以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法的确定和验证

目的 确定并验证以白细胞介素-8 （IL-8）作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法 将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h,在光照射（1.7 mW·cm^-2,50 min）或避光处理后,细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射（光照30 min,然后避光15 min）处理。用Luminex液相芯片检测技术测定细胞培养上清和细胞裂解液中IL-8和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量并统计分析,进一步确定评价光致敏的细胞因子指标,并进行方法验证。结果 与非照射组比较,13种光致敏剂均引起照射组THP-1细胞IL-8总含量显著增加（P<0.01） ,阿伏苯宗为非照射组的1 148～2 269倍,其余12种为非照射组的6.7～195.1倍;光刺激剂经光照射后也可引起细胞分泌IL-8显著增加（P<0.01） ,但经过预照射处理后,IL-8的含量相比直接照射组显著下降（P<0.01）。未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞分泌IL-8比对照组显著增加（P<0.01） ,光照后IL-8含量虽也较非照射组显著增加（P<0.01） ,但增加的幅度小于皮肤致敏剂本身引起IL-8变化的幅度。在光照条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物均可引起细胞分泌IL-8较非照射组显著性增加（P<0.05） ,但增加的幅度较小,与对照组相似。以上受试物引起光照前后细胞TNF-α变化的幅度均与对照组相近。以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是77.8%、100.0%、68.4%,并且该方法具有良好的重复性。结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞因子标志物评价指标为IL-8,判定标准为： ①UVA照射后THP-1细胞中IL-8含量比非照射组显著增加;②UVA照射组与非照射组IL-8含量比值≥6.5;③当上述两条均满足时,对受试物进行UVA预照射处理,预处理照射组IL-8的含量与直接照射组（未经预照射）相比无显著性差异,且预处理照射组与预处理非照射组IL-8含量比值≥6.5。     

CD226、CD96在非小细胞肺癌患者NK细胞中的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者自然杀伤（NK）细胞中CD226、CD96的表达水平及意义。方法 选择2016年1月—2017年1月我院收治的85例NSCLC患者为研究对象,选取同期在本院进行健康体检的50例正常人为对照。采用流式细胞术检测外周血NK细胞中活化受体CD226、CD96和NK细胞抑制性受体TIGIT的表达,并分析CD226、CD96与NSCLC患者临床病理特征的关系。采用Pearson分析CD226与CD96表达水平的关系;免疫组化法检测NSCLC组织和癌旁组织中CD226和CD96的共同配体CD155的表达,并分析CD155与NSCLC患者临床病理特征的关系。结果 NSCLC患者和正常人外周血NK细胞中CD226、CD96、TIGIT的阳性表达率分别为（75.32±12.02）% vs. （84.23±4.01）%（P<0.05）,（25.31±5.36）% vs. （34.26±10.23）%（P<0.05）,（47.36±20.08）% vs. （52.31±18.36）%（P>0.05）。Pearson分析结果显示,CD226⁺ NK细胞比例与CD96⁺ NK细胞比例呈正相关（r =0.486, P<0.05）。NSCLC高/中分化患者CD226⁺ NK细胞比例明显高于低分化患者（P<0.05）。无淋巴结转移患者CD96⁺ NK细胞比例明显高于有淋巴结转移患者（P<0.05）。NSCLC组织中CD155免疫组化染色总分明显高于癌旁组织（P<0.05）,CD155的表达水平与患者临床病理特征无明显相关性（P>0.05）。结论 NSCLC患者NK细胞中CD226、CD96的表达水平均明显降低,这可能对肿瘤免疫逃逸有一定影响;上调NK细胞中CD226和CD96的表达可能成为治疗CD155阳性NSCLC患者的潜在方法。     

体外人源细胞激活试验法应用于4种染发剂的皮肤变态反应研究

目的 研究体外人源细胞激活试验h-CLAT法应用在染发剂的皮肤变态反应检测中的可行性,通过和现行化妆品标准中体内皮肤变态反应法的比较,评价体外人源细胞激活试验应用在染发剂皮肤变态反应试验上的优劣。方法 参考OECD指导原则442E的体外人源细胞系激活试验方法,应用流式细胞仪技术在类树突样的人源白血病细胞系THP-1上对4种染发剂进行体外皮肤变态反应检查,并与体内皮肤变态反应法的检测结果相比较。结果 体外h-CLAT试验表明,4种染发剂中#2,#3和#4染发剂的CD54RFI都 < 200且CD86RFI < 150,即体外试验结果为阴性与体内皮肤变态反应试验比较,结果一致;而#1染发剂为体外结果阳性,且有效致敏浓度为315 μg·mL^-1,与体内变态反应阴性结果不同。结论 与体内皮肤变态反应试验相比,体外人源细胞系激活试验在对染发剂的检验上有周期短、测试方法简便、评价结果客观等优点。缺点是无法反映整个过敏反应的过程,存在假阳性的可能。     

基于生物信息学的CD39对肺腺癌免疫微环境及其免疫治疗的影响分析

目的 采用生物信息学方法探讨CD39基因在肺腺癌组织中的表达情况,并分析CD39与肺腺癌免疫微环境及免疫治疗响应的关系。方法 通过The Cancer Genome Atlas （TCGA）数据库分析CD39在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达差异。采用基因集富集分析（GSEA）研究CD39可能富集的免疫相关通路;通过肿瘤免疫数据库（TIMER）分析肺腺癌患者中CD39基因表达情况与肿瘤微环境免疫细胞浸润的关系;同时分析CD39和其他免疫检查点基因PD-1、PD-L1、CTLA-4、IDO1的相关性,采用药物敏感性基因组学数据库（GDSC）和肿瘤免疫功能障碍和排斥（TIDE）数据库,预测CD39基因表达与化疗药物敏感性以及免疫治疗的响应。结果 CD39在肺腺癌组织中的表达低于在正常组织中的表达,CD39富集了免疫相关通路如炎症反应、干扰素α反应、干扰素γ反应。TIMER数据库均显示在肺腺癌组织中,CD39的表达与B细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞以及树突状细胞呈正相关性。同时CD39与其他的免疫检查点PD-1、PD-L1、CTLA-4、IDO1均呈一定的正相关性,化疗敏感性显示在肺腺癌组织中,对于博来霉素、顺铂、多西他赛、长春花碱等化疗药物,高表达CD39组对其敏感。但对于免疫治疗,其响应率却低于CD39低表达组。结论 CD39在肺腺癌组织中低表达,能激活免疫相关通路,对免疫治疗响应率高,可作为肺腺癌新型分子标志物。     

以细胞因子为研究指标的光致敏体外评价方法的建立

目的 研究和建立以细胞因子水平变化作为评价指标的光致敏体外评价方法.方法 THP-1细胞分别与光致敏剂6-甲基香豆素(6-MC)和对氨基苯甲酸(PABA)、光致敏剂兼光刺激剂硫氯酚(bithionol)、光致敏兼皮肤致敏剂对苯二胺(PPD)和二苯甲酮(BP)、单纯皮肤致敏剂盐酸双氯苯双胍己烷(CHD)和二硝基氯苯(DN...     

建立以HIF-1α为靶标的高通量筛选防治动脉粥样硬化先导化合物的细胞模型

目的 建立一个高通量筛选防治动脉粥样硬化先导化合物的体外细胞模型。方法 克隆HIF-1α低氧反应元件（hypoxia response element,HRE）至荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Enhancer,构建荧光素酶表达载体pGL3-HIF-1α-HRE,转染人单核细胞THP-1并筛选稳定表达细胞株THP-1-HIF-1α-HRE。结果 Real Time-PCR检测表明低氧培养可以有效上调THP-1-HIF-1α-HRE细胞HIF-1α蛋白表达和荧光素酶活性,而洛伐他汀和姜黄素预处理可以有效抑制低氧引起的THP-1-HIF-1α-HRE细胞内HIF-1α蛋白表达及荧光素酶活性。结论 成功建立了筛选抗动脉粥样硬化的先导化合物体外高通量细胞模型THP1-HIF-1α-HRE。     

缺失错配修复基因MLH1的结直肠癌HCT唱116细胞对氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的 研究缺失错配修复基因MLH1（MutL homolog 1）的结直肠癌细胞HCT-116对氟尿嘧啶（5-Fu）耐药机制。方法 通过构建MLH1缺失的结直肠癌细胞HCT-116稳定表达MLH1细胞株,CCK-8试剂检测细胞恢复MLH1表达后对化疗药物5-Fu耐药性的影响,并通过流式细胞仪检测细胞表面干细胞标志CD133和分化标志CK20以及CK8的表达变化。结果 HCT-116稳定表达MLH1分子后,其对5-Fu作用的化疗耐受性降低,5-Fu处理后细胞的活率显著降低（P<0.01）;流式细胞仪检测结果显示CD133表达显著降低,并伴随细胞分化标志CK8和CK20表达上调。结论 结直肠癌细胞缺失错配修复基因MLH1引起5-Fu耐药性可能与其促进肿瘤干细胞样特性密切相关。     

替雷利珠单抗联合XELOX方案治疗晚期胃癌的临床研究

目的 探讨替雷利珠单抗注射液联合XELOX方案治疗晚期胃癌的临床疗效。方法 选取2021年1月—2023年1月泾县医院收治的60例晚期胃癌患者,采用随机数字表法将纳入患者分为对照组和治疗组,每组30例。对照组采用XELOX方案：第1天静脉滴注注射用奥沙利铂130 mg/m²,同时口服卡培他滨片1 000 mg/m²,2次/d,连续治疗14 d,并以3周为1个疗程。治疗组在对照组基础上静脉滴注替雷利珠单抗注射液200 mg/次,3周用药1次,3周为1个疗程。两组患者均连续治疗3个疗程。比较两组近期临床疗效、免疫功能指标和血清肿瘤标志物。结果 治疗组的总有效率高于对照组的总有效率（P＜0.05）。治疗后,对照组CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞和CD4⁺T/CD8⁺T比值均显著降低,治疗组CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞和CD4⁺T/CD8⁺T比值均显著升高（P＜0.05）;治疗组患者CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞和CD4⁺T/CD8⁺T比值均明显高于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组血清糖类抗原199（CA199）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、血管内皮生长因子（VEGF）水平均显著降低（P＜0.05）,且治疗组血清CA199、MMP-2、VEGF水平均低于对照组（P＜0.05）。结论 替雷利珠单抗联合XELOX方案可提高晚期胃癌患者的近期疗效,促进免疫功能恢复,加强抗肿瘤效果。     

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

安替可胶囊联合TP方案治疗晚期食管鳞癌的临床研究

目的 探讨安替可胶囊联合TP方案（紫杉醇＋顺铂）治疗晚期食管鳞癌的临床疗效。方法 选取2019年1月—2022年1月河南省人民医院收治的100例术后复发转移、晚期转移无法手术治疗的晚期食管鳞癌患者,将所有患者随机分为对照组（50例）和治疗组（50例）。对照组第1天静脉滴注紫杉醇注射液135 mg/m²,第1～3天静脉滴注顺铂注射液75 mg/m²。治疗组于对照组基础上口服安替可胶囊,2粒/次,3次/d。3周为1个治疗周期,两组患者持续治疗3个周期。观察两组的临床疗效,比较两组肿瘤标志物[鳞状细胞癌抗原（SCC-Ag）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）]、细胞免疫功能淋巴细胞（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺）、生存质量（QLQ-C30评分、KPS评分）以及不良反应、随访1年的生存情况。结果 治疗后,治疗组客观缓解率（42.00%）、疾病控制率（74.00%）明显高于对照组（22.00%、52.00%）,组间比较差异有显著性（P＜0.05）。治疗后,两组QLQ-C30评分、KPS评分均显著升高（P＜0.05）,治疗组QLQ-C30评分、KPS评分显著高于对照组（P＜0.05）。治疗后,对照组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺显著降低,CD8⁺显著升高（P＜0.05）;治疗组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺明显高于对照组,CD8⁺低于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组血清SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA、CA125水平均显著降低（P＜0.05）,治疗组血清SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA、CA125水平显著低于对照组（P＜0.05）。治疗组不良反应发生率为28.00%,明显低于对照组不良反应发生率48.00%,组间比较差异有显著性（P＜0.05）。随访1年后,治疗组中位生存期、肿瘤无进展时间均明显长于对照组（P＜0.05）。结论 安替可胶囊联合TP方案治疗晚期食管鳞癌能增强治疗效果,提高生活质量,减轻免疫功能抑制,降低肿瘤标志物水平,有助于延长患者生存期。     

抗CD5单链抗体的基因构建、蛋白纯化及活性鉴定

目的构建高表达的抗CD5单链抗体(scFv anti-CD5)工程菌,为开展以抗CD5单链抗体为构件的肿瘤免疫治疗研究奠定基础。方法从Genbank中获得抗CD5单克隆抗体H65的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的基因序列,用连接肽的编码序列连接,用重叠PCR技术获得目的基因,酶切后插入pET22b(+)构成重组质粒。测序正确的重组质粒转入E.coliBL21(DE3)诱导表达,产物经Ni-NTA柱纯化后复性,流式细胞术和Western blot-ting检测活性。结果获得序列正确的重组质粒,工程菌表达量高,产物复性后具有识别CD5抗原的活性。结论成功构建了高表达scFv anti-CD5的工程菌,为scFv anti-CD5的应用奠定了基础。     

采用斑马鱼模型评价对乙酰氨基酚的肝脏毒性

目的研究对乙酰氨基酚（APAP）对斑马鱼幼鱼的肝脏毒性,并验证斑马鱼模型用于药物肝毒性快速评价的实用性。方法以发育72 hpf的肝脏荧光转基因斑马鱼幼鱼（L-FABP：EGFP）为实验对象,不同浓度的APAP分别处理斑马鱼幼鱼,于处理后24、48、72 h,体视显微镜下观察幼鱼的死亡率、肝脏形态学变化和卵黄囊吸收情况,荧光显微镜下观察APAP对幼鱼肝脏荧光的影响。结果 APAP对斑马鱼幼鱼存活率的影响呈剂量和时间相关性。APAP处理后的幼鱼肝脏形态出现异常、肝脏颜色变暗,卵黄囊肿。与空白对照组相比,APAP处理后的幼鱼肝组织L-FABP荧光表达明显下降,肝脏明显萎缩退化。结论 APAP对斑马鱼幼鱼具有肝脏毒性。肝脏荧光转基因斑马鱼模型快速评价药物的肝脏毒性具有较好的应用前景。     

Use of an anti-CD200 antibody for prolonging the survival of allografts: a patent evaluation of WO2012106634A1

Background: Allograft rejection continues to be the biggest hurdle in successful organ transplantation. This application (WO2012106634A1) claims the use of blocking CD200 antibody to achieve long-term survival of allografts. CD200 is the ligand for the inhibitory CD200 receptor (CD200R).

Methods: In mouse allograft transplantation models, a blocking CD200 antibody was used to improve renal and cardiac graft survival. Similarly, in humans a blocking CD200 antibody would be administered to the organ recipient in combination with currently used immunosuppressive drugs or even as a monotherapy.

Results: In the presented animal experiments, anti-CD200 antibody application to the allograft recipient decreases SHIP expression in splenocytes. This is accompanied by a significant increase in renal or cardiac graft survival. Furthermore, anti-CD200 antibody has an immunosuppressive effect manifested by an increased production of T regulatory and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) and a decrease in B cells and activated T cells.

Conclusion: In vivo administration of anti-CD200 antibody has a remarkable positive effect on allograft survival. However, since this finding contradicts all previous effects of in vivo CD200 manipulation described in transplantation settings, future development of this invention is highly uncertain.     

Precision improvement for omeprazole determination through stability evaluation

A new spectrofluorimetric method for the determination of omeprazole (OMP) based on its degradation reaction catalyzed by ultraviolet (UV) light is proposed. OMP in aqueous solution is very unstable, which renders a serious difficulty for controlling its quality. It does not show native fluorescence, but when exposed to UV radiation, it generates a highly fluorescent degradation product with adequate stability for indirect OMP quantification. Under the studied optimal experimental conditions (pH, temperature, exposure time to UV radiation), a specific rate constant of 2.851 min^?1‐described by zero‐order kinetic—was obtained for the degradation reaction. Using λ_exc 293 nm and λ_em 317 nm, a linear relationship was obtained (r² 0.9998) in the concentration range of 0.1 to 1.3 µg mL^?1, with a detection limit of 1.07 10^?3 µg mL^?1 (S/N = 3). The methodology developed was successfully applied to OMP quality control in pure drugs and tablet dosage forms without previous treatment, with good tolerance to common excipient, and a high level of concordance between the nominal and experimental values. This work constitutes an important contribution to knowledge of the degradation mechanism of OMP. It has been shown to be appropriate for OMP quality control, to have an adequate sampling rate, low cost instrument, and to be a less polluting procedure. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

高强度聚焦超声消融治疗子宫肌瘤的影像学评估进展

评估高强度聚焦超声(HIFU)消融治疗子宫肌瘤疗效的影像方法括超声、CT和MRI,本文对各种影像学评估方法进行综述,特别是超声、MRI对高强度聚焦超声消融治疗子宫肌瘤的影像评估进展.     

恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的研究恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及与放、化疗疗效之间的关系。方法通过纤维鼻咽镜取30例鼻咽癌组织和10例声带息肉,通过Trizol法提取总RNA后,进行逆转录,SYBR方法进行实时荧光定量PCR反应检测各组织中CD44的表达,对20例初治鼻咽癌病人予诱导化疗加同步放、化疗治疗。结果鼻咽癌组织和声带息肉组织中均表达CD44;鼻咽癌组织CD44表达均高于声带息肉组织;CD44在鼻咽癌组织和声带息肉组织中表达具有明显差异(P<0.05)。鼻咽癌组织CD44表达与N分期的关系有明显差异(P<0.05);CD44表达和T分期、病理类型、性别、年龄、及近期疗效间的关系均无明显差异(P>0.05)。结论鼻咽癌肿瘤组织中有CD44表达,且高于声带息肉组织;CD44的表达与N分期相关;还需扩大病例数,进一步研究加以证明。     

超声造影评估肾占位病变的临床应用

目的探讨术前超声造影能否预测肾脏占位病变的组织类型。方法 27例肾脏占位病变患者术前行灰阶超声、彩色多普勒、八氟丙烷超声造影,超声造影结果与外科病理结果相比较。结果 18例患者为透明细胞癌,3例为1型乳头状瘤,1例为嫌色细胞癌,1例为未分类病变,3例为嗜酸细胞瘤,1例为良性血管肌脂肪瘤。不均匀回声和延迟洗出相联合、造影增强度、病变峰值强度联合延迟洗出诊断肾占位病变病理类型有高的的阳性预测值、敏感度和特异度。结论不均匀回声、延迟洗出、造影增强度、病变峰值强度有助于鉴别诊断肾透明细胞癌和非透明细胞癌。     

荧光光度法测定硫酸庆大霉素滴眼液在兔眼结膜囊冲洗液中的浓度

目的：比较含有玻璃酸钠的硫酸庆大霉素滴眼液（样品）和硫酸庆大霉素滴眼液（对照）在兔眼结膜囊冲洗液中的浓度，方法：用荧光光度法分别于5，15，30和60min时测定结膜囊冲洗液中样品和对照的浓度。结果：在60min内样品的浓度明显高于对照组（P＜0．01），结论：样品在结膜囊中能保持较高浓度和维持较长时间。     

CD4＋T淋巴细胞分选方法的效果评价

目的 建立一种准确且对细胞活性影响小的分离人外周血CD4＋T细胞的分选方法.方法 对人外周血依次采用密度梯度离心（density gradient centrifugation,DGC）和免疫磁珠分选（magnetic-activated cell sorting,MACS）进行CD4＋T细胞分选.分选后的细胞用流式细胞仪（flow cytometry,FCM）、倒置显微镜及细胞周期分析进行分选纯度和生长状态检测.结果 Percoll密度梯度离心法收集的单个核细胞中CD4＋T细胞纯度为（38.8±2.7）％,免疫磁珠分选后CD4＋T细胞纯度为（96.2±0.7）％,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）,且分选后细胞形态及功能完好,24 h内活性最高.结论 密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高CD4＋T细胞的分选纯度及保持其活性,可继续用于相关功能研究.     

MRI在高强度聚焦超声治疗子宫腺肌症近期疗效评估中的价值

目的 探讨MRI在高强度聚焦超声治疗子宫腺肌症近期疗效评估中的价值.方法 对本院35例经临床诊断明确的子宫腺肌症患者行高强度聚焦超声治疗,患者于术前、术后1天、术后3个月、术后6个月行常规MRI扫描、动态增强扫描,观察治疗前后信号变化、无灌注区体积,计算消融率,观察病灶缩小率及临床症状改善情况,对其疗效进行评估.结果 35例患者术后1天平均消融率为(70.2±20.5)％.20例(57.1％)患者治疗后月经延长及疼痛症状明显好转或消失,腺肌症病灶体积缩小＞50.0％;10例(28.6％)患者治疗后相关临床症状有所好转,病灶体积缩小＜50.0％;5例(14.3％)患者相关临床症状无好转.结论 高强度聚焦超声治疗子宫腺肌症具有较高的安全性和有效性,MRI是高强度聚焦超声治疗子宫腺肌症近期疗效评估的有效手段.