3-O-C12-HSL通过抑制lncRNA CD48-AS和CD48的表达而阻碍Mo-DCs成熟

目的 筛选并阐明长链非编码RNA（lncRNA）CD48-AS与其反义互补分子CD48 mRNA在N-3-氧代十二 烷酰-L-同型丝氨酸内酯（3-O-C12-HSL）阻碍人单核细胞诱导的树突状细胞（Mo-DCs）成熟过程中发挥作用的机制。 方法 从健康人外周血中分离Mo-DCs,将未成熟的Mo-DCs细胞分为阴性对照组（0.1% DMSO）、脂多糖（LPS）阳性 对照组（100 μg/L的LPS）和实验组（100 μg/L LPS+40 μmol/L 3-O-C12-HSL）进行lncRNA芯片检测。筛选lncRNA表 达谱中差异表达 5 倍以上的自然反义 lncRNA 进行聚类分析,从中筛选差异具有统计学意义的自然反义 lncRNA CD48-AS。未成熟的 Mo-DCs 分为阴性对照组、LPS 阳性对照组以及 LPS+C5、C10、C25 实验组（分别加入 5、10、 25 μmol/L的3-O-C12-HSL）。利用荧光定量PCR检测lncRNA CD48-AS和反义分子CD48 mRNA在实验体系中的表 达水平;通过生物信息学分析lncRNA CD48-AS与CD48反义互补区及其蛋白编码功能;通过核糖核酸酶保护实验 （RPA）验证lncRNA CD48-AS是否与CD48形成二聚体,从而通过影响靶CD48的表达来发挥调控作用。最后检测 lncRNA CD48-AS在细胞内的定位。结果 3-O-C12-HSL处理Mo-DCs后lncRNA表达谱出现了特异性改变。3-OC 12-HSL可下调由LPS诱导的Mo-DCs中lncRNA CD48-AS及其反义靶分子CD48的表达。生物信息学分析lncRNA CD48-AS 不具备蛋白编码功能,为非编码 RNA;lncRNA CD48-AS 与 CD48 形成 RNA 二聚体从而减少 RNA 酶对 CD48 mRNA的降解,使得CD48 mRNA表达增加;lncRNA CD48-AS在Mo-DCs中主要定位在细胞核中,细胞质中表 达量较少。结论 3-O-C12-HSL可通过下调lncRNA CD48-AS,进而影响CD48的表达来阻碍Mo-DCs的成熟。     

lncRNA SOX21-AS1的表达对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA SRY-box转录因子21反义RNA 1（lncRNA SOX21-AS1）对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及其作用机制。方法 选取卵巢癌组织和其邻近的癌旁组织各75例,另选取卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、OVCR3和人卵巢正常上皮细胞HOSE作为实验对象,实时荧光定量PCR法检测lncRNA SOX21-AS1在组织和细胞中的表达。根据是否干扰lncRNA SOX21-AS1表达将细胞分为si-NC组和si-SOX21-AS1组。MTS实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞转移能力,TOP/FOP荧光素酶实验和Western blot实验检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性和相关蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌组织中的表达上调（P<0.05）。与卵巢正常上皮细胞HOSE相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌细胞中的表达上调,SKOV3中最高（P<0.05）。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移的患者相比,FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移患者lncRNA SOX21-AS1相对表达水平升高（P<0.05）。干扰lncRNA SOX21-AS1表达可抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力、抑制Wnt/β-catenin信号通路活性并降低Wnt/β-catenin信号通路各蛋白的表达水平（P<0.05）。结论 lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌组织和细胞中高表达,干扰lncRNA SOX21-AS1的表达可抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力。     

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

摘要：目的:探讨微小RNA（miRNA）-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2（IGF2）,影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和活化转录因子6（ATF6）蛋白表达,比色法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。     

lncRNA FOXD2-AS1靶向miR-3194-3p对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡影响的体外研究

摘要：目的:探讨lncRNA FOXD2-AS1对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响及分子机制。方法:实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测口腔鳞癌细胞系中lncRNA FOXD2-AS1和miR-3194-3p的表达水平;将FOXD2-AS1干扰表达载体、miR-3194-3p模拟物、miR-3194-3p抑制剂+FOXD2-AS1干扰表达载体转染至CAL27细胞中,Western blot法检测蛋白表达; MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FOXD2-AS1和miR-3194-3p的靶向关系。结果:口腔鳞癌细胞系中lncRNA FOXD2-AS1表达水平升高,miR-3194-3p表达水平降低（P<0.01）。lncRNA FOXD2-AS1低表达或miR-3194-3p高表达,口腔鳞癌CAL27细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平和细胞存活率降低,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）表达水平和细胞凋亡率升高（P<0.01）;且lncRNA FOXD2-AS1低表达降低了β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达。lncRNA FOXD2-AS1靶向调控miR-3194-3p,低表达miR-3194-3p逆转了FOXD2-AS1低表达对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结论:下调lncRNA FOXD2-AS1表达可能通过上调miR-3194-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

碱性成纤维生长因子联合丹酚酸B诱导间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的探讨碱性成纤维生长因子(FGF-2)、丹酚酸B(SalB)以及二者联合诱导(FGF-2+SalB)对骨髓间充质干细胞(MSC)定向分化为心肌样细胞的影响。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSC,对第2代MSC定向诱导,依次为FGF-2组、SalB组、FGF-2+SalB组以及空白对照组,相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学技术检测诱导4周BMSC结蛋白,α-横纹肌肌动蛋白、心肌肌钙蛋白T(cTnT)及心肌连接蛋白43(Cx43)的表达;透射电镜对分化细胞进行鉴定;以半定量RT-PCR法在诱导后7,14和28 d检测细胞心肌早期转录因子GATA-4,Nkx2.5的表达。结果诱导各组的BMSC均可见结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、cTnT及Cx43的阳性细胞,其中联合诱导组的阳性率均最高。诱导各组与对照组上述四标记物的阳性率均具有显著性差异(P<0.05)。透射电镜观察:分化细胞的胞质内可见平行排列的肌丝,多靠近细胞膜,并富含内质网、线粒体、糖原和核糖体。RT-PCR结果显示,诱导组细胞GATA-4和Nkx2.5于诱导后7 d弱表达,14 d表达增强,28 d表达减弱。结论 FGF-2,SalB以及二者联合,均可将MSC诱导为心肌分化表型,其中FGF-2+SalB组各蛋白阳性表达率最高,其心肌样细胞的转化率亦高于其他组。     

长链非编码RNA赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA(LOXL1-AS1)在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响和可能的作用机制。方法 选取2016年1月至2018年12月在河南省人民医院行结直肠癌根治术的56例病人新鲜癌组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织样本及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116和Lovo细胞中lncRNA LOXL1-AS1的表达水平,以配对癌旁组织及人正常结直肠黏膜细胞FHC作正常对照;构建靶向LOXL1-AS1序列的小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)并转染SW480和Lovo细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法检测沉默lncRNA LOXL1-AS1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测沉默LOXL1-AS1表达后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果 LOXL1-AS1在结直肠癌...     

血清长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1水平与钙化性主动脉瓣狭窄病人左心室功能的相关性研究

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)表达水平与钙化性主动脉瓣狭窄（CAS）病人左心室收缩及舒张功能的相关性。方法 于2020年1月至2021年12月,选取中国中医科学院广安门医院就诊的CAS病人129例作为CAS组[左心室射血分数（LVEF）≥50%],同期该院健康志愿者130例作为对照组。收集病人人口学资料、超声及实验室生化指标,检测血清lncRNA AFAP1-AS1表达。受试者操作特征曲线（ROC曲线）分析血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS效能。结果 对照组血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平（1.15±0.18）低于CAS组（1.58±0.30）(P<0.001)。轻度狭窄者血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平（1.37±0.26）低于中、重度狭窄者,而中度狭窄者lncRNA AFAP1-AS1表达水平（1.59±0.30）低于重度狭窄者（1.79±0.34）(P<0.001)。ROC结果显示,血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS、重度狭窄的曲线下面积分别为0....     

长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1靶向调控微RNA-128-3p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的 探究长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌中的表达情况及靶向调控微RNA-128-3p(miR-128-3p)对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)定量分析2017年1月至2018年12月在郑州大学人民医院住院并进行手术治疗的38例结直肠癌病人癌组织及相应癌旁组织、结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p的表达。将SW620细胞设为si-OIP5-AS1组、si-NC组、miR-128-3p mimic组、mimic-NC组、miR-128-3p inhibitor+si-OIP5-AS1组和inhibitor-NC+siOIP5-AS1组,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力,采用蛋白质印迹法检测E2F1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N...     

长链非编码RNA DLG相关蛋白1-AS5在乳腺癌组织中的表达及对癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)DLG相关蛋白（DLGAP）1-AS5对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。方法 采用癌症基因组图谱（TCGA）数据库分析乳腺癌组织及正常组织中DLGAP1-AS5表达水平,观察DLGAP1-AS5表达水平与乳腺癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测4种乳腺癌细胞系：永生化乳腺上皮细胞(MCF-10A)、人乳腺癌细胞（MCF-7、HCC-1937）、人乳腺腺癌细胞(SK-BR-3)、人乳腺管癌细胞（BT-549）中DLGAP1-AS5表达水平。将DLGAP1-AS5过表达质粒或阴性对照质粒转染至MCF-7细胞,计为DLGAP1-AS5组和阴性对照组。采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）和Transwell实验检测MCF-7细胞的增殖和侵袭情况。采用starBase v3.0在线软件和双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS5和miR-362-5p的靶向关系。qRT-PCR检测MCF-7细胞中miR-362-5p表达水平。蛋白质印迹实验检测MCF-7细胞中p38-丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路蛋白表达水平。结果...     

金丝桃苷抑制鼻咽癌细胞生物学行为的分子机制研究

目的 探讨金丝桃苷对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响和机制。方法 采用10、20及40 mg/L金丝桃苷的培养液孵育SUNE1细胞，依次记为低、中、高剂量组；将长链非编码RNA(lncRNA)配对盒基因8反义RNA 1(PAX8-AS1)过表达或敲低质粒、miR-494-3p模拟物及其阴性对照分别转染至40 mg/L金丝桃苷处理的SUNE1细胞，采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验检测SUNE1细胞活力、克隆形成以及迁移和侵袭。蛋白质印记法分析基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表达。双荧光素酶报告实验分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向关系。结果低、中、高剂量金丝桃苷降低SUNE1细胞活力、迁移数和侵袭数，下调MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表达水平，上调lncRNA PAX8-AS1表达水平（P<0.05）。lncRNA PAX8-AS1靶向负调控miR-494-3p表达。过表达lncRN...     

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组（NG组）、高糖组（HG组）、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）...     

黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T(TP73-AS1)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,及其作用机制。方法实验分为对照组(正常DMEM培养基),低、中、高剂量实验组(分别用含0.6,1.2,1.8 mg·mL^-1黄秋葵多糖的DMEM培养基)、si-NC组(转染TP73-AS1阴性对照质粒)、si-TP73-AS1组(转染TP73-AS1抑制表达质粒)、pcDNA3.1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1阳性对照质粒)、pcDNA3.1-TP73-AS1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1过表达质粒)。用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时荧光定量聚合酶链反应检测TP73-AS1的表达水平。结果低、高剂量实验组和对照组、si-NC组、si-TP73-AS1组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-TP73-AS1组的细胞存活率分别为(71.67±3.08)%,(37.36±2.27)%,(100.55±3.68)%,(100.91±6.81)%,(57.12±4.98)%,(49.26±2.81)%和(81.19±7.09)%,细胞凋亡率分别为(14.67±1.40)%,(25.17±2.59)%,(8.38±1.22)%,(8.98±1.04)%,(19.42±1.90)%,(21.13±2.16)%和(10.23±1.06)%,TP73-AS1表达水平分别为0.67±0.07,0.28±0.03,1.00±0.10,1.01±0.10,0.52±0.05,0.42±0.04和0.76±0.06。低、高剂量实验组的上述指标与对照组相比,si-TP73-AS1组的上述指标与si-NC组相比,pcDNA3.1-TP73-AS1组的上述指标与pcDNA3.1组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论黄秋葵多糖可抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调TP73-AS1有关。     

山茱萸多糖对胃癌细胞增殖和凋亡的机制

目的探讨山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法用不同剂量山茱萸多糖灌胃接种AGS细胞的裸鼠,检测裸鼠体内肿瘤体积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;胃癌细胞AGS分为对照组、山茱萸多糖低、中、高剂量组、si-NC组、si-ELF3-AS1组、山茱萸多糖+pcDNA组、山茱萸多糖+pcDNA-ELF3-AS1组。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测lncRNA ELF3-AS1表达水平。结果山茱萸多糖处理的裸鼠体内移植瘤体积减少,细胞凋亡指数升高(P<0.05)。山茱萸多糖处理胃癌细胞AGS后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高,ELF3-AS1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。胃癌细胞AGS中ELF3-AS1表达水平升高(P<0.05)。抑制ELF3-AS1表达后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高(P<0.05)。ELF3-AS1过表达逆转了山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用。结论山茱萸多糖可能通过下调ELF3-AS1抑制胃癌AGS细胞增殖,促进AGS细胞凋亡。     

肉灵芝提取物调控长链非编码 RNA BRCA1相邻基因 2/双特异性磷酸酶 4/细胞外信号调节激酶通路对肝癌细胞 Hep3B增殖及凋亡的影响

目的探讨肉灵芝提取物是否可通过长链非编码 RNA BRCA1相邻基因 2(LncRNA NBR2)/双特异性磷酸酶 4/细胞外信号调节激酶( DUSP4/ERK)通路而影响肝癌 HepB细胞增殖及凋亡。方法体外培养肝癌 HepB细胞,分为 1 mg/L肉灵芝提取物组、 2 mg/L肉灵芝提取物组、 4 mg/L肉灵芝提取物组、 si-NC组、 si-LncRNA NBR2组、 pcDNA-NC组、 pcDNA-LncRNA NBR2组、肉灵芝提取物 +si-NC组、肉灵芝提取物 +si-LncRNA NBR2组;采用 MTT检测肝癌 HepB细胞增殖;流式细胞术检测肝癌 HepB细胞凋亡; RT-qPCR检测 LncRNA NBR2的表达量;蛋白质印迹法( Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Cleaved-caspase-3)、 DUSP4、p-ERK蛋白表达量。结果肉灵芝提取物可明显降低肝癌 HepB细胞增殖率与 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平( P<0.05),提高肝癌 HepB细胞凋亡率、 Cleaved-caspase-3蛋白水平及 Ln. cRNA NBR2的表达水平( P<0.05);转染 si-LncRNA NBR2后可明显提高肝癌 HepB细胞增殖率及 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平( P<0.05)降低凋亡率及 Cleaved-caspase-3蛋白水平( P<0.05)而转染 pcDNA-NBR2可明显减弱转染 si-LncRNA NBR2对肝癌 HepB细胞增,殖及凋亡的作用;与肉灵芝提取物 +si-NC组比较,,肉灵芝提取物 +si-LncRNA NBR2组肝癌 HepB细胞增殖率及 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平升高( P<0.05),凋亡率及 Cleaved-caspase-3蛋白水平降低( P<0.05)。结论肉灵芝提取物可通过上调 LncRNA NBR2的表达而抑制 DUSP4/ERK信号通路的活化从而抑制肝癌 HepB细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）OPA相互作用蛋白5反义转录本1（OIP5-AS1）对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者（低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例）和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR（qPCR）检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p（miR-942-5p）和检查点激酶1（CHEK1）mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照（NC）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、OIP5-AS1 siRNA（si-OIP5-AS1）组、si-OIP5-AS1+inhibitor阴性对照（si-OIP5-AS1+anti-NC）组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂（si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p）组,采用Lipofectamine 3000试剂进行转染。转染后,qPCR和Western blot检测细胞中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA和蛋白表达水平;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。最后通过双荧光素酶和RNA免疫沉淀（RIP）实验验证OIP5-AS1和miR-942-5p以及CHEK1和miR-942-5p的相互作用。结果 OIP5-AS1和CHEK1在脑胶质瘤组织和细胞中过表达,miR-942-5p呈低表达（均P<0.05）;相关分析显示,脑胶质瘤组织中OIP5-AS1与miR-942-5p的表达水平呈负相关,miR-942-5p与CHEK1 mRNA的表达水平呈负相关,CHEK1与OIP5-AS1 mRNA的表达水平呈正相关;且OIP5-AS1、CHEK1 mRNA在高级别胶质瘤组织中的表达明显高于低级别组织,而高级别胶质瘤中的miR-942-5p水平明显低于低级别组织（P<0.01）。沉默OIP5-AS1可显著上调miR-942-5p,抑制CHEK1的mRNA和蛋白表达（均P<0.05）;沉默OIP5-AS1可显著抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭,促进U87细胞凋亡（均P<0.05）;下调miR-942-5p可上调CHEK1表达,阻断OIP5-AS1沉默对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响（均P<0.05）。双荧光素酶和RIP实验证实miR-942-5p是OIP5-AS1的靶基因,CHEK1是miR-942-5p的下游靶基因。结论 沉默OIP5-AS1可能通过上调miR-942-5p抑制CHEK1表达,抑制脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。     

m6A识别蛋白HuR调控lncRNA TRG-AS1抑制结直肠癌生长的机制研究

目的 探讨N6-甲基腺苷（m6A）识别蛋白人类抗原R(HuR)调控长链非编码RNA T细胞受体γ位点反义RNA 1(lncRNA TRG-AS1)对结直肠癌（CRC）生长的影响。方法 比色法检测CRC患者的癌组织、癌旁组织及正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞HCT116、SW480、LOVO中m6A含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测TRG-AS1表达;Western blot检测HuR蛋白表达。将HCT116细胞分为Ct组、OE-NC组、OE-HuR组、si-NC组、si-HuR组、siHuR+pcDNA组、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组,CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;裸鼠体内移植瘤实验观察肿瘤生长情况;采用甲基化RNA免疫共沉淀（MeRIP）检测TRG-AS1上是否存在m6A位点;RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀（RIP）检测TRG-AS1与HuR蛋白的相互作用。结果 在CRC组织和细胞中,HuR蛋白、TRG-AS1高表达,m6A含...