维药阿里红多糖的提取及免疫活性研究

目的 对新疆维药阿里红中的多糖进行提取,并研究阿里红粗多糖体外免疫活性。方法 建立热水提取、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白的方法提取阿里红多糖(FoP),红外及紫外吸收光谱检测其性质,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;采用MTT法检测不同浓度FoP在体外对小鼠脾细胞及腹腔巨嗜细胞增殖率的影响。结果 FoP产率为0.85%,多糖含量为68.81%;IR谱中,3 423,2 929,1 651,1 456,1 130,1 091,617 cm^-1处表现为典型的多糖吸收峰;UV谱中,260,280 nm处均无吸收峰;体外活性试验中,FoP对小鼠脾细胞、腹腔巨嗜细胞的生长具有明显的促进作用。结论 FoP具有一定的免疫调节活性。     

维药阿里红多糖的提取及免疫活性研究

目的对新疆维药阿里红中的多糖进行提取,并研究阿里红粗多糖体外免疫活性。方法建立热水提取、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白的方法提取阿里红多糖（FoP）,红外及紫外吸收光谱检测其性质,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;采用MTT法检测不同浓度FoP在体外对小鼠脾细胞及腹腔巨嗜细胞增殖率的影响。结果 FoP产率为0.85%,多糖含量为68.81%;IR谱中,3423,2929,1651,1456,1130,1091,617cm^-1处表现为典型的多糖吸收峰;UV谱中,260,280nm处均无吸收峰;体外活性试验中,FoP对小鼠脾细胞、腹腔巨嗜细胞的生长具有明显的促进作用。结论 FoP具有一定的免疫调节活性。     

对天然产物抑制HIV-1逆转录酶的评价

对HIV-1逆转录酶的抑制是目前被认为是预防爱滋病有益的新进展。天然产物已广泛用作HIV-1逆转录酶(HIV-1RT)的抑制剂。作者开发的在病毒粒子中检测HIV-1的方法,可作为天然产物对HIV-1RT的抑制作用的筛选方法,作者筛选了156种纯天然产物。鸟成髓细咆血症病毒逆转录酶的抑制剂苯并菲啶生物碱氯化崖椒宁(fagarnoninechloride)和氯化两面针碱(nitidine chloride)对HIV-1RT具有显著活性,因此以这两个化合物作为筛选时的阳性对照。作者发现非洲汉防己碱(columbamine)和另一些原小檗碱异奎宁碱(如o-methyl psychotrine sulfate和iri-doid fulvo plumierin)具有抑制作用。而一些吲哚类等其它类型的生物碱却无活性。作者筛     

北苍术多糖的酶法辅助超声提取工艺的优化及其体外抗肿瘤活性研究

目的通过生物酶解技术优化北苍术多糖的酶辅助超声提取方法,并考察其体外抗肿瘤活性。方法选用纤维素酶和果胶酶水解北苍术药材,酶解后采用超声法提取北苍术药材中多糖。以多糖得率为指标,在单因素试验的基础上采用4个因素(酶用量、酶解时间、酶解pH值、酶解温度)3个水平L9(34)正交设计法对酶解条件进行优选,并选用苯酚–浓硫酸法测定多糖,采用MTS、台盼蓝法对北苍术粗多糖体外抗肿瘤活性进行初探。结果最佳酶解条件为酶用量为药材1.2%、在60℃、pH 5条件下酶解50 min,再以超声提取40 min,北苍术多糖的得率为32.29%,所提粗多糖对HeLa细胞增殖的抑制率为64.42%。结论酶解辅助超声提取北苍术中多糖简便易行,可以提高多糖得率,多糖活性较好。     

淫羊藿多糖的提取及其蛋白的脱除

目的 研究淫羊藿多糖提取及脱蛋白工艺.方法 采用不同提取温度、提取时间和料液比进行单因素试验,并采用正交试验优化提取条件.以蛋白质脱除率和多糖损失率为考察指标,比较Sevage法、氯化钠法、氯化钙法、鞣酸法及盐酸法的脱蛋白效果.结果 淫羊藿多糖提取的最优工艺参数为;提取温度90℃、提取时间4 h、料液比1;40.Sevage法的蛋白脱除率高达68.71%,多糖损失率仅为21.5%.结论 淫羊藿多糖提取工艺稳定可行,Sevage法脱蛋白效果较好且多糖损失率最低.     

金线莲多糖的提取优化与纯化

目的 以响应面法优化超声提取金线莲多糖的工艺,同时,对多糖纯化中除蛋白方法进行考察。方法 以多糖提取率为检测指标,在单因素考察的基础上采用Box-Behnken实验设计及响应面法对料液比、超声时间、超声提取温度3个因素进行优化;以多糖保留率和蛋白脱除率对Sevage试剂法、TCA法、盐法（NaOH-CaCl₂法和NaOH-NaCl法）、盐酸法5种脱蛋白方法进行考察。结果 金线莲多糖最佳提取工艺为: 料液比1∶10,超声提取温度48 ℃,超声提取时间36 min,超声提取次数2次,超声功率为300 W,该条件下金线莲多糖提取率达到了13.13%;同时以NaOH-CaCl₂法脱蛋白,多糖损失率为18.74%,蛋白脱除率为95.62%。结论 超声提取操作简单,优化后提取方法能够取得较高提取率,NaOH-CaCl₂法脱蛋白能够获得较高蛋白脱除率及多糖保留率,该方法适用于金线莲多糖活性成分的开发研究。     

红厚壳属植物中的香豆素类和呫吨酮类化合物对HIV-1逆转录酶和HIV-1复制 的抑制

作者从斯里兰卡红厚壳属植物中分得多种香豆素类、呫吨酮类和色烯酸类化合物,并用其绿色荧光蛋白报道基因的细胞(HOG.R5)实验测试了这些化合物对 HIV-1和HIV-1逆转录酶(HIV-1RT)的抑制活性。试验以绵毛胡桐内酯 A(calanolide A)为阳性对照药(IC_(50) 0.067μmol/L)。结果显示,cordatolide A(1)和 B(2)抑制 HIV-1的复制,IC_(50)分别为19.3和11.7μmol/L。Corda-     

萝藦果壳多糖脱蛋白方法研究

目的确定萝藦果壳多糖脱蛋白的最优方法。方法以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,比较氯仿-正丁醇法(Sevag法)、三氯乙酸法(TCA法)、木瓜蛋白酶-Sevag法和木瓜蛋白酶-TCA法。结果 Sevag法、TCA法、木瓜蛋白酶-Sevag法、木瓜蛋白酶-TCA法的蛋白脱除率分别为73.14%,71.55%,86.03%,75.33%,多糖损失率分别为24.40%,25.68%,8.47%,17.13%。结论木瓜蛋白酶-Sevag法是除去萝藦果壳多糖中蛋白的最佳方法。     

几种抑制HIV-1复制酶的植物成分

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点, 已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一。为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物, 本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型, 对45个来源于毛茛科、芸香科和五味子科等植物的结构清楚的化合物进行了体外活性测定。12个三萜类化合物中8个具有抑制HIV-1 PR活性, 其中2个还具有抑制IN活性; 15个木脂素类化合物中2个具有抑制HIV-1 RT活性。6个生物碱类、7个黄酮类及5个其他结构类型的化合物都无明显抑制3种复制酶的作用。植物来源的三萜类化合物抑制PR或IN的活性较好, 值得深入研究。     

静态离子交换法脱除黄芪粗多糖液中蛋白的研究

目的筛选黄芪粗提多糖除蛋白的最优工艺条件。方法通过一系列因素的考察,以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,考察离子交换树脂对黄芪粗多糖除蛋白的最优工艺,并采用吸附等温线对蛋白的脱除效果进行评价。结果经筛选,D152阳离子交换树脂具有较好的蛋白脱除效率,且对多糖含量影响较小,其蛋白脱除率和多糖保留率分别为68.5%和97.3%,D152树脂对蛋白质的吸附呈单分子层吸附,其最大吸附量q0为16.50mg/g。结论 D152阳离子交换树脂适用于黄芪粗多糖的除蛋白,为其工业化生产奠定基础。     

高乌头炮制品的HPLC指纹图谱研究及其2种生物碱成分含量测定

目的 建立不同产区高乌头炮制品的HPLC指纹图谱,并测定2种生物碱成分的含量,为高乌头制品质量控制提供参考依据。方法 通过HPLC梯度洗脱建立高乌头炮制品的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)、主成分分析(PCA)和聚类分析(CA)对指纹图谱进行分析。结果 建立了高乌头炮制品指纹图谱,10批高乌头制品的相似度均大于0.90,标定共有峰18个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定;聚类分析(CA)将所有批次高乌头制品分为4类,反映了10批不同产区高乌头制品的质量特征;主成分分析(PCA)筛选出累计贡献率达到88.824%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量7个化学成分。结论 该方法重现性好、特征性强可用于高乌头炮制品全面质量评价。     

基于假病毒技术探讨黄芩苷抗HIV-1活性研究

目的:基于假病毒技术探究黄芩苷抗HIV-1活性作用.方法:利用HIV-1骨架质粒NL4-3 mCherry Luciferase、HIV-1包膜蛋白质粒pCMV-VSV-G和人胚肾细胞HEK-293T构建HIV-1假病毒药物筛选体系,并对该体系进行优化和安全性验证.测定黄芩苷对293T细胞活性、HIV-1假病毒活性、H...     

HIV-1 inhibitory compounds from Calophyllum brasiliense leaves

The hexane, acetone and methanol extracts of Calophyllum brasiliense leaves were fractionated following a three bioassay guide: high HIV-1 RT inhibition, low cytotoxicity on MT2 cells and high inhibition of HIV-1 IIIb/LAV replication. This led to the isolation of three anti HIV-1 dipyranocoumarins: calanolides A and B and soulattrolide. In contrast, other isolated compounds such as apetalic acid, isoapetalic acid, a structural isomer of isoapetalic acid, friedelin, canophyllol and amentoflavone were devoid of HIV-1 RT inhibitory activity. Calanolide C was also obtained as a natural product and showed moderate inhibitory properties.     

不同生长年限泰山四叶参中多糖的含量测定

目的:从栽培的不同生长年限的泰山四叶参中提取多糖并测定其含量。方法:四叶参粗粉经脱脂、醇提后用水提醇沉法提取粗多糖,氯仿-正丁醇(4∶1)脱蛋白,苯酚-硫酸法测定其含量。结果:2年、3年和4年生泰山四叶参中多糖的含量依次为8.82%、10.47%和11.32%;平均回收率为96.09%,RSD=1.25%(n=6)。结论:4年生泰山四叶参中多糖含量最高。本法简便、准确,可为确定泰山四叶参的合理采收时间奠定科学基础。     

一种减少包涵体变复性过程中产生的蛋白多聚体的方法

目的  优化蛋白制备工艺,减少原核表达包涵体变复性产生的多聚体。方法  根据原始工艺进行菌体培养、破壁以及包涵体收集和变复性。然后在包涵体复性液中直接添加硫酸铵固体（优化工艺）。离心去沉淀,收集上清液制备蛋白粗制品。对原始工艺和优化工艺制备的蛋白粗制品进行凝胶蛋白结合量、蛋白回收率、纯化蛋白量以及细胞杀伤活性比较。结果  与原始工艺相比,增加30%饱和度硫酸铵沉淀步骤的优化工艺可使1 ml层析凝胶的蛋白结合量由1 mg提高至20 mg,单位体积发酵液蛋白回收率由10%增加至90%,400 ml发酵液所得的纯化蛋白量由3 mg提升至15 mg。蛋白粗制品的平均半数抑制浓度从0.077 99 µg/ml降至0.045 69 µg/ml。结论  在包涵体复性液中添加硫酸铵可有效减少多聚体。     

牛膝多糖硫酸酯体外和体内抗艾滋病病毒作用

牛膝多糖硫酸酯(Achyranthes bidentata polysaccharide sulfate，ABPS)为牛膝多糖经硫酸酯化修饰后获得的产物，其结构清楚、理化性质稳定及分子质量小，具有抗单纯疱疹病毒、柯萨奇病毒和乙型肝炎病毒等作用。本文研究其在体外和体内的抗艾滋病病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)活性。体外采用 ³H掺入法和酶联免疫吸附法测定ABPS对HIV-1逆转录酶和整合酶的活性，其半数抑制浓度(50% inhibiting concentrations,IC₅₀)分别为(2.948±0.556) μmol·L^-1和(0.155±0.030) μmol·L^-1， 但25 μmol·L^-1 ABPS对HIV-1蛋白酶无效。ABPS在MT-4细胞培养内对HIV-1实验病毒株IIIB和在人外周血单核细胞培养内对AZT耐药病毒株的急性感染有较强的抑制作用， 但在HIV-1 IIIB慢性感染的H9细胞培养中则无效。血清药理学研究表明，单次腹腔注射大鼠ABPS 125 mg·kg^-1或连续腹腔注射小鼠ABPS 3 mg·kg^-1(qd×20)后鼠血清在MT-4细胞培养内对HIV-1 P24抗原都有抑制作用，但口服ABPS生物利用度低，灌胃大鼠ABPS 2 g·kg^-1或灌胃小鼠ABPS 300 mg·kg^-1无效。实验结果提示ABPS有抗HIV-1作用，有可能用于防治HIV-1感染，值得进一步研究。