低氧时蛋白激酶C对内皮细胞表达血管内皮生长因子的调节作用

目的探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达变化与蛋白激酶C(PKC)活性的关系。方法培养大鼠肺动脉血管内皮细胞 ,观察低氧 ( 1 %O2 )培养 0、1、3、6、1 2h大鼠肺动脉血管内皮细胞PKC活性和VEGFmRNA水平变化 ;同时对培养液中VEGF蛋白水平进行测定。培养基中加入PKC抑制剂 (staurosporine)后 ,立即进行低氧培养 ,测定低氧培养不同时间点上述指标的变化。 结果低氧培养 1hPKC活性首先明显升高 (P >0 .0 5 ) ,至 3hVEGFmRNA表达明显升高 (P <0 .0 1 ) ,6h培养液中VEGF蛋白水平显著升高 (P <0 .0 1 )。而加入PKC抑制剂后 ,低氧培养的内皮细胞PKC活性与 0h比较明显下降 (P <0 .0 1 ) ,相应各时间点的VEGFmRNA及蛋白水平与 0h比较无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论低氧能够刺激大鼠肺动脉血管内皮细胞VEGF表达升高 ,低氧时PKC活性升高是调节VEGF表达升高的重要因素之一     

葡萄糖对内皮细胞蛋白激酶C活性、通透性及粘附性的影响

目的　研究不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞的蛋白激酶C(PKC)活性、通透性及粘附性的影响。方法　用[γ32 P]ATP参入外源性底物的方法测定人脐静脉内皮细胞(HUVECs )PKC活性;用51 Cr标记的静止血小板与HUVECs保温,测定内皮细胞的粘附性;用HUVECs对白蛋白的体外通透性实验测定内皮细胞的通透性。结果　2 0mmol L的高浓度葡萄糖可最大程度活化HUVECs的PKC ,膜PKC活性为( 2 874±0 0 4 6 )mmol·mg- 1 ·min- 1 ,明显高于浆PKC活性[( 1 2 15±0 0 19)mmol·mg- 1 ·min- 1 ,P <0 0 1];HUVECs在2 0mmol L高浓度葡萄糖作用下的最大粘附率为( 6 2 84±3 2 4 ) % ,对白蛋白的最大通透率为( 0 32±0 0 0 2 )ng ml,明显高于对照组(P <0 0 1) ;HUVECs的PKC总活性与HUVECs的通透性及粘附率的相关系数r分别为0 84 6、0 734(P均<0 0 5 )。PKC抑制剂CalphostinC能抑制高浓度( 2 0mmol L)葡萄糖对HUVECs的PKC活化,并使HUVECs的通透性及粘附率明显下降。结论　高浓度葡萄糖( 2 0mmol L)可活化血管内皮细胞的PKC ,进而增加其通透性及粘附性;而PKC抑制剂能对其明显阻抑     

肝细胞生长因子对心肌细胞及血管平滑肌细胞、血管内皮细胞生长因子分泌的作用

观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的牛冠状动脉血管内皮细胞 (BCAEC)、牛冠状动脉血管平滑肌细胞 (BCASMC)和小鼠心肌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。BCAEC对照组与HGF组 12hVEGF浓度分别为 10 5 1± 2 90和 9 31± 2 78pg/ml;BCASMC对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 3 35倍和 3 93倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 0 6倍和 2 4 2倍 ;心肌细胞对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 5 4 3倍和 4 0 9倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 74倍和 2 0 6倍。提示BCAEC、BCASMC及小鼠心肌细胞均具有自分泌VEGF的作用 ,HGF促进BCASMC和心肌细胞VEGF的分泌 ,对BCAEC无影响     

高压氧对大鼠血管内皮损伤超微结构及血浆内皮素-1浓度的影响

目的　观察 SD大鼠血管内皮细胞 (VEC)损伤后高压氧 (HBO)对内皮细胞修复中超微结构和功能的影响。方法　将 4 4只大鼠随机分成 6个组 :正常组 (N组 ,n=6 )、模型对照组 (M组 ,n=10 )、模型制作后 HBO治疗 5 d组 (T1 组 ,n=7)和 10 d组 (T2 组 ,n=7)以及高压空气 (HBA)治疗 5 d组 (T3组 ,n=7)和 10 d组 (T4 组 ,n=7)。血管内皮损伤模型均以皮下注射肾上腺素制成。观察其降主动脉VEC超微结构的改变 ,并用放免法测定血浆 ET- 1浓度变化。结果　 T1 组和 T2 组血管内皮损伤均比 M组轻 ,血浆 ET- 1浓度也低于 M组 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;T3组和 T4 组与 M组比 ,ET- 1浓度无明显变化。结论　 HBO不但可以减轻 VEC损伤的发生发展过程 ,而且可以对损伤的血管内皮起到促进其修复和保护其功能的作用。     

血管内皮细胞增殖过程中碘离子与血管内皮生长因子及其受体的关系

目的探讨血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)增殖过程中碘离子与血管内皮生长因子(VEGF)及其受体的关系。方法①采用CCK-8法检测碘离子与VEGF抑制剂作用后VEC的增殖率。②采用蛋白质印迹技术(Western印迹法)检测碘离子对血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)磷酸化的影响。结果①在300μg/L碘离子环境中,使用VEGF抑制剂并不能抑制VEC的增殖(P<0.05)。②一定浓度的碘离子可促进VEGFR-2(Tyr1214)磷酸化水平上调(P<0.05)。③碘离子对VEGFR-2(Tyr1175,Tyr951位点)的磷酸化无影响。结论①碘离子促进VEC增殖并不依赖于VEGF对膜受体的刺激,碘离子可视为促VEC增殖的独立因素。②碘离子通过刺激膜受体VEGFR-2(Tyr1214)磷酸化水平上调,介导VEC迁移。③碘离子对VEGFR-2的Tyr1175位点的磷酸化无影响,其对VEC的促增殖效应并不是通过作用于膜受体。     

糖皮质激素对血管内皮炎性损伤的保护机制

目的 探讨糖皮质激素对血管内皮细胞的保护机制.方法 以脂多糖(LPS)致伤体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)复制内皮细胞炎性损伤模型,观察地塞米松(Dex)作用后其IL-6、可溶性胞间黏附分子1(sICAM-1)分泌及细胞凋亡率的变化,以及糖皮质激素受体拮抗剂RU486对地塞米松作用的影响.结果 LPS诱导后HUVEC凋亡率达36.7%±3.9%,而Dex对此有明显抑制作用,可使凋亡率降至13.2%±0.9%(P＜0.01).在LPS刺激下,HUVEC分泌IL-6和sICAM-1的量明显增多.Dex可以明显抑制LPS诱导的IL-6、sICAM-1分泌和HUVEC凋亡,且呈一定的浓度依赖性,Dex浓度增加到10-6mol/L时,其抑制效应达最大值,继续增加Dex的浓度到10-5mol/L和10-3mol/L时,并不能再增强其效应.RU486可逆转Dex的作用.结论 糖皮质激素可通过糖皮质激素受体途径抑制IL-6与sICAM-1的分泌和细胞凋亡,对血管内皮细胞的炎性损伤起到保护作用.     

高原肺水肿治疗前后血管内皮细胞生长因子的表达

血管内皮生长因子 ( vascular en-dothelial growth factor,VEGF)是新近确定的一种存在于血管内皮细胞、特异刺激血管内皮细胞增殖的活性肽。许多研究表明 ,VEGF为缺氧所诱导 ,且缺氧组织的内皮细胞对 VEGF的反应比正常组织强。高原肺水肿是低压低氧环境引起机体的组织器官重度缺氧、主要表现在呼吸器官的一种高原特发性疾病。研究高原肺水肿治疗前后 VEGF的异常表达 ,对进一步探讨高原肺水肿的发病机理和病理生理有重要意义。一、对象和方法1.对象 :8例高原肺水肿患者均来自海拔 430 0 m以上的边防哨卡和新藏公路沿线 ,男性 ,平原出…     

血管内皮细胞生长因子基因转染皮肤成纤维细胞的实验研究

为改善人工复合皮在临床上的应用效果 ,构建人血管内皮细胞生长因子 16 5 (hVEGF165)基因重组载体pcDNA3,并转染成纤维细胞。检测转基因细胞培养上清液VEGF浓度 ;用转基因细胞培养上清液刺激人脐静脉血管内皮细胞 ,观察内皮细胞增殖速度 ;通过Miles实验检测VEGF的生物学活性。结果显示 ,转基因成纤维细胞能够表达一定浓度的VEGF,且具有加速体外培养人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)生长和增强血管通透性的生物学活性。提示转hVEGF165基因成纤维细胞可修饰人工皮的真皮面。     

FIZZ1对大鼠主动脉内皮细胞血管新生的促进作用及其机制探讨

目的 探讨抵抗素样分子α(FIZZ1)对大鼠主动脉内皮细胞血管新生的影响及其机制.方法 采用贴壁法培养Wistar大鼠主动脉内皮细胞,将实验分为4组:A组(对照组)、B组(5×10-9mol/L FIZZ1组)、C组(1×10-8mol/LFIZZ1组)、D组(2×10-8mol/L FIZZ1组).采用Matrigel小管形成实验评价不同浓度的FIZZ1对大鼠主动脉内皮细胞体外血管新生的影响.采用全基因表达谱检测FIZZ1对主动脉内皮细胞信号通路活性的影响,筛选出活性有显著差异的信号通路.结果 FIZZ1刺激后,B、C、D组新生血管数目(分别为22.6±2.9、28.5±3.3、36.9±5.0个/HP)均明显高于对照组(19.7±2.6个/HP,P＜0.01),且呈剂量依赖性.全基因表达谱检测提示,FIZZ1刺激后有22条信号通路的活性出现明显改变,其中活性上调信号通路12条,如调节细胞肌动蛋白骨架通路(rno04810)等,活性下调信号通路10条,如上皮细胞细菌侵入通路(rno05100)等.结论 FIZZ1可促进大鼠主动脉内皮细胞血管新生,其机制可能与信号通路调节细胞肌动蛋白骨架通路(rno04810)活性上调有关.     

高原心脏病患者血浆血管内皮生长因子水平的变化及其意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)水平在高原病发病中的作用 ;方法 :采用ELISA法检测HACC和低氧适应者血浆VEGF水平 ;结果 :HACC组较平原适应组VEGF水平升高 ,HACC组血浆VEGF为 44 .1 0 pg/ml± 2 7.95 8pg/ml,高原适应组为 2 5 .5 pg/ml± 2 .1 73 pg/ml(P <0 .0 5 ) ;结论 :VEGF水平升高与血管内皮损伤及内皮细胞增多有关 ,防止血管内皮损伤可减少HACC的发生、发展。     

肺癌血管内皮生长因子的表达及其意义

采用ＳＰ免疫组织化学方法观察血管内皮生长因子在９４例肺癌组织的表达。结果显示，ＶＥＧＦ在肺癌组织表达的阳性率为７０．２％，明显高于癌旁正常组织。     

腺病毒介导的VEGF-B基因促血管内皮细胞增殖作用的研究

为观察腺癌毒素介导的血管内皮细胞生长因子B（VEGF－B）基因体外转染对血管内皮细胞的促增殖作用，构建编码人VEGF－B基因的复制缺陷的重组腺病毒载体，体外转染鼠主动脉血管内皮细胞（RAECs），应用RT－PCR和Western blot检测外源VEGF－B的表达，应用四唑盐（MTT）观察转染后RAECs的增殖。结果发现，RAECs可有效地被重组腺病毒载体感染，并能成功转录和表达VEGF－B基因和蛋白，在转染后细胞培养上清中检测到VEGF－B蛋白的表达，对RAECs有显著促增殖作用。提示重组腺病毒载体介导的人VEGF－B基因有血管新生作用，可用于缺血性心脏病的治疗。     

一氧化氮损伤内皮细胞的机制研究

体外培养人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），主要研究：①内毒素损伤内皮细胞过程中一氧化氮（ＮＯ）的作用；②不同浓度ＮＯ供体ＳＩＮ－１对内皮细胞的作用以及ＳＯＤ、ＣＡＴ对内皮细胞的保护作用。结果提示：ＮＯ在内毒素损伤内皮细胞过程中发挥重要作用；高浓度ＳＩＮ－１可严重损伤内皮细胞；ＳＯＤ、ＣＡＴ对内皮细胞的不同保护作用说明ＯＮＯＯ＾－的产生可能是ＮＯ损伤内皮细胞的重要机制。     

肾小球内皮细胞凋亡与细胞外基质表达

用不加生长因子的无血清培养方法诱导人肾小球内皮细胞细胞凋亡。结果显示，培养４８ｈ后无血清培养组内皮细胞的ＤＮＡ电泳呈现凋亡细胞典型的“梯形结构”条带；同时用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法发现，凋亡内皮细胞纤维连接蛋白的蛋白质和基因表达均明显增高。提高肾小球内皮细胞的凋亡紊成可能与肾小球硬化时细胞外基质的积聚有关，为揭示肾小球肾炎及肾小球硬化的发生和转归提供     

供者特异性血管内皮细胞对异种免疫耐受的诱导作用

为探讨异种免疫耐受的可能性,以豚鼠－大鼠心脏移植建立超急性排斥反应模型,在眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ,３０Ｕ／ｋｇ）及环磷酰胺（ＣＹＰ）的覆盖下将诱导原（大鼠血管内皮细胞,ＥＣｓ）以每只４×１０６ 个注入受者的门静脉,１４ 天后行颈部心脏移植,注射供者特异性ＥＣｓ 的实验组供心存活时间明显延长（４６．１±８．５）ｍ ｉｎ,加用ＣＹＰ后则延长更为明显（５４．５±９．７）ｍ ｉｎ,同时ＥＣｓ 溶解率下降,ＣＹＰ也有一定延长移植物存活的作用（３４．６±８．７）ｍ ｉｎ,而非特异性ＥＣｓ无此作用。结果表明：在豚鼠－大鼠异种移植模型,供者特异性ＥＣｓ经门静脉径路可诱导受者产生一定程度的免疫耐受,这种耐受的产生机制尚需进一步研究     

严重烧伤后内皮细胞损伤及其在早期脏器损害发病中的作用

３０％Ⅲ度烧伤兔伤后血浆渗透压下降，ＣＥＣ及ＡＣＥ活性升高，血管内皮细胞明显形态学改变，表明伤后内皮细胞受损。缺氧、烧伤血清、ＴＮＦ、内毒素、ＦＰＡＢ及活化粒细胞能损伤培养的人脐静脉内皮细胞。３０％Ⅲ度烧伤大鼠伤后血浆ＥＴ－１明显增多，ＥＴ－１、ＥＴＡ、ＥＴＢ、ｍＲＮＡ于心肺肝肾的表达，于伤后斑点杂交与原位杂交的结果，均表明其明显增强。烧伤内皮素增加，不但使血管收缩，而且增加内皮细胞透性。采用细胞     

开搏通对自发性高血压大鼠血管内皮细胞功能的影响

为探讨开搏通(CPT)对自发性高血压大鼠(SHR)的血管内皮细胞(VEC)功能的影响,本文对9只SHR给予CPT(CPT组)7d,分别以10只WKY大鼠和10只SHR为正常对照组(WKY组)和实验对照组(SHR组),观察大鼠的血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)的浓度及给药前后血压(BP)的变化。结果显示,CPT组给药第4天和给药第7天BP均较给药前下降(P<0.001);CPT组的NO高于SHR组(P<0.01),而其ET低于后者(P<0.01)。提示CPT可改善SHR的VEC功能,增加NO合成与释放、减少ET的产生与分泌,这可能是CPT降压的又一重要机制。     

烧伤血清对中性粒细胞与内皮细胞粘附力学特性的影响

应用微管吸吮技术测量了烧伤血清刺激后２４ｈ内中性粒细胞（ＰＭＮ）与内皮细胞（ＥＣ）粘附力的变化，并应用流式细胞术（ＦＣＭ）检测了务血清作用下介导ＰＭＮ－Ｅ 的主要３个粘附分子：ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８和细胞间粘附因子－１（ＩＣＡＭ－１），以探讨ＰＭＮ－ＥＣ粘附力的分子基础，发现ＰＭＮ在烧伤血清刺激后与正常体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）间粘附力迅速上升，于１ｈ达到饱和点，     

纤维蛋白对肾小球内皮细胞表达胞间粘附分子-1的影响及其机制探讨

观察体外培养的肾小球内皮细胞表面原位形成纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表面胞间粘附分子－１的影响。结果：８５％－９３％在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养液中培养的ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１阳性。纤维蛋白显著促进ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１，呈现明显的剂量，时间依赖关系。放线菌酮和放线菌素Ｄ均可阻断纤维蛋白诱导的ＩＣＡＭ－１表达增强Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示，纤维收白刺激ＧＥＣ４ｈ可诱导ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达增强。     

脂多糖对复合培养的肺微血管内皮细胞表达IL-6的影响

以脂多糖（LPS）处理与大鼠肺动脉平滑肌细胞复合培养的肺微血管内皮细胞，测定两种细胞培养上清中白细胞介素6（IL-6）的活性，采用RT-PCR方法检测单独培养和复合培养的肺微血管内此细胞正常组以及LPS2h、6h、12h组IL-6基因的表达水平。结果发现，LPS刺激单独培养和复合培养2h组肺微血管内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞上清中IL-6的活性均明显增强，8h组两种细胞上清中IL-6的活性均最强，16h组的活性均减弱，24h组的活性低于2h组；两种细胞单独培养组的活性明显强于复合培养组；LPS刺激单独培养和复合培养2h组肺微血管内皮细胞中IL-6mRNA表达水平升高，8h达最高，16h有所降低，但仍高于正常组；单独培养组的IL-6mRNA表达水平明显高于复合培养组。说明LPS可促进单独培养和复合培养的两种细胞培养上清中IL-6活性升高，增强单独培养和复合培养的肺微血管内皮细胞中IL-6基因的表达，复合培养可使IL-6活性和基因水平降低。