^125I—AS对血管内皮细胞抑制作用及其影响因素研究

目的:观察125I-血管抑素(125I-AS)对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞抑制作用,探讨时间、温度及125I-AS浓度等因素对抑制作用的影响.方法:利用Ch-T法进行125I-AS标记,纸层析法测标记率,Sephadex-G50柱纯化,并检测125I-AS体外稳定性及生物活性.利用MTT法进行125I-AS对ECV304细胞抑制作用及其影响因素研究.结果:125I-AS标记率为85%,体外较稳定,符合实验要求.125I-AS对ECV304细胞的抑制作用明显强于单纯的125I及AS.抑制作用随时间、温度(4～37℃)及125I-AS浓度增加而增强.抑制作用以37℃、125I-AS浓度(370 KBq/ml,50 μg/ml)作用96 h最强,细胞抑制率达(79.4±3.7)%(P＜0.01).结论:125I-AS有较好的体外稳定性及较强的生物活性,对ECV304细胞的抑制作用明显强于单纯的125I及AS,抑制作用呈时间-效应、温度-效应(4～37℃)和剂量-效应关系.     

放射性碘标记RC-160对A549-hSSTR2细胞受体内化及杀伤作用的研究

目的研究^125I-伐普肽（RC-160）对转染人生长抑素2型受体（hSSTR2）基因的肺腺癌A549细胞（A549-hSSTR2）受体内化的规律，以及^125I-RC-160对A549-hSSTR2细胞的杀伤作用。方法采用放射性配基结合分析法，以^125I-RC·160为放射性配基，测定A549-hSSTR2细胞及未转染hSSTR2基因的A549（A549-pc3）细胞与^125I-RC-160在37℃温育不同时间（0．25，0．5，1，4，8，20和24h）的内化率；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测不同浓度^125I-RC-160、Na ^131I、RC-160对A549-hSSTR2细胞及A549-pc3细胞作用24，48，72和96h的杀伤作用。结果37℃条件下温育，^125I—RC-160迅速与A549-hSSTR2受体结合并使受体发生内化。在温育1h时，A549-hSSTR2细胞结合（膜结合＋内化）的放射性计数为总计数的（18．2±1．9）％，明显高于A549-pc3组[（5．7±1．4）％，P〈0．01]。1h后，A549-hSSTR2细胞膜受体内化率（内化部分放射性计数与总放射性计数比）随时间的延长继续增加，膜结合率（膜结合部分放射性与总放射性计数比）随时间的延长逐渐减少。至24h时，受体内化率达（13．0±1．1）％，膜结合率为（3．9±2．2）％。^125I-RC-160对A549-hSSTR2细胞的杀伤作用较对A549-pc3细胞明显增强，并呈一定的剂量-效应和时间-效应关系，在96h时，3700kBq／ml ^131I-RC-160对A549-hSSTR2的抑制率达（78．8±5．9）％。结论^125I-RC-160可以使转染hSSTR2基因的细胞膜受体内化；^131 I-RC-160对A549-hSSTR2细胞的杀伤作用较强，这为外源性受体基因介导核素靶向性内照射治疗肿瘤提供了实验依据。     

125I-[Tyr3]-octreotide内化及杀伤NCI-H446细胞的研究

目的　探讨小细胞肺癌NCI H4 4 6细胞株内化 [Tyr3] 奥曲肽 ([Tyr3] octreotide,TOC)的能力及1 2 5I TOC杀伤NCI H4 4 6细胞的效应。方法　以1 2 5I TOC为放射配基 ,生长抑素受体 (SSTR)阳性细胞NCI H4 4 6于 37℃与1 2 5I TOC共同保温不同时间后 ,分别检测细胞的总结合、内化及结合到核上的1 2 5I TOC ;采用噻唑蓝 (MTT)法检测不同剂量1 2 5I TOC、游离1 2 5I及TOC在不同时间对细胞存活率的影响。结果　NCI H4 4 6细胞内化1 2 5I TOC和细胞核结合1 2 5I TOC呈时间依赖性 ,至 2 4h最高 ,结合到核上1 2 5I TOC的量为 0 5h的 7倍 ;1 2 5I TOC对SSTR阳性的NCI H4 4 6细胞的杀伤作用呈剂量 效应、时间 效应关系 ,以 74kBq1 2 5I TOC作用 96h的杀伤效应最大 ,细胞存活率降至 (4 4 8± 7 2 ) %。结论　1 2 5I TOC可在SSTR介导下内化进入细胞并可杀伤细胞 ,呈时间 效应和剂量 效应关系。     

痂囊腔菌素A与竹红菌乙素介导的光动力反应对ECV304细胞杀伤效应的比较研究

目的探讨痂囊腔菌素A光动力学疗法(EA-PDT)对ECV304细胞的杀伤效应,并与竹红菌乙素光动力学疗法(HB-PDT)进行比较。方法以不同浓度的痂囊腔菌素A(elsinochromeA,EA)及竹红菌乙素(hypocrellinB,HB)分别孵育人脐静脉血管内皮ECV304细胞4h,然后分别用波长532nmKTP激光,以20mW/cm2功率密度照射1000s。照光后置于37℃、5%CO2的孵育箱中继续孵育24h后,用MTT法分别测定不同浓度下的细胞存活率,绘制杀伤曲线并拟合曲线方程,根据方程求出不同光敏剂对细胞的半数杀伤浓度(IC50)。结果EA-PDT和HB-PDT对ECV304细胞的IC50分别为50·97ng/ml和85·20ng/ml,二者比较差异有统计学意义(P<0·05),EA-PDT对ECV304细胞有较强的杀伤效应。结论EA-PDT对ECV304细胞株的杀伤效应强于HB-PDT,在血管性病变治疗方面可能有广阔的应用前景。     

血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点

目的探讨血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点。方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20 h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率。结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20。HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为（18.22±3.53）%、（10.77±2.06）%、（7.44±1.06）%、（8.56±3.51）%,HaCaT分别为（11.90±1.46）%、（5.02±1.48）%、（3.82±0.54）%、（8.90±2.30）%。结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体。     

125I-血管抑素的制备及生物活性研究

目的：利用^125Ⅰ标记血管抑素（angiostatin，AS），并研究标记产物^125Ⅰ-AS的体外稳定性及生物活性。方法：制备的AS经鉴定后，用Ch-T法进行标记，用纸层析法测标记率，用Sephadex-G50柱纯化，产物分别加入牛血清白蛋白（BsA）、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸以观察其体外稳定性，并通过人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞生长抑制试验来检测^125Ⅰ-AS的生物活性。结果：制备的^125Ⅰ-AS标记率可达85％，^125Ⅰ-AS在生理盐水中1、4、24h的解离率分别为2．3％、5．2％、8．0％，在10g／L BSA中1、4、24h的解离率分别为4．6％、9．1％、11．0％。在不同摩尔比半胱氨酸溶液中孵育，^125Ⅰ-AS存在不同程度的解离，摩尔比在5以下时，4h的解离率不超过11％，表明标记产物在体外较稳定。分别用不同浓度^125Ⅰ-AS和AS作用于ECV304细胞，并以6-氨基己酸作为对照，发现两者对ECV304细胞增殖均有明显的抑制作用，且^125Ⅰ-AS的作用强于单纯的AS，表明^125Ⅰ-AS具有较强的生物活性。结论：用Ch-T法进行^125Ⅰ-AS标记简单易行，^125Ⅰ-AS对ECV304细胞的生长有明显抑制作用，有较强的生物活性，标记产物在体外较稳定。     

CT导引下125I粒子植入治疗免VX2肿瘤的实验研究

目的探讨CT导引下125I粒子组织间植入兔VX2肿瘤模型对细胞凋亡率的影响。方法在20只兔两侧大腿肌肉内建立VX2肿瘤模型,3周后待肿瘤灶长至直径约2cm备用,每只兔随机选择一侧肿瘤灶作为治疗侧,另一侧作为对照侧,治疗侧在CT导引下经皮穿刺将活度为0.9mCi的125Ⅰ粒子植入肿瘤组织内,对照侧肿瘤灶内植入无活性的空心粒子,于术后即刻、72h、1、2、3周在CT导引下分别穿刺距粒子0.5～1cm、1.0～1.5cm处组织检测细胞凋亡率。结果125Ⅰ粒子植入后即刻、72h、1、2、3周距粒子0.5～1.0cm处对照侧和治疗侧细胞凋亡率分别为(5.43±0.67)%和(5.48±0.66)%(P>0.05),(5.45±0.58)%和(11.60±0.87)%(P<0.05),(6.07±0.69)%和(18.8±0.64)%(P<0.05),(5.94±0.43)%和(37.20±0.39)%(P<0.01),(6.30±0.58)%和(36.56±0.67)%(P<0.01)。距125Ⅰ粒子1.0～1.5cm处各个时间点对照侧与实验侧细胞凋亡率差别均无统计学意义(P>0.05)。结论125Ⅰ粒子组织间植入可诱导肿瘤细胞凋亡,植入后72h细胞凋亡率开始增加,术后2周达高峰并维持在高水平,且随距125Ⅰ粒子的距离增加,细胞凋亡率迅速下降。     

宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应

目的用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应。方法采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线（300cGy/min）照射6和10Gy,24和48h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化。结果细胞株受到照射后,C33A凋亡率最高,而SiHa凋亡率最低,其余细胞株（包括ECV304与NIH/3T3细胞）均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10Gy后48h的凋亡率较6Gy稍高（P〉0.05）,而ECV304照射10Gy后48h的凋亡率（13.04%±1.08%）比照射6Gy（6.51%±0.61%）明显升高（P=0.001）;各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24-48hG2/M期阻滞细胞百分比最高。结论高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据。     

单克隆抗体4E5的131I标记及131I-4E5对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤效应

目的 研究CD80单克隆抗体4E5的131I标记及标记产物131I-4E5对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用,为B细胞淋巴瘤的放射免疫导向治疗提供实验依据.方法 采用Iodogen法对4E5进行131I标记,以三氯醋酸法测定标记率和放化纯,并对131I-4E5的免疫活性及稳定性进行分析.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察131I-4E5和4E5对B细胞淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应.采用SPSS13.0软件对数据进行单因素方差分析和t检验.结果 131I-4E5的标记率为(78.3±2.4)％,放化纯为(95.7±1.8)％,比活度为0.58 MBq/μg,放射性浓度为3.90×1010 Bq/L.131I-4E5加入血清中放置3d后,放化纯仍＞90％.131I-4E5与Raji细胞的最大结合率为(36.06±2.63)％;131I-4E5对Raji细胞的杀伤作用呈剂量依赖性,高剂量组的细胞杀伤效应明显强于低剂量组:放射性浓度为1.48×1010、7.40×109、3.70×109、1.85×109和9.25×108 Bq/L时,细胞抑制率分别为(52.98±5.19)％、(46.29±2.80)％、(41.05±4.83)％、(33.68±3.79)％和(17.89±2.78)％,F=33.882,P＜0.001;4E5组(质量浓度为20.0、10.0、5.0、2.5和1.25 mg/L)的细胞抑制率分别为(32.98±3.99)％、(30.88±3.98)％、(27.14±2.05)％、(20.35±4.38)％和(8.42±1.05)％,131I-4E5组显著高于4E5组(t=5.290、5.489、4.596、3.986和5.515,P均＜0.05).结论 Iodogen法131I标记4E5标记率和放化纯高,标记物稳定性好;131I-4 E5可与Raji细胞特异性结合并发挥杀伤效应,为以B细胞淋巴瘤CD80为靶点的放射免疫显像及治疗提供了可能性.     

5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学效应(PDT)杀伤人鼻咽癌细胞株CNE2的可能性.方法 对培养的CNE2分别加入不同浓度的5-ALA(0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)孵育4h,予波长630nm的半导体激光照射,照射能量密度分别为20、10、5、2J/cm2,继续孵育6、12、24h,用四唑盐比色法分别测定细胞存活率.结果 5-ALA-PDT能有效杀伤人鼻咽癌CNE2细胞,其杀伤程度与照射后孵育时间、5-ALA浓度和激光剂量呈正相关(P＜0.01).激光照射后12h,激光能量为20J/cm2,5-ALA浓度为0.5mmol/L时,其杀伤作用最明显.结论 体外培养CNE2细胞对5-ALA介导的PDT敏感.     

3H-TdR与125Ⅰ-UdR掺入淋巴细胞增殖的比较

目的 比较3H-TdR与125Ⅰ-UdR掺入淋巴细胞的增殖效应.方法 用3H-TdR与125Ⅰ-UdR掺入法测定淋巴细胞和Daudi淋巴瘤细胞的增殖效应.结果 3H-TdR和125Ⅰ-UdR在正常淋巴细胞中的掺入率分别为20.95%±1.06%和1.00%±0.04%,在Daudi淋巴瘤细胞中的掺入率分别为29.94%±4.10%和6.02%±0.73%.3H-TdR在细胞中的掺入率明显高于125Ⅰ-UdR;且3H-TdR和125Ⅰ-UdR在淋巴瘤细胞中的掺入率高于正常淋巴细胞.结论 就淋巴细胞而言,作为示踪剂125Ⅰ-UdR不能替代3H-TdR;但对于淋巴瘤细胞,能否代替3H-TdR有待于进一步研究.     

Pairwise comparison of 89Zr- and 124I-labeled cG250 based on positron emission tomography imaging and nonlinear immunokinetic modeling: in vivo carbonic anhydrase IX receptor binding and internalization in mouse xenografts of clear-cell renal cell carcinoma

Purpose

The PET tracer, ¹²⁴I-cG250, directed against carbonic anhydrase IX (CAIX) shows promise for presurgical diagnosis of clear-cell renal cell carcinoma (ccRCC) (Divgi et al. in Lancet Oncol 8:304–310, 2007; Divgi et al. in J Clin Oncol 31:187–194, 2013). The radiometal ⁸⁹Zr, however, may offer advantages as a surrogate PET nuclide over ¹²⁴I in terms of greater tumor uptake and retention (Rice et al. in Semin Nucl Med 41:265–282, 2011). We have developed a nonlinear immunokinetic model to facilitate a quantitative comparison of absolute uptake and antibody turnover between ¹²⁴I-cG250 and ⁸⁹Zr-cG250 using a human ccRCC xenograft tumor model in mice. We believe that this unique model better relates quantitative imaging data to the salient biological features of tumor antibody–antigen binding and turnover.

Methods

We conducted experiments with ⁸⁹Zr-cG250 and ¹²⁴I-cG250 using a human ccRCC cell line (SK-RC-38) to characterize the binding affinity and internalization kinetics of the two tracers in vitro. Serial PET imaging was performed in mice bearing subcutaneous ccRCC tumors to simultaneously detect and quantify time-dependent tumor uptake in vivo. Using the known specific activities of the two tracers, the equilibrium rates of antibody internalization and turnover in the tumors were derived from the PET images using nonlinear compartmental modeling.

Results

The two tracers demonstrated virtually identical tumor cell binding and internalization but showed markedly different retentions in vitro. Superior PET images were obtained using ⁸⁹Zr-cG250, owing to the more prolonged trapping of the radiolabel in the tumor and simultaneous washout from normal tissues. Estimates of cG250/CAIX complex turnover were 1.35 – 5.51?×?10¹² molecules per hour per gram of tumor (20 % of receptors internalized per hour), and the ratio of ¹²⁴I/⁸⁹Zr atoms released per unit time by tumor was 17.5.

Conclusion

Pairwise evaluation of ⁸⁹Zr-cG250 and ¹²⁴I-cG250 provided the basis for a nonlinear immunokinetic model which yielded quantitative information about the binding and internalization of radioantibody bound to CAIX on tumor cells in vivo. ⁸⁹Zr-cG250 is likely to provide high-quality PET images and may be a useful tool to quantify CAIX/cG250 receptor turnover and cG250-accessible antigen density noninvasively in humans.     

Comparison of the binding and internalization properties of 12 DOTA-coupled and 111In-labelled CCK2/gastrin receptor binding peptides: a collaborative project under COST Action BM0607

Purpose

Specific overexpression of cholecystokinin 2 (CCK2)/gastrin receptors has been demonstrated in several tumours of neuroendocrine origin. In some of these cancer types, such as medullary thyroid cancer (MTC), a sensitive diagnostic modality is still unavailable and therapeutic options for inoperable lesions are needed. Peptide receptor radionuclide therapy (PRRT) may be a viable therapeutic strategy in the management of these patients. Several CCK2R-targeted radiopharmaceuticals have been described in recent years. As part of the European Union COST Action BM0607 we studied the in vitro and in vivo characteristics of 12 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA)-conjugated CCK2R binding peptides. In the present study, we analysed binding and internalization characteristics. Stability, biodistribution and imaging studies have been performed in parallel by other centres involved in the project.

Methods

Determination of IC₅₀ values was performed using autoradiography, with DOTA-peptides displacing ¹²⁵I-CCK from receptors on tissue sections from human tumours. Saturation binding and internalization experiments were performed using ¹¹¹In-labelled peptides. The rat AR42J cell line and the human A431-CCK2R transfected cell line were utilized for in vitro experiments; dissociation constants (K_d) and apparent number of binding sites (B_max) were determined. Internalization was determined in receptor-expressing cells by incubating with tracer amounts of peptide at 37 and 4°C for different times up to 120?min. Surface-bound peptide was then stripped either by acid wash or subsequent incubation with 1???M unlabelled peptide at 4°C.

Results

All peptides showed high receptor affinity with IC₅₀ values ranging from 0.2 to 3.4 nM. Saturation experiments also showed high affinity with K_d values in the 10^?9?C10^?8 M range. B_max values estimated in A431-CCK2R cells ranged from 0.6 to 2.2?×?10⁶ per cell. All peptides showed high levels of internalization when incubated at 37°C.

Conclusion

All DOTA-conjugated peptides showed high receptor binding and internalization properties and appear suitable for further characterization, as described in other articles of this issue.     

125I标记CD90单克隆抗体靶向结合间充质干细胞的实验研究

目的 制备125I标记的CD90单克隆抗体（mAb）,探讨其示踪间充质干细胞（MSCs）的可能性。 方法 采用氯胺T法对CD90 mAb进行125I标记,测定标记率。（1）体外实验:检测MSCs和125I-CD90 mAb孵育后上清液和沉淀的放射性计数,分别计算6个不同时间点的细胞结合率。（2）体内实验:构建荷瘤BALB/c裸鼠,采用完全随机法分为4组（每组3只）,a组经腹腔注射MSCs,b组经腹腔注射生理盐水,c组经瘤内注射MSCs,d组经瘤内注射生理盐水。每只荷瘤裸鼠尾静脉注射125I-CD90 mAb（3.7 MBq/0.2 mL）后行Micro-SPECT/CT显像,测定并计算在4个不同时间点肿瘤及主要器官和组织的放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率（%ID/g）]。2组均数之间的比较采用独立样本t检验。 结果 125I-CD90 mAb标记率为54.4%,放射化学纯度为98.79%。（1） 在10 min、30 min、1 h、2 h、6 h、8 h 时,125I-CD90 mAb与MSCs的结合率分别为0.86%、1.73%、1.88%、5.67%、12.20%、10.69%,6 h时最高。（2）荷瘤裸鼠的肿瘤长至150~200 mm3时用于实验。在注射后6 h、1 d、2 d、3 d时,Micro-SPECT/CT显示125I-CD90 mAb在荷瘤裸鼠的肿瘤及主要器官和组织中有着不同程度的分布,其中 a组肿瘤组织的放射性摄取值分别为（3.66±1.69）、（2.35±1.30）、（1.36±0.95）、（1.33±0.84）%ID/g,均高于b组的（2.93±1.74）、（1.92±1.15）、（1.12±0.78）、（1.03±0.72）%ID/g,但差异均无统计学意义（t=0.35~0.52,均P>0.05）;c组肿瘤组织的放射性摄取值分别为（5.75±1.30）、（3.75±0.77）、（2.70±0.44）、（1.88±0.48）%ID/g,均高于d组的（3.17±0.75）、（2.03±0.54）、（1.44±0.39）、（1.38±0.27）%ID/g,且差异均有统计学意义（t=1.59~3.70,均P<0.05）。 结论 成功制备的125I-CD90 mAb具有良好的与MSCs结合的能力,有潜力作为核素探针示踪MSCs。     

晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤

目的 研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物(AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制。方法 用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白(BSA)体外制备AOPP-BSA，将人血管内皮细胞株ECV304与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP-KSA共同培养，用MTT法测定细胞活性，用VICTOR Wallac 1420多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量。结果 AOPP-BSA使血管内皮细胞活性降低，其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP-BSA的浓度有关；AOPP-BSA刺激内皮细胞生成活性氧，细胞内活性氧的生成量随KSA氧化程度和AOPP-BSA浓度增加而升高。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞，可使AOPP-BSA诱导产生的活性氧减少53％，并可保护细胞免受AOPP-BSA造成的细胞损伤。结论 晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤。     

高压氧对内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白及中性粒细胞粘附功能的影响

目的观察高压氧（HBO）对缺氧后中性多核粒细胞（PMN）粘附功能及血管内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的调控作用。方法用人内皮细胞株（ECV 304）与脑梗死患者PMN作模型，观察一定剂量HBO（0．15MPa，1h）对脑梗死患者不同发病时期PMN在ECV 304上粘附率的影响；同时，利用ECV 304作为模型，给予缺氧干预后，观察HBO对ECV 304分泌MCP-1的影响。结果（1）HBO使1周内脑梗死患者PMN与内皮细胞株ECV 304的粘附率由46．77％降低为30．54％（P〈0．01），对脑梗死3周组及健康对照组无明显影响。（2）HBO处理组ECV 304上清液中MCP-1浓度与对照组及常氧高压处理组相比显著降低（P〈0．01）。结论HBO可以通过抑制内皮细胞对MCP-1的分泌及降低PMN-ECV304的粘附来减轻脑缺血再灌注病灶的炎症损伤。     

125Ⅰ-脱氧尿嘧啶核苷-壳聚糖载药纳米微粒的研制和鉴定

目的 研制直径100～200 nm的125Ⅰ-脱氧尿嘧啶核苷-壳聚糖载药纳米微粒(125Ⅰ-UdRCS-DLN),并进一步分析其药物缓释性能和肿瘤靶向性.方法 采用离子交联法制备CS纳米微粒,以单因素分析和正交试验优化制备条件和工艺;用动态透析法分析其释放特性;激光共聚焦显微镜观察其肿瘤靶向性.结果 按照CS浓度1 g/L,搅拌速度600 r/min,TPP浓度2 g/L,相对分子质量为3×103的条件下得到平均粒径(70.39±5.12)nm的纳米微粒(PDI为0.16±0.012).透射电镜观察其外观为规整的球形,大小均匀,分散度较好.在投药量为2.96 MBq/ml、pH值为5的条件下,125Ⅰ-UdR-CS-DLN的载药量1253.55 MBq/g,包封率42.35%,具有明显的缓释作用.激光共聚焦显微镜观察结果证明肿瘤细胞在2 h内摄入的纳米粒子明显多于正常细胞.结论 成功制备了直径为(127.81±15.25)nm(PDI为0.240 ±0.035)的125Ⅰ-UdR-CS-DLN,确定了最佳工艺条件.所制备的纳米粒子具有典型的长效缓释制剂特性,并具有肿瘤细胞被动靶向性,为125Ⅰ-UdR应用于肿瘤内照射治疗提供了更有效的途径.     

Preclinical comparison of (111)In-labeled DTPA- or DOTA-bombesin analogs for receptor-targeted scintigraphy and radionuclide therapy.

The 14-amino-acid peptide bombesin (BN) has a high affinity for the gastrin-releasing peptide (GRP) receptor that is expressed by a variety of tumors. Recently, high densities of GRP receptors were identified by in vitro receptor autoradiography in human prostate and breast carcinomas using [(125)I-Tyr(4)]BN as radioligand. Radiometal-labeled diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA)-BN derivatives are potentially useful radioligands for receptor-targeted scintigraphy and radiotherapy of GRP receptor-expressing tumors. METHODS: [DTPA-Pro(1),Tyr(4)]BN (A), [DOTA-Pro(1),Tyr(4)]BN (B), [DTPA-epsilon-Lys(3),Tyr(4)]BN (C), and [DOTA-epsilon-Lys(3),Tyr(4)]BN (D) (where DOTA is dodecanetetraacetic acid) were synthesized and studied for competition with binding of [(125)I-Tyr(4)]BN to the GRP receptor. The (111)In-labeled BN analogs were studied in vitro for binding and internalization by GRP receptor-expressing CA20948 and AR42J pancreatic tumor cells as well as in vivo for tissue distribution in rats. Specific tissue binding was tested by coinjection of 0.1 mg [Tyr(4)]BN. RESULTS: All BN analogs competitively inhibited the binding of [(125)I-Tyr(4)]BN to the GRP receptor with 50% inhibitory concentration values in the range of 2-9 nmol/L. All (111)In-labeled analogs showed high and specific time- and temperature-dependent binding and internalization by CA20948 and AR42J cells. In in vivo studies, high and specific binding was found in GRP receptor-positive tissues such as pancreas (0.90, 1.2, 0.54, and 0.79 percentage injected dose per gram for A-D, respectively). In a rat model, the AR42J tumor could clearly be visualized by scintigraphy using [(111)In-DTPA-Pro(1),Tyr(4)]BN as the radioligand. Although [(111)In-DOTA-Pro(1),Tyr(4)]BN showed the highest uptake of radioactivity in GRP receptor-positive tissues as well as higher target-to-blood ratios, [(111)In-DTPA-Pro(1),Tyr(4)]BN was easier to handle and is more practical to use. Therefore, we decided to start phase I studies with this DTPA-conjugated radioligand. CONCLUSION: [(111)In-DTPA-Pro(1),Tyr(4)]BN is a promising radioligand for scintigraphy of GRP receptor-expressing tumors. We are currently performing a phase I study on patients with invasive prostate carcinoma.     

眼镜蛇毒MP成分与大鼠大脑皮层及心肌M受体结合的亚型选择性研究

目的初步了解眼镜蛇毒MP成分与M受体结合的亚型选择性。方法制备大鼠大脑皮层组织和大鼠心肌组织两种M受体膜蛋白底物。采用放射配体结合法,分别测定眼镜蛇毒MP成分对[3H]QNB与这两种膜蛋白底物结合的抑制百分率和IC50值,分析MP与M受体结合的亚型选择性。结果 MP均能完全抑制[3H]QNB与这两种膜蛋白底物的结合。大鼠大脑皮层组中,MP的抑制行为呈两相式：第Ⅰ相的抑制率为25%,IC50=0.4 nmol·L-1;第Ⅱ相的抑制率为100%,IC50=248.8 nmol·L-1。心肌组MP的IC50值为22.1 nmol·L-1,约为皮层组第Ⅰ相的55倍、第Ⅱ相的1/10。结论 MP对M受体的结合具有亚型选择性。