风险评分。采用单因素和多因素Cox回归分析法评估预后风险评分是否为独立预后因素;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,log-rank检验比较高风险组(预后风险评分>0分)与低风险组(预后风险评分≤0分)患者生存期的差异。通过Pearson相关性分析筛选与风险评分呈正相关的基因,并对其进行功能富集分析。结果试验组中,长生存期亚组与短生存期亚组患者的性别、年龄、肿瘤切除程度、IDH突变状态、染色体1p/19q缺失状态以及MGMT启动子甲基化状态的差异均无统计学意义(均P>0.05)。长生存期亚组与短生存期亚组比较,9个基因表达量显著升高(均P<0.05),28个基因表达量显著降低(均P<0.05)。采用多因素Cox回归分析法筛选出4个目标差异基因,分别为AKR1C1(HR=0.910,95%CI:0.850~0.974,P=0.006)、CPZ(HR=0.947,95%CI:0.898~0.999,P=0.044)、HIST1H3H(HR=1.299,95%CI:1.025~1.647,P=0.031)以及TBX5(HR=1.104,95%CI:1.034~1.179,P=0.003),其对应的预测模型中的系数分别为-0.0947、-0.0547、0.2624、0.0994。试验组和验证组中,预后风险评分(高风险)均为预后的独立危险因素(试验组中,HR=2.407,95%CI:1.470~3.939,P<0.001;验证组中,HR=2.054,95%CI:1.101~3.830,P=0.024)。试验组和验证组中,高风险亚组(分别为51、22例)患者的总生存期均比低风险亚组(分别为51例、32例)短,差异均有统计学意义(均P<0.05)。功能富集分析结果显示,在试验组与验证组中,与预后风险评分正相关的基因更多地富集在细胞增殖、基因表观遗传学调控、DNA修复及核因子κB信号通路的激活等生物学功能上。结论基于放化疗敏感性相关基因AKR1C1、CPZ、HIST1H3H以及TBX5构建的预后预测模型或可用于预测原发胶质母细胞瘤患者的预后。     

脑胶质瘤病人血清β2微球蛋白含量的变化

目的 探讨脑胶质瘤病人血清β2微球蛋白（β2-MG）含量的变化。方法 收集2015~2017年手术切除及病理确诊的胶质瘤标本124例，其中WHO Ⅰ级9例，Ⅱ级28例，Ⅲ级34例，Ⅳ级53例。术前2~3 d采取静脉血，通过胶乳免疫比浊法检测血清β2-MG含量；并使用石蜡包埋的胶质瘤组织分别通过毛细管电泳法检测基因异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）突变和PCR荧光探针法检测06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态。结果 WHO Ⅳ级胶质瘤病人血清β2-MG含量显著高于其他级别（WHO Ⅰ~Ⅲ级）胶质瘤（P<0.05）。IDH1突变型胶质瘤病人血清β2-MG含量显著低于野生型病人（P<0.05）。MGMT甲基化胶质瘤病人血清β2-MG含量与非甲基化病人之间无明显差异（P>0.05）。结论 血清β2-MG含量对于WHO Ⅳ级胶质瘤与其他级别件胶质瘤的鉴别以及IDH1突变与野生型的鉴别中可能具有重要的参考意义。     

ITGA4基因在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨整合素α4(ITGA4)基因在脑胶质瘤中的表达与临床意义。方法 计算机检索CGGA数据库获取mRNAseq-325数据集中325例脑胶质瘤的转录组测序（RNA-seq）数据及临床资料,并用m RNAseq-693数据集中693例脑胶质瘤进行验证。结果 胶质瘤ITGA4基因呈高表达（P<0.05）,与胶质瘤IDH基因型、1p/19q共缺失状态、WHO病理分级有关（P<0.05）,与胶质瘤MGMT启动子甲基化状态无明显关系（P>0.05）。多因素Cox回归分析显示,ITGA4高表达是胶质瘤生存预后不良的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,ITGA4高表达胶质瘤病人生存期明显缩短（P<0.05）。GO分析和KEGG分析显示,ITGA4基因调控的生物过程包括细胞粘附、血管生成及细胞迁移等,主要调控PI3K/AKT信号通路。结论 我们的结果提示胶质瘤ITGA4呈高表达,与胶质瘤不良生存预后密切相关,主要调控PI3K/AKT信号通路。     

胶质瘤MGMT启动子甲基化定量检测的MS-HRM方法建立及评估

目的建立甲基化特异高分辨率溶解曲线(Methylation sensitive high resolution melting curve,MS-HRM)定量检测胶质瘤MGMT基因启动子甲基化的方法,用于指导胶质瘤患者术后化疗及预后判断。方法从标本库随机选取胶质瘤组织37例,提取DNA进行甲基化修饰,应用MS-HRM方法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)进行MGMT基因启动子区甲基化检测。结果 MSP方法检测显示部分甲基化标本29例(78.4%),较甲基化(13.5%)和未甲基化(8.1%)差异显著。MS-HRM发现MGMT基因启动子甲基化水平在10%~25%和25%~50%的标本分别有14例(37.8%)和17例(49.5%)。结论成功建立MS-HRM检测胶质瘤MGMT启动子甲基化的方法,该方法特异性高、灵敏度强和可重复性,有望应用于临床胶质瘤MGMT启动子甲基化高通量定量检测,以指导个体化治疗。     

TERT启动子突变、ATRX表达水平在人脑胶质瘤病人预后评估中的作用

目的 探讨端粒酶逆转录酶（TERT）启动子突变、α-地中海贫血伴智力低下综合征基因（ATRX）表达水平在人脑胶质瘤病人预后评估中的价值。方法 回顾性分析2016年6月~2018年6月手术治疗的102例人脑胶质瘤的临床资料。术后检测脑胶质瘤组织TERT启动子突变及ATRX表达情况。所有病人术后随访2年。结果 102例中,低级别胶质瘤48例（WHO分级Ⅱ级）,高级别胶质瘤54例（Ⅲ级31例,Ⅳ级23例）。低级别组TERT启动子突变率（37.50%,18/48）明显低于高级别组（59.26%,32/54;P<0.05）,而ATRX表达阳性率（60.42%,29/48）明显高于高级别组（37.04%,20/54;P<0.05）。多因素Cox比例回归风险模型结果显示,TERT启动子突变、ATRX表达阴性是生存预后不良的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,TERT启动子突变型胶质瘤病人较野生型病人生存期明显缩短（P<0.05）,ATRX表达阴性胶质瘤病人较表达阳性病人生存期明显缩短（P<0.05）。结论 TERT启动子突变、ATRX基因表达对人脑胶质瘤预后评估具有重要价值。     

RNA甲基化识别蛋白YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2 预测 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化的脑胶质瘤的化学治疗 敏感性

目的 研究RNA N6- 腺苷酸甲基化（N6-methyladenosine, m6A）识别蛋白YTH N6 - 甲基 腺苷RNA 结合蛋白2（YTHDF2）与O6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶（MGMT）甲基化胶质瘤化学治疗 （简称化疗）抵抗的关联,并探索其潜在机制。方法 共纳入中国脑胶质瘤基因图谱计划（CGGA）数据 库中的325 例胶质瘤患者,收集其一般及临床信息（包括患者的组织学病理和分子病理信息、总生存 期、术后辅助性治疗信息和包含YTHDF2 在内的基因表达谱信息）。利用Kaplan-Meier 生存曲线和Logrank 检验评价YTHDF2 表达水平与替莫唑胺（TMZ）治疗敏感性及生存预后的关系。通过慢病毒感染 体外构建YTHDF2 稳定敲低的胶质瘤细胞模型,利用细胞活性检测试剂盒8（CCK-8 试剂盒）检测不同 YTHDF2 表达水平细胞在TMZ处理后的存活率。通过基因集合富集分析（GSEA））和基因本体（GO）功能 注释,分析YTHDF2 表达升高参与TMZ治疗抵抗的潜在机制。结果 临床数据库队列分析发现,m6A 识别蛋白YTHDF2 表达水平高的胶质母细胞瘤化疗治疗后总生存期显著短于YTHDF2 表达水平低者 （P ＜ 0.01）。经800、1 500、2 000 μmol/L 的TMZ 处理48 h 后,与对照shRNA 比较,YTHDF2 shRNA1 （800 μmol/L 的TMZ 除外）和YTHDF2 shRNA2 的细胞相对存活比例均明显降低,差异均具有统计学意 义（均P ＜ 0.01）。生存分析结果表明,在MGMT甲基化组中, YTHDF2 低表达水平患者的总体生存率明 显高于YTHDF2 高表达水平患者（P ＜ 0.05）;在MGMT非甲基化组中,YTHDF2 低高表达水平患者的总 体生存率差异无统计学意义（P＞ 0.05）。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路注释结果显示,表达 升高的基因主要富集在与细胞因子介导的细胞间相互作用、细胞周期以及Janus激酶-信号转导和转录 激活因子信号通路,而表达降低的基因主要富集在正常神经活动相关的信号通路。GSEA分析结果显示, YTHDF2 高表达的胶质母细胞瘤基因富集与上皮间质转化、细胞分裂活动和核因子κB 介导的肿瘤坏 死因子α 等特征密切相关。GO 功能注释结果显示,在YTHDF2 高表达组中,高表达的基因功能主要聚 集在细胞周期和细胞因子相关的生物学过程中。结论 RNA甲基化识别蛋白YTHDF2表达可用作预测 和评估MGMT甲基化的胶质瘤化疗敏感性的分子指标。     

胶质瘤MGMT基因启动子甲基化研究及应用进展

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是一种DNA修复酶,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是近年研究较多的胶质瘤相关分子标志,既是评价胶质瘤对烷化剂是否敏感的重要分子标志,也是胶质瘤患者预后评价及复发与假性进展鉴别的重要参考指标。尤其是老年恶性胶质瘤患者,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是指导其分子分型和制定个性化治疗方案的重要参考依据。本文对MGMT蛋白功能,以及MGMT基因启动子CpG岛甲基化在指导胶质瘤治疗、判断预后及鉴别复发与假性进展中的应用进行概述。     

术中磁共振成像在脑胶质瘤手术中的应用

目的 探讨术中磁共振成像在脑胶质瘤手术治疗中的应用价值.方法 回顾性分析复旦大学附属华山医院神经外科2010年12月至2016年12月利用术中磁共振成像进行开颅手术的366例脑胶质瘤患者的临床资料.术后定期对所有患者行门诊随访,同时复查头颅MRI.采用Kaplan-Meier生存曲线描述脑胶质瘤患者的总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）.进一步采用Logrank单因素和Cox多因素分析方法评价影响世界卫生组织（WHO）Ⅳ级脑胶质瘤患者预后的相关因素.结果 366例患者中,67.2％（246/366）达到肿瘤全切除.其中WHOⅣ级胶质瘤全切除率显著高于Ⅱ、Ⅲ级（分别为73.2％、58.5％、61.9％,均P＜0.05）,WHOⅡ、Ⅲ级患者肿瘤全切除率间的差异无统计学意义（P＞0.05）.所有患者中,90例（24.6％）在术中磁共振扫描后进行二次肿瘤切除,较首次的肿瘤切除程度显著提高（分别为95.9％、81.9％,P＜0.001）.统计学分析结果显示,WHOⅣ级女性脑胶质瘤患者的预后优于男性（P＜0.05）;高龄较低龄患者的复发风险更大,但是对于整体预后无明显影响（P＞0.05）;肿瘤位置对于患者预后影响不大（P＞0.05）;而肿瘤全切除是影响预后的独立危险因素,肿瘤全切除患者的预后优于非全切除者（P＜0.05）;术后放、化疗能够改善患者预后（P＜0.05）.结论 术中磁共振成像能显著提高脑胶质瘤的切除程度,并改善脑胶质瘤患者的预后.