枸杞子中免疫活性成分的分离、纯化及物理化学性质的研究

从宁夏枸杞子提取得到的糖缀合物LBP经DEAE-celulose柱色谱得到5个组分,其中Lbp3,Lbp4和Lbp5分别经CM-SephadexC-50,SephadexG-100,SephadexG-50柱色谱得到均一组分LbGp3,LbGp4和LbGp5。N含量:LbGp30.83%,LbGp41.72%,LbGp59.58%。总糖含量:LbGp393.6%,LbGp485.6%,LbGp58.6%。分子量:LbGp39.25×10⁴,LbGp4 21.48×10⁴,LbGp52.37×10⁴。糖组成为:LbGp3:Ara∶Glc=1∶1,LbGp4:Ara∶Gal∶Rha∶Glc=1.5∶2.5∶0.43∶0.23,LbGp5:Rha∶Ara∶Xyl∶Gal∶Man∶Glc=0.33∶0.52∶0.42∶0.94∶0.85∶1。初步分析表明LbGp4是O-连接的糖蛋白。     

枸杞糖缀合物及糖链的化学结构与免疫活性

为研究枸杞多糖的化学结构 ,免疫活性并探讨其构效关系 ,应用色谱法 ,凝胶过滤法和十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术从枸杞粗多糖 (LBP)中分离纯化了 5个组分 (LBP1 LBP5) ,并进一步从LBP1,LBP3,LBP4中纯化得到组分均一的糖缀合物LbGp1,LbGp3和LbGp4及其糖链LbGp1 OL ,LbGp3 OL和LbGp4 OL ,用甲基化 ,部分酸水解和核磁共振 (NMR)技术基本阐明了其化学性质 ,糖组成 ,氨基酸组成及主要结构特征 ,并用小鼠脾细胞增殖反应研究免疫活性表明 ,6个样品均具有直接增强小鼠脾细胞增殖反应的作用 .结果提示 ,枸杞子中具有免疫活性的有效成分是一类结构复杂的糖缀合物 ,其糖链部分可能是其发挥免疫活性的主要活性结构 .     

枸杞子糖缀合物及其糖链对LDL氧化修饰的抑制作用

目的　研究枸杞子糖缀合物及其糖链对LDL氧化修饰的抑制作用。方法　在Cu²⁺诱导的LDL氧化模型中测定了脂质过氧化产物硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）的含量及LDL在琼脂糖凝胶电泳上的迁移率以反映从枸杞子中分离、纯化得到的糖缀合物及糖链对LDL氧化修饰的抑制作用。结果　枸杞子糖缀合物及糖链抗LDL氧化的能力是不同的,其中LbGp5可明显的抑制LDL的氧化。结论　枸杞子糖缀合物具有抗LDL氧化作用,而糖链不具有抗LDL氧化的作用。     

枸杞糖缀合物和糖链对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的确定巨噬细胞是枸杞糖缀合物和糖链免疫作用的靶细胞之一。方法应用中性红吞噬实验和鸡红细胞吞噬实验测定了枸杞糖缀合物LbGp4和糖链LbGp4-OL对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用硝酸根还原法、酶联免疫吸附实验(ELISA)和生物活性测定法测定了巨噬细胞产生一氧化氮(NO)、IL-1β和TNF-α含量和生物活性的变化。结果LbGp4和LbGp4-OL在(10~100)mg.L-1剂量范围内均可剂量依赖性地促进静息巨噬细胞吞噬中性红的能力,增加活化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;增加巨噬细胞培养上清NO、IL-1β和TNF-α的浓度,并增强对L929细胞的杀伤活性,促进胸腺细胞的增殖反应。结论LbGp4和LbGp4-OL对静息和活化的腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有明显的促进作用,对巨噬细胞产生NO、分泌IL-1β和TNF-α的含量和生物活性亦具有明显的促进作用,表明巨噬细胞是LbGp4和LbGp4-OL免疫作用的靶细胞之一。     

钝顶螺旋藻糖缀合物SPPA-1的理化性质及活性的研究

目的　研究螺旋藻多糖中的均一组分SPPA-1的分离方法、糖组成、分子量及生物活性。方法　采用丙酮分部沉淀,三氯乙酸去蛋白,再经SephadexG-75和CM-SephadexC-50柱色谱得到SPPA-1,用气相色谱法测定单糖组成,GPC法测定分子量,IR和NMR法确定糖苷键类型。结果　经高压液相色谱和毛细管电泳鉴定为均一性组分。其总糖含量为91.70%,N含量为0.96%,分子量为69.00×10⁴Da。糖组成分析表明其由单一的葡萄糖组成,红外光谱、核磁共振¹HNMR谱分析表明,其单糖类型为α-吡喃型。ESR研究表明SPPA-1具有清除O^-₂自由基活性。结论　SPPA-1为一具抗氧化活性的葡聚糖。     

灯盏乙素苷元4'-L-氨基酸衍生物的设计、合成与抗氧化活性

为了设计合成具有较强神经细胞氧化损伤保护作用及较好理化性质的灯盏乙素苷元4'-L-氨基酸衍生物,以灯盏乙素苷元为先导化合物,根据主动转运原理在改善口服药物生物利用度应用上取得的成功经验,采用拼合设计原理在先导化合物的4'-羟基上引入L-氨基酸酯、醚结构,设计、合成灯盏乙素苷元4'-L-氨基酸衍生物。采用H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型对设计化合物进行了体外抗氧化活性评价,同时进行了目标化合物理化性质研究。结果发现设计的化合物均具有抗氧化活性,5个化合物抗氧化活性优于VE,灯盏乙素苷元L-氨基酸醚类化合物在缓冲液中稳定性(t1/2 9～92 h)优于酯类衍生物(t1/2 0.5 h),灯盏乙素苷元L-氨基酸酯类衍生物18、19与醚类衍生物22、24～27的水溶解度分别为1 796～4 100μg·mL-1和27.7～81.1μg·mL-1,两者水溶性分别达到灯盏乙素的120～280倍和2～6倍。以上研究提示L-氨基酸前药设计策略可适用于灯盏乙素苷元的结构修饰,以获得具有较好抗氧化活性及理化性质的灯盏乙素苷元前药。     

骆驼刺茎枝粗多糖的理化性质及抗氧化活性研究

摘 要 目的：提取分离骆驼刺茎枝粗多糖,测定其理化性质及抗氧化活性。方法: 采用水提醇沉法提取骆驼刺茎枝粗多糖,硫酸苯酚法测定总糖含量,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,咔唑硫酸法测定糖醛酸含量,GC法测定单糖组成及相对摩尔比;通过测定骆驼刺茎枝多糖的还原力,及其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和羟自由基的清除力,评价骆驼刺茎枝多糖的体外抗氧化活性。结果:水提醇沉制备的骆驼刺茎枝粗多糖总糖含量为73.2%,其中糖醛酸占粗多糖总糖含量的27.2%;蛋白质含量为17.6%;骆驼刺茎枝多糖由Rha、Ara、Xyl、Man、Glc、Gal、GlcA和GalA 8种单糖组成,相对摩尔比为1.05∶1.00∶1.25∶0.52∶3.05∶1.31∶0.47∶4.78;骆驼刺茎枝多糖的还原力、对DPPH与羟基自由基的清除率随多糖浓度的增大而增强。结论:初步提取分离了骆驼刺茎枝粗多糖,研究了其理化性质和体外抗氧化活性,为骆驼刺的开发利用提供研究基础。     

一种新型乌贼墨糖胺聚糖的分离纯化、理化性质及其抗氧化活性研究

目的 从金乌贼墨(Sepia esculenta ink)中提取其活性成分乌贼墨多糖。并首次对其理化性质及体外抗氧化活性进行研究。方法 依次用两步酶解法提取乌贼墨粗多糖,用Q Sepharose 4 Fast Flow 阴离子交换层析柱对其进行分离纯化,获得主要组分。通过高效液相(HPLC)、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、离子色谱法对乌贼墨多糖进行理化性质研究以及初步的结构判定,采用ABTS法对乌贼墨进行总的体外抗氧化活性研究。结果 两步酶解后乌贼墨粗多糖的得率为3%,分离纯化后得到0.05、0.25、0.5 mol/L NaCl三个洗脱组分,分别命名为SE-1、SE-2、SE-3,其中以SE-2为最主要组分,故主要对SE-2进行分析。经过离子交换柱层析,SE-2得率为50%。SE-2主要含有半乳糖胺(GalN)、岩藻糖(Fuc)、葡萄糖胺(GlcN)、乙酰氨基半乳糖(GalNAc)、葡萄糖醛酸(GlcUA)以及甘露糖(Man)等单糖,紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰;该多糖为均一性多糖,分子量8.5 kD;SE-2的总糖含量、蛋白质含量、硫酸根含量、氨基己糖含量分别为54.2%、3.92%、7.74%、20.5%;IR光谱进一步证明该糖为SE-2糖胺聚糖,构象为D-吡啶环结构,并有硫酸根的存在;SE-2对ABTS自由基的清除能力较强,其半数清除质量浓度为0.21mg/mL。结论 金乌贼墨多糖SE-2是一种硫酸酯化的新型糖胺聚糖,具有较强的体外抗氧化性活性。     

枸杞子活性多糖的研究

目的　对4个均一枸杞多糖：LBP1a-1,LBP1a-2,LBP3a-1和LBP3a-2进行结构研究和药理评价。方法采用凝胶柱色谱、酸水解、过碘酸氧化和波谱学等方法测定多糖样品的分子量、单糖组成及连接方式,并以小鼠脾淋巴细胞增殖反应为免疫活性指标对多糖样品进行活性评价。结果　4个多糖样品的分子量分别为11.5×10⁴,9.4×10⁴,10.3×10⁴,8.2×10⁴,LBP1a-1,LBP1a-2为1,6连接的葡聚糖;LBP3a-1,LBP3a-2具有1,4连接的多聚半乳糖醛酸主链,及微量的半乳糖和阿拉伯糖分支。4个多糖均具有免疫促进作用。结论　4种多糖首次从枸杞子中分离得到,具有1,4连接多聚半乳糖醛酸主链结构的多糖活性较强。     

盾果藻Carpopeltis affinis多糖的提取分离、理化性质及抗病毒活性研究

目的 采用不同方法提取盾果藻(Carpopeltis affinis)中多糖,对其理化性质和结构进行分析,并初步评价其抗病毒活性。方法 依次通过冷水、热水(80 ℃)和2% NaOH溶液提取盾果藻多糖,通过硫酸苯酚、离子色谱法、PMP柱前衍生高效液相色谱法等对其总糖、硫酸根含量、单糖组成等进行分析,利用核磁共振波谱技术初步探究其结构。通过CPE和假病毒抑制实验初步探究其抗病毒活性。结果 3种多糖CCAP(冷水提取)、HCAP(热水提取)、ACAP(2% NaOH提取)均主要含硫酸半乳糖,热水浸提的HCAP得率及纯度较高,且主要为τ-卡拉胶。抗病毒活性研究表明HCAP对流感病毒、疱疹病毒和新冠假病毒具有显著的抑制作用,其中对H1N1株Influenza(A/Virginia/ATCC1/2009)的抑制作用最为显著(IC₅₀=0.03 μg.mL^_-1,SI>66666.6)。结论 热水提取获得的盾果藻多糖为τ-卡拉胶,其对多种病毒均具有显著的抑制作用,本研究结果丰富了海洋糖库,为海洋抗病毒药物的开发提供了理论基础。     

Structure elucidation of glycan of glycoconjugate LbGp3 isolated from the fruit of Lycium barbarum L

The structure of the repeat unit of the glycan of glycoconjugate LbGp3 with pronounced immuno-activity, isolated from the fruit of Lycium barbarum L. was elucidated based on methylation analysis, partial acid hydrolysis and ¹H, ¹³C NMR spectroscopy of the original glycan and products of its partial hydrolysis.     

Pyrrolization and antioxidant function of proteins following oxidative stress

The consequences of oxidative stress on microsomal proteins were analyzed by studying their pyrrolization and the antioxidative activity of the modified proteins produced. The microsomal system consisted of freshly prepared trout muscle microsomes, which were oxidized in the presence of 5 microM Cu(2+), 1 mM Fe(3+)/5 mM ascorbate, or 1 mM Cu(2+)/10 mM H(2)O(2). Pyrroles on proteins were detected by forming Ehrlich adducts with p-(dimethylamino)benzaldehyde and by determination of epsilon-N-pyrrolylnorleucine (Pnl) by capillary electrophoresis. Their antioxidative activity was studied by testing two model pyrrolized proteins (dimeric and monomeric modified bovine serum albumin: DBSA and MBSA, respectively), which were produced in the reaction of BSA and 4,5(E)-epoxy-2(E)-heptenal. These proteins were assayed at a concentration of 10-40 microg/mL, which was selected because at this concentration both DBSA and MBSA had a concentration of Pnl similar to the Pnl concentration produced in oxidized microsomes. Both DBSA and MBSA significantly (p < 0.05) protected against lipid peroxidation, assessed by the formation of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), and protein damage, evaluated by amino acid analysis, for the three systems assayed, and this protection was always higher than that exhibited by BSA, which was used as control. The order of effectiveness was DBSA > MBSA > BSA and was parallel to the Pnl content in the assayed proteins. These results suggest that antioxidative activity of BSA may also be related to its ability to react with lipid oxidation products and to produce modified BSA with antioxidative activity. This mechanism may also be contributing to the antioxidative activity exhibited by many proteins.     

钝顶螺旋藻糖缀合物SPPA-1的糖链化学结构研究

目的研究从钝顶螺旋藻中分离纯化得到的糖缀合物SPPA-1的糖链结构。方法应用了气相色谱、甲基化分析和1H,¹³CNMR及2DNMR技术研究糖链结构。结果SPPA-1的糖链是由单一葡萄糖组成,其重复单元是由1→4连接的葡萄糖糖残基组成的主链且具有分支。结论SPPA-1的糖链部分为一新的葡聚糖。     

2-取代苯基-5-(3′-吲哚基)-唑衍生物的合成及其抗氧化活性

目的合成5-(3′-吲哚基)-唑衍生物并研究其抗氧化活性。方法以色氨酸为原料,与取代的苯甲酸在DCC催化下脱水缩合得到酰胺,再通过DDQ苄位氧化和分子内环合生成5-(3′-吲哚基)-唑。用DPPH体外抗氧化模型测定化合物的抗氧化活性。结果合成了11个2-取代苯基-5-(3′-吲哚基)-唑衍生物,其中化合物21和22的活性比维生素E强约3～4倍;化合物29的活性与维生素E相近。结论合成的目标化合物中有3个化合物有较好的抗氧化活性,有可能开发成为良好的抗氧化剂。     

Radical-scavenging and iron-chelating properties of carvedilol, an antihypertensive drug with antioxidative activity

Carvedilol, an antihypertensive agent, has been in clinical use for several years. In addition to its function as a beta-blocker, carvedilol has been shown to act as an antioxidant. However, there is some controversy as to how carvedilol achieves its antioxidative ability: by radical scavenging or ion chelation? We therefore used a method of radical generation independent of metal ions to investigate the antioxidative properties of carvedilol. We showed that carvedilol decreased low-density lipoprotein (LDL) oxidation induced by a peroxyl radical-generating system [2,2'-azobis(2-amidinopropane)hydrochloride]. Formation of thiobarbituric acid-reactive substances, lipid hydroperoxides, and newly generated epitopes on oxidised LDL was used to monitor LDL oxidation. We further showed that carvedilol was consumed during reaction with peroxyl radicals. However, carvedilol showed no reaction with nitrogen-centered radicals (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl and 2,2'-azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulphonate]), which are often used in assays for determining antioxidative properties. On the other hand, we found that carvedilol acted as a chelator of ferric ions. Using mass spectrometry and NMR spectroscopy, we observed complex formation with free and acetylacetonate-complexed ferric ions. The binding constant with Fe(3+) was in the range of 10(5) L/mol. From our data, we concluded that carvedilol acts as both a metal chelator and a radical scavenger in vitro. However, it is selective in reacting with different radicals and is not an electron-donating radical scavenger as is alpha-tocopherol. Therefore, taking into account the low physiological concentration, the antioxidative properties reported earlier may not solely be explained by its radical-scavenging activity.     

三种藻类硫酸多糖的提取及其清除自由基活性研究

目的通过对紫莱、海带、羊栖莱3种藻类硫酸多糖进行提取和体外活性检测,以期筛选出具有一定开发潜力的抗氧化剂。方法以稳定自由基(DPPH)等抗氧化检测方法对提取物进行抗氧化活性的测定。结果3种硫酸多糖均有不同程度的抗氧化活性。但它们之间的抗氧化活性大小差异较大,并且用不同溶剂提取的硫酸多糖抗氧化活性也有差异。结论水提的羊栖菜硫酸多糖(SPS)具有较强抗氧化活性。