Notch信号通路在肾母细胞瘤中的表达及其意义

目的 探讨Notch信号通路因子在肾母细胞瘤中的表达及其意义.方法 本研究中实验组为收集2010年6月至2014年3月在我院经手术活检诊断为肾母细胞瘤组织的标本.对照组标本为同期由于肾外伤、重复肾等疾病行手术切除获得.所有病例中,肿瘤组患儿共计31例,男17例,女14例,年龄4～144个月,平均年龄37.4个月,肿瘤分期Ⅰ期9例,Ⅱ期8例,Ⅲ期8例,Ⅳ期6例,尚无Ⅴ期病例.对照组为17例患儿,男10例,女7例,年龄23～157个月,平均年龄95.6个月.首先利用临床收集的肾母细胞瘤及非瘤肾脏组织标本,通过RT-PCR方法检测其中notch1的RNA表达水平;同时通过Western blot方法检测DAPT处理后的SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞系)中Notch信号通路因子与Wnt信号通路因子,以及VEGF的表达水平并进行统计学分析.结果 不同分期WT中notch1的表达:肿瘤组notch1基因mRNA表达较对照组明显增高,且肿瘤分期越高,notch1基因的mRNA表达也相应越高;DAPT作用SK-NEP-1后的表达:分别利用不同浓度的DAPT作用于SK-NEP-1后,SK-NEP-1中Notch信号通路的notch1、Jagged1蛋白表达水平随DAPT浓度增高逐渐下降,且Wnt信号通路中的wnt1、B-catenin蛋白表达水平同样明显下降,在10μmol/L浓度DAPT时上述蛋白表达量较PBS组比较具有明显统计学差异(P＜0.05);而且利用DAPT抑制之后,SK-NEP-1中的血管内皮生长因子(VEGF)表达也明显降低.结论 Notch信号通路蛋白的高表达与肾母细胞瘤的发生及恶性程度存在关系,同时Notch信号通路作为肿瘤治疗靶点也为我们将来治疗肾母细胞瘤提供新的线索和重要依据.     

mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤演变中的作用

目的 探讨mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用.方法 收集未经其他治疗、单纯手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本31例,结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原(PCNA)表达对血管瘤进行分类和分期,免疫组织化学检测并比较增生期血管瘤和消退期血管瘤组织中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70S6K-a的表达水平.结果 18例增殖期血管瘤mTOR、p70S6K-a的积分光密度分别为6336.47±1655.89,588.72±223.87;13例消退期血管瘤mTOR、p70S6K-a的积分光密度分别为846.22±297.09,3235.64±947.86;血管瘤增殖期p70S6K-a的积分光密度明显低于消退期,差异有统计学意义(P＜0.01).血管瘤增殖期mTOR的积分光密度明显高于消退期,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 小儿血管瘤组织中有mTOR、p70S6K-α表达,mTOR/p70S6K信号通路可能在小儿血管瘤的病理演变中发挥作用.     

Notch基因在儿童急性白血病中的作用及机制

哺乳动物Notch受体包括Notchl～ Notch4四种,Notch配体分为Delta和Jagged两个家族,包括Delta l、Delta 3、Delta 4、Jagged1和Jagged2五种.Notch信号传导通路是由受体、配体及许多下游靶基因组成的复杂网络结构,与细胞增生、分化、凋亡密切相关,且在不同组织及细胞类型中起着抑癌或致癌作用.该文主要介绍Notch信号通路的调控及其在儿童急性白血病中的作用.     

Notch信号途径在儿童结核病中的作用研究

目的 研究Notch信号途径相关分子在儿童结核病中的表达情况,探讨其在儿童结核病发生中的作用。方法 选取2017年6月至2018年12月确诊的结核病患儿62例为病例组,另选取健康儿童64例为健康对照组,采集外周静脉血2 mL,应用实时荧光定量PCR法检测白细胞中Notch信号途径相关分子（受体Notch1~4,配体Jagged1、2和DLL1、3、4,下游靶基因Hes1和Hey1） mRNA水平。结果 与健康对照组相比,病例组患儿白细胞中Notch1、2和DLL4 mRNA水平均显著升高（P < 0.05）;病例组患儿白细胞中其他信号分子Notch3、4,Jagged1、2,DLL1、3,Hes1和Hey1 mRNA水平与健康对照组相比,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 Notch1、2和DLL4 mRNA水平在结核病患儿中表达明显升高,但下游靶基因表达无明显变化,提示儿童结核菌感染后Notch1、2与其配体DLL4相互作用启动Notch信号途径,可能通过作用于其他靶基因在儿童结核病中发挥作用,需进一步研究探讨。     

PTEN对婴幼儿血管瘤内皮细胞VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的调控作用

目的 研究PTEN在婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)中的表达,探讨其对血管瘤内皮细胞(HemEC)中VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的影响与意义.方法 应用Real-time PCR检测增殖期IH组织与正常皮肤组织中PTEN基因表达差异,Western blot检测HemEC与正常血管内皮细胞中PTEN蛋白水平.采用腺病毒瞬时转染构建立PTEN高表达HemEC模型,观察PTEN表达变化对HemEC中VEGF-A、VEGFR-2与磷酸化VEGFR-2表达水平的影响,分析PTEN表达变化对HemEC增殖与凋亡的影响.结果 PTEN基因在IH微血管组织中的表达较正常皮肤血管组织出现显著的下调.通过对HemEC中PTEN蛋白表达量进行检测发现,与异常活化的VEGF-A/VEGFR-2信号通路相反,HemEC中PTEN蛋白表达较正常血管内皮细胞低(0.08±0.02比1.86±0.41).PTEN高表达可显著抑制VEGF的表达,并抑制VEGF-A对VEGFR-2磷酸化的激活(1.27±0.25比0.09±0.03),但对VEGFR-2蛋白表达水平无显著作用(2.32±0.51比2.35±0.42).上调PTEN后HemEC增殖能力显著降低、凋亡率显著升高.结论 PTEN通过对HemEC中VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的调控,从而影响HemEC的增殖和凋亡状态.     

婴幼儿血管瘤survivin基因启动子甲基化的研究

目的 采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测不同病理阶段的婴幼儿血管瘤组织及正常皮肤组织中survivin基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,探讨survivin基因启动子甲基化与婴幼儿血管瘤增生与退化的可能关系.方法 ①采用免疫组化S-P法检测增殖期婴幼儿血管瘤石蜡标本30例、消退期30例及正常包皮皮肤组织标本10例中survivin蛋白的表达;②提取石蜡包埋块组织基因组DNA并纯化后,采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)分别检测增殖期血管瘤30例、消退期血管瘤30例及正常包皮组织10例中survivin基因启动子CpG岛甲基化情况.结果 ①survivin 蛋白在增殖期血管瘤、消退期血管瘤和正常包皮组织中阳性表达率分别为76.6％ (23/30)、33.3％(10/30)和20.0％(2/10);②10例正常包皮皮肤组织中1例(10.0％)survivin基因启动子CpG岛非甲基化,9例(90.0％)甲基化;30例消退期血管瘤标本中8例(26.6％)survivin基因启动子CpG岛非甲基化,22例(73.3％)甲基化;30例增殖期血管瘤标本中24例(80.0％) survivin基因启动子CpG岛非甲基化,6例(20.0％)甲基化;增殖期血管瘤survivin基因启动子CpG岛甲基化率明显低于消退期和正常包皮组织;③survivin蛋白表达阳性的血管瘤33例中31例survivin基因启动子CpG岛为非甲基化,survivin蛋白表达阴性的27例中26例survivin基因启动子CpG岛为甲基化状态.结论 ①增殖期血管瘤survivin蛋白表达明显高于消退期血管瘤;②survivin基因启动子CpG岛甲基化状态在增殖期血管瘤、消退期血管瘤中存在明显差异;血管瘤组织中survivin基因启动子的甲基化状态与survivin蛋白的表达具有相关性;survivin基因启动子区CpG岛异常甲基化在血管瘤的增殖与消退调控中可能起到了一定作用.     

Caspase-8、Fas/FasL在小儿血管瘤中的表达

目的 观察Caspase-8、Fas/FasL在小儿血管瘤中的表达,探讨血管瘤内皮细胞的凋亡途径.方法 收集未经其他治疗、单纯行手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本44例,结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原(PCNA)表达对血管瘤进行分期,采用免疫组织化学Evision二步法检测PCNA、Caspnse-8、Fas、FasL的表达.采集图像并分析,计算积分吸光度(IA),应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 结合Mulliken分类法与PCNA表达将44例血管瘤的标本分为增生期血管瘤25例,消退期血管瘤19例.25例增殖期血管瘤Caspase-8、Fns、FasL的IA分别为1186.42±863.86、99.08±54.80、538.65±344.41.19例消退期血管瘤Caspnse-8、Fas、FasL的IA分别为20 544.18±7 556.04、714.34±288.38、1 917.12±507.21.血管瘤增殖期Caspase-8、Fas、FasL的IA明显低于消退期,差异均有统计学意义(Pa<0.01).Fas与Caspase-8的表达呈正相关(r=0.644 P<0.01).结论 Caspase-8、Fas/FasL参与了小儿血管瘤内皮细胞凋亡的调节,在血管瘤内皮细胞的凋亡调控中起作用的可能是Fas/FasL介导的死亡受体通路.     

癫痫持续状态大鼠海马内Notch通路对HIF-1α调控位点的研究

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及Notch信号通路下游基因HES1在发育期癫痫持续状态(SE)大鼠海马内的表达变化,探寻Notch信号通路对于HIF-1α的调控位点。方法 176只21日龄SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)致SE模型组(PTZ组)、Notch信号通路特异性抑制剂(DAPT)干预组(DAPT组)。PTZ组大鼠腹腔注射PTZ溶液制作SE模型,NS组注射等剂量的生理盐水作为对照,予安定腹腔注射终止SE发作。造模成功后分别于0.5、1、2、4、8 h断头取脑分离双侧海马组织,采用RT-PCR法检测HES 1、HIF-1αm RNA的表达;于2、4、8、12、24 h断头取海马,采用Western blot法检测蛋白的表达。DAPT组在开始造模前30 min腹腔注射DAPT溶液,分别于造模成功后2 h、8 h断头取海马组织,采用RT-PCR法检测2 h时HES1、HIF-1αm RNA的表达,用Western blot法检测8 h时蛋白的表达。结果 SE后的各个时间点,大鼠海马内HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达是增高的,与同一时间的NS组相比差异有统计学意义(P?0.05);与同一时间点的PTZ组比较,DAPT组的HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在发育期大鼠SE发作后的海马内,HES1基因可能是Notch信号通路中对HIF-1α表达的调控位点。     

Fas、bcl-2与移植血管瘤自然退化的动态研究

目的观察凋亡相关基因Fas和bcl-2与裸鼠移植血管瘤细胞增生、凋亡的关系，探讨其在血管瘤自然退化中的作用。方法采用免疫组化SP法检测裸鼠移植血管瘤不同时期Ki-67及凋亡相关基因Fas和bcl-2的表达。结果增殖期移植血管瘤组织中Fas无表达或低表达，而在移植血管瘤退化期中高表达，其阳性表达率在增殖期和消退期分别是25．0％和100％，两者之间差异有显著性意义（P〈0．001）；增殖期移植血管瘤中bcl-2高表达，而在移植血管瘤消退期中低表达，其阳性表达率在增生期和消退期分别是87．50％和31．25％（P〈0．001）；增殖期移植血管瘤组织中均有Ki-67表达，而在移植血管瘤消退期中表达极弱或无表达，其阳性表达率在增生期和消退期分别是100％和37．50％（P〈0．001）。结论在移植血管瘤增殖消退中存在着逐渐活跃的凋亡现象，细胞凋亡是血管瘤的生物学特征，是血管瘤自然消退的关键因素。Fas和bcl-2参与了血管瘤中细胞凋亡的调节。     

Notch信号通路与胆管发育

Notch信号通路是一条影响细胞命运、保守而重要的信号传导通路,几乎涉及所有细胞的增殖和分化活动,在调节细胞分化、增殖和凋亡,及一系列生理、病理过程中起着重要作用.Notch表达于从无脊椎动物到哺乳动物等多个物种,是一个在进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族.     

X连锁凋亡抑制蛋白和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂对血管瘤演变的作用

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂(Smac)在小儿血管瘤消退中的作用.方法 收集未经其他治疗、单纯手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本31例,结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原(PCNA)表达对血管瘤进行分类和分期,采用免疫组织化学方法检测XIAP、Smac在血管瘤组织中的表达.结果 18例增殖期血管瘤XIAP、Srnac的积分光密度分别为2421.03±792.91,472.05±182.16;13例退化期血管瘤XIAP、Smac的积分光密度分别为443.24±105.15,2074.10±320.41.血管瘤增殖期Smac的积分光密度明显低于消退期,差异有显著性(P＜0.01);血管瘤增殖期XIAP的积分光密度明显高于消退期,差异有显著性(P＜0.01);XIAP与Smac的表达之间呈负相关关系(r=-0.753,P＜0.01).结论 XIAP、Srmac相互作用可能是导致了血管瘤消退原因之一.

Abstract：

Objective To investigate the role of X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP)and second mitochondria- derived activator of caspase (Smac) in hemagioma regression. Methods Thirty-one hemangioma specimens were categorized according to Mulliken's classification and the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The expression of XIAP and Smac were assayed with immunohistochemistry method. Results There were 18 proliferating phase specimens and 13 involuting phase specimens. In the proliferating phase specimens, the IOD(integral optical density) of XIAP and Smac expressions were 2421.03 ± 792.91 and 472.05 ± 182.16 respectively. In the involuting phase specimens,the IOD of XIAP and Smac expressed were 443.24 ± 105.15 and 2074.10 ± 320.41 respectively. In the proliferating phase specimens, the IOD of Smac expression was significantly lower than the IOD in the proliferating phase specimens (P＜0.01 ). In the proliferating phase specimens, the IOD of XIAP expression was significantly higher than the IOD in the involuting phase specimens (P＜0.01). XIAP negatively correlates with Smac (r= -0.753,P＜0.01 ). Conclusions The interaction of XIAP and Smac may resulted in hemangioma regression.     

脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用

目的 观察在血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺血管平滑肌细胞(VSMC)中,脾酪氨酸激酶(syk)的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组(不作任何处理)、对照组(PDGF-BB培养)和药物干预组(PDGF-BB和piceatannol培养).[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)及平滑肌22α蛋白(SM22α)表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高(2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P<0.01);细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA(1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P<0.05)和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin(0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P<0.01)和SM22α(0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P<0.01)的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低(263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P<0.01).piceatannol可明显抑制这些生物学效应(药物干预组).结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

Notch配体、受体在小儿胆道畸形肝组织中的表达及意义

目的 探讨Notch信号通路在小儿胆道畸形发病机制中的作用.方法 收集23例胆道畸形患儿临床资料(胆道闭锁12例,胆总管扩张11例),术中取肝脏组织样本;9例正常肝脏组织样本作为正常对照.免疫组化方法和实时荧光定量PCR方法检测肝脏组织中的Notch配体、受体的表达分布和相对表达量.结果 Jag1在胆道闭锁增生胆管表达明显增强,Jag2在各组门管区表达为阴性;荧光定量PCR显示:胆道闭锁组及胆总管扩张组Jag1 mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.01);Jag2 mRNA的表达在三组问差异无统计学意义(P＞0.05).Notch1、Notch 2在对照组及胆总管扩张组主要表达于肝细胞和成熟胆管细胞,胆道闭锁组胆管细胞无阳性表达.Notch 3在胆道闭锁汇管区新生血管、基质中有较为明显的表达.荧光定量PCR显示:Notch1、Notch 2mRNA的表达在三组间差异无统计学意义(P＞0.05),胆道闭锁组Notch 3 mRNA的表达高于对照组(0.013±0.003比0.009±0.003,P＜0.01).Notch 4表达为阴性.结论 胆道闭锁肝脏组织Notch配体、受体表达异常,增生胆管细胞Jag1的过表达及Notch受体表达缺陷可能参与了胆道闭锁的病理过程.     

Alagille综合征各系统损害的研究进展

Alagille综合征(Alagille syndrome,ALGS)是具有表型特征的慢性胆汁淤积的最常见原因,是一种累及多器官的罕见常染色体显性遗传性疾病.受损器官或部位包括肝脏、心脏、骨骼、眼、面部、肾脏、血管和皮肤.ALGS产生的原因是配体JAG1或受体NOTCH2突变导致Notch信号通路缺陷而引起的机体多个系统和器官损害.肝内胆管缺乏或消失伴临床上五项主要临床特征:[胆汁淤积、心脏缺陷、脊柱畸形(蝴蝶状椎骨)、眼部异常(角膜后胚胎环)和突出的面部特征(倒三角形)]中的三项及其以上就可以进行确诊.近些年,随着分子诊断技术的进步和各系统表型发病原因的不断研究,ALGS越来越受到重视,该文就这两种突变导致的ALGS的临床表现、发病机制和诊断作一综述.