SB203580对受辐射小鼠免疫细胞的影响

目的探讨p38抑制剂SB203580(SB)对辐射诱导免疫细胞的影响。方法将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、SB组。对照组接受假照射,其余2组进行2Gy全身照射。SB 15 mg/kg腹腔注射,照射24 h后开始给药,隔日1次,共给药5次。SB末次给药24 h后处死小鼠,取外周血进行分型CD4、CD8、B220检测,取骨髓测定细胞内活性氧(ROS)。结果照射组外周血白细胞,B220比例明显下降,CD4细胞比例及骨髓细胞ROS水平显著增加,与对照组比较差异显著(P<0.05)。SB组外周血淋巴细胞比例升高,骨髓ROS水平下降,与照射组相比差异显著(P<0.05)。结论 p38抑制剂对辐射引起的免疫细胞分型变化有一定的影响。     

p38抑制剂对辐射损伤小鼠中免疫细胞的作用

目的:探讨利用p38抑制剂SB203580(SB)抑制p38通路对6Gy受照小鼠免疫细胞辐射损伤的作用。方法:取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和SB组,每组10只。SB组和照射组小鼠接受以6Gy137Csγ射线的全身照射。SB组小鼠照射24h后腹腔注射SB(15mg/kg),每2d1次,共给药5次,其余2组小鼠腹腔注射对照溶液。小鼠受照10d后处死,取外周血计数,流式细胞仪检测CD4、CD8、B220表达,取骨髓细胞测定ROS水平。结果:照射组外周血白细胞(WBC)、CD8、B220细胞比例较对照组明显下降,骨髓ROS水平升高(P<0.01)。SB组外周血CD8比例较照射组上升,骨髓ROS水平下降(P<0.01)。结论:SB对小鼠6Gy照射后造血免疫损伤有一定的缓解作用,其机制可能与其降低照射后骨髓细胞ROS水平有关。     

阿霉素诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡过程中p38MAPK的表达

目的研究阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK在其中的作用。方法用膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术分析阿霉素及应用p38MAPK抑制剂SB203580对胰腺癌细胞凋亡的影响,同时利用免疫细胞化学法观察经阿霉素及SB203580处理人胰腺癌BxPC-3细胞后,p38MAPK的表达水平。结果SB203580(20μmol/L)干预组胰腺癌BxPC-3细胞凋亡率为(20.1±1.4)%,阿霉素作用24 h后诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,凋亡率为(31.1±2.7)%,加用SB203580抑制p38MAPK通路后可增强阿霉素诱导的凋亡作用,凋亡率达(40.4±2.6)%。采用单因素方差分析F=136.79,组间比较组与组之间差异有统计学意义。以20μmol/L阿霉素作用BxPC-3胰腺癌细胞24 h后可见p38MAPK在细胞染色后呈现深褐色颗粒散在分布于部分或整个细胞核及细胞质内,联合应用SB203580后可见p38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少。结论阿霉素可以活化p38MAPK通路,p38MAPK可能起到保护胰腺癌BxPC-3细胞逃避阿霉素诱导的凋亡,阻断该通路可增强阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。     

SB203580对缺氧/复氧损伤诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制

目的研究SB203580(吡啶咪唑类抗炎药)对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养,取第2代细胞实验;共分为3组:对照组,正常培养细胞;模型组,细胞缺氧1 h后,复氧6、12、24、48 h培养;SB203580预处理组,在缺氧损伤前1 h,用不同剂量SB203580(0.2、2、20μmol·L~(-1))预处理细胞,尔后进行缺氧/复氧损伤处理,各细胞用Hoechst 33258、Tunnel染色、流式细胞仪及Western blot方法,观察缺氧/复氧后细胞凋亡及p38MAPK的磷酸化水平。结果与对照组相比,缺氧/复氧后,实验组细胞的凋亡率显著增加,且细胞内p38MAPK磷酸化水平明显升高;而应用SB203580预处理细胞,可显著降低实验组细胞的凋亡率及细胞内p38MAPK的磷酸化水平。结论SB203580通过抑制p38MAPK的活性,对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用。     

SB203580对小鼠造血组织辐射损伤的保护作用

目的观察SB203580对接受γ射线照射的C57BL/6小鼠造血组织损伤的保护作用。方法小鼠随机分为对照(Ctr)组、照射(IR)组及SB203580给药(SB)组,以6.0 Gy 137Csγ射线全身均匀照射SB组和IR组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞(BMMNC);骨髓细胞半固体培养法检测BMMNC增殖能力。另外收集小鼠BMMNC,同样分组,IR组与SB组细胞进行1 Gy体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 SB组外周血白细胞、血小板的数量分别比IR组高111.8%和157.7%(P<0.05);SB组BMMNC较IR组高135.4%,CFU-GM高188.5%(P<0.05);SB组BMMNC内ROS较IR组低56.2%(P<0.05)。结论 SB203580对照射造成的小鼠造血组织损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与其降低照射后细胞内ROS水平有关。     

重组人角质细胞生长因子对放射治疗模型小鼠消化道损伤的影响

目的 观察重组人角质细胞生长因子（KGF-2）对放疗模型小鼠消化道损伤的治疗作用.方法 将50只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、照射对照组、KGF-2低、中、高剂量组5组各10只,空白对照组给予假照射,其他4组给予全身一次性137CS-γ射线7.2Gy照射,低、中、高剂量组分别给予KGF-2 1、2、4mg/kg;通过观察小鼠体质量,检测小鼠肠组织蛋白浓度,NO含量和肠组织病理分析,分析KGF-2对小鼠肠损伤的保护作用.结果 照射前,各组小鼠体质量平均值差异＜0.6g.照射后,空白对照组保持体质量增长趋势,其他4组均于照射后第1天开始出现体质量的明显下降,3个给药组于照射后第4天出现体质量最低值,后逐渐恢复,照射对照组体质量下降明显于第7天达到最低值,后恢复不明显.小鼠接受γ射线一次性全身7.2Gy照射后,照射对照组与空白对照组相比蛋白浓度明显降低、NO含量明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.各给药组与照射对照组比较,蛋白浓度均明显升高,其中仅高剂量给药组蛋白浓度高于照射对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）;中、高剂量给药组NO含量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.空白对照组小肠绒毛、隐窝完整,无明显组织学改变.照射对照组小肠组织病变较重,小肠黏膜结构发生破坏,可见多处片状出血,黏膜水肿,部分绒毛变性、脱落,病变处隐窝破坏.低剂量给药组小肠组织黏膜水肿,绒毛、隐窝完整,无出血坏死等其他改变.中剂量给药组小肠组织黏膜轻度水肿,绒毛、隐窝完整,无出血坏死等其他改变.高剂量给药组小肠组织绒毛整齐、完整,隐窝完整,未见明显改变.结论 KGF-2对小鼠放射性肠损伤有明显的治疗作用.     

p38MAPK在戊地昔布诱导Eca109细胞凋亡中的调控作用

目的探讨p38MAPK信号转导途径在戊地昔布诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的调控作用。方法将正常培养的人食管癌Eca109细胞随机分为正常对照组、戊地昔布组和戊地昔布+SB203580组;采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡情况;RT-PCR检测p38mRNA的表达变化;流式细胞术和免疫细胞化学检测p38蛋白的表达变化。结果①戊地昔布能够诱导Eca109细胞发生凋亡,并呈剂量依赖性,而SB203580能够部分降低戊地昔布诱导的Eca109细胞的凋亡率;②戊地昔布能够上调Eca109细胞中p38mRNA和蛋白的表达,而戊地昔布+SB203580组p38mRNA和蛋白的表达下降;③p38蛋白表达与凋亡率呈正相关。结论戊地昔布能够通过部分激活p38MAPK信号途径诱导Eca109细胞发生凋亡。     

山萘酚通过抑制伽马辐射诱导的氧化应激和凋亡发生来发挥辐射防护作用

目的在从动物水平和细胞水平研究一种黄酮醇类化合物山萘酚的体内外辐射防护作用,并对其作用可能机制进行探索。方法将C57小鼠分为正常对照组、8.5 Gy辐射模型组、8.5 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组、7 Gy辐射模型组、7 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组,小鼠在辐射前连续灌胃给药五天,之后一次性分别接受8.5 Gy或7 Gy剂量全身γ射线辐射,观察并记录8.5 Gy辐射后各组动物在辐射后30 d的生存情况以及十天体重变化。在辐射后的第7天,记录各组动物体重,全部处死7 Gy辐射的各组动物,取小鼠脾组织和胸腺组织测定脏器指数并分别检测组织中SOD和MDA水平变化,取小鼠外周血利用抗体标记和流式细胞仪检测外周血中EPCs水平变化,取小鼠小肠组织利用HE染色和TUNEL染色观察小肠组织病理形态变化和凋亡情况,利用Western印迹检测小肠组织蛋白表达变化。使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株,实验分为正常对照组、辐射模型组、山萘酚给药组,辐射前24 h给予药物孵育,之后一次性接受24 Gy剂量γ射线辐射,辐射后24 h,利用MTT法检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡、试剂盒检测细胞ROS,NO,SOD和MDA水平、实时PCR和Western印迹检测细胞prx5,Cyt-c,Bax,胱天蛋白酶,活化胱天蛋白酶9,胱天蛋白酶3和活化胱天蛋白酶3在m RNA和蛋白水平表达变化。结果山萘酚可以明显的增加辐射后动物生存率,减少辐射引起的体重降低,提高辐射后脏器指数,增加辐射后组织中SOD水平,降低组织中MDA水平,显著保护辐射后肠结构完整性,增加辐射后小肠平均绒毛高度,增加隐窝数,减少辐射诱导的绒毛细胞和隐窝细胞凋亡,并且提高外周血中内皮祖细胞水平;山萘酚可以增加辐射后细胞生存率,减少细胞凋亡,清除辐射产生的过剩ROS和NO,降低MDA水平,增加SOD水平,恢复辐射后prx-5,Cyt-c,胱天蛋白酶9,活化胱天蛋白酶9和胱天蛋白3,活化胱天蛋白3在m RNA和蛋白水平的异常高表达。结论山萘酚通过减少辐射诱导的氧化应激和细胞凋亡发挥辐射防护作用。     

lncRNA Neat1介导p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路调控白蛋白诱导HK-2细胞凋亡

目的 探讨长链非编码RNA核富集丰富转录本1(lncRNA Neat 1)通过miR-204-3p介导p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路调控白蛋白诱导HK-2细胞凋亡的机制。方法 将HK-2细胞分为对照组(正常培养)、模型组(白蛋白损伤模型)、p38抑制药组(10μmol·L^-1p38抑制药SB203580处理后造模)、OV-Neat 1组(转染Neat 1过表达质粒后造模)和OV-Neat 1+p38抑制药组(转染Neat 1过表达质粒,再用p38抑制药SB203580处理后造模)。用细胞计数法-8(CCK-8)检测细胞增殖活力,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-204-3p、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达水平;用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组、p38抑制药组、OV-Neat 1组和OV-Neat 1+p38抑制药组的细胞增殖活性分别为0.95±0.02、0.70±0.01、0.78±0.0...     

扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

p38 Mitogen-activated protein kinase up-regulates LPS-induced NF-kappaB activation in the development of lung injury and RAW 264.7 macrophages

Clarification of the key regulatory steps that lead to nuclear factor-kappa B (NF-kappaB) under cellular and pathological conditions is very important. The action of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) on the upstream of NF-kappaB activation remains controversial. To examine this issue using an in vivo lung injury model, SB203580, a p38 MAPK inhibitor was given intraorally 1h prior to lipopolysaccharide (LPS) treatment (intratracheally). The mice were sacrificed 4 h after LPS treatment. SB203580 substantially suppressed LPS-induced rises in p38 MAPK phosphorylation, neutrophil recruitment, total protein content in bronchoalveolar lavage fluid, and apoptosis of bronchoalveolar cells. Furthermore, SB203580 blocked LPS-induced NF-kappaB activation in lung tissue through down-regulation of serine phosphorylation, degradation of IkappaB-alpha, and consequent translocation of the p65 subunit of NF-kappaB to the nucleus. It is likely that, in cultured RAW 264.7 macrophages, SB203580 also blocked LPS-induced NF-kappaB activation in a dose-dependent manner. SB203580 inhibited LPS-induced serine phosphorylation, degradation of IkappaB-alpha, and tyrosine phosphorylation of p65 NF-kappaB. These data indicate that p38 MAPK acts upstream of LPS-induced NF-kappaB activation by modulating the phosphorylation of IkappaB-alpha and p65 NF-kappaB during acute lung injury. Because LPS-stimulated macrophages may contribute to inflammatory lung injury, the inhibition of the p38 MAPK-mediated intracellular signaling pathway leading to NF-kappaB activation represents a target for the attenuation of lung inflammation and parenchymal damage.     

颈交感神经阻滞对放烧复合伤大鼠小肠组织血流量及ATP酶的影响

目的：探讨颈交感神经阻滞对放烧复合伤大鼠小肠组织血流量及ATP酶的影响。方法：SD大鼠接受5Gy^60Coγ射线全身性一次照射加TBSA15％Ⅲ度烧伤．随机分为复合伤对照组和复合伤加SB治疗组。检测不同时相点小肠黏膜、浆肌层组织血流量；肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性。结果：放烧复合伤后7天内小肠黏膜和浆肌层血流量明显减少，肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性急剧下降；SB治疗组较复合伤组小肠血液灌注量明显增加，同时Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性增高。结论：SB可增加放烧复合伤大鼠小肠组织血液灌流，增加小肠黏膜ATP酶活性，改善肠道组织缺血缺氧和细胞能量代谢障碍。     

Blockade of p38 map kinase inhibits complement-induced acute lung injury in a murine model

Features of acute lung injury include neutrophil influx and increased vascular permeability with resultant pulmonary edema. Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) in in vivo models of endotoxin-induced inflammation results in reduction of organ injury as well as symptomatic relief. In this study, mice received an oral dose (100 mg/kg) of the p38 MAPK inhibitor, SB203580, followed by intratracheal instillation of an agent of complement origin, C5a des arg, at a concentration (10 microg) that induced acute lung injury. Neutrophil and protein content of bronchoalveolar lavage fluid as indicators of leukocyte influx and vascular permeability respectively were assessed. Animals that received C5a-instillation had a significant influx of neutrophils into the lungs (49+/-8%) while mice receiving C5a-instillation and prior treatment with SB203580 exhibited diminished influx (16+/-5%). Similarly, pretreatment with oral SB203580 resulted in decreased vascular permeability (241+/-34 microg/ml) than the positive control animals (407+/-135 microg/ml). Activity analysis of total lung p38 MAPK revealed that p38 activity was increased at 4 h after C5a-instillation and that SB203580-treated C5a-instilled mouse lungs had lower p38 activity than did the C5a-instilled control. These data indicate that oral administration of an agent inhibitory for p38 MAPK offers a protective effect in the lungs from both neutrophil influx and protein leak associated with acute lung injury.     

黄芪多糖在未成年大鼠心肌缺血再灌注炎性损伤中的作用

目的：研究黄芪多糖在未成年大鼠心肌缺血再灌注炎性损伤中的作用。方法：1周龄雄性SD大鼠随机分为5组,假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、黄芪多糖组（40 mg·kg^-1,APS组、p38MAPK阻断剂SB203580组（5 mg·kg^-1,SB组）,APS+SB203580组（APS 40 mg·kg^-1+SB203580 5 mg·kg^-1,APS+SB组） ,给药20 d后,进行冠状动脉左前降支结扎60 min后恢复血流再灌注120 min,经眼眶采血后处死大鼠。ELISA法和Western-blot法分别测定外周血和心肌组织中TNF-α、NF-κB、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白表达。结果：在外周血和心肌组织中,与S组比较,I/R组、APS组、SB组、及APS+SB组中TNF-α、NF-κB、p-p38MAPK表达水平均明显升高（P值均小于0.05）;与I/R组比较,APS组、SB组及黄芪APS+SB组中TNF-α、NF-κB和p-p38MAPK表达水平明显降低（P值均小于0.05）。APS+SB组对TNF-α、NF-κB、和p-p38的蛋白表达抑制作用要显著强于APS组的抑制作用（P值均小于0.05）。结论：黄芪多糖和p38MAPK阻断剂（SB203580）均能够有效改善未成年大鼠的心肌缺血再灌注损伤时的炎症反应,黄芪多糖和SB203580联用可以明显抑制TNF-α和NF-κB的表达,抑制p38MAPK信号通路,具有抑制心肌缺血再灌注损伤的协同作用。     

Exosomes are involved in total body irradiation-induced intestinal injury in mice

Ionizing radiation-induced intestinal injury is a catastrophic complication in patients receiving radiotherapy. Circulating exosomes from patients undergoing radiotherapy can mediate communication between cells and facilitate a variety of pathological processes in vivo, but its effects on ionizing radiation-induced intestinal damage are undetermined. In this study we investigated the roles of exosomes during total body irradiation (TBI)-induced intestinal injury in vivo and in vitro. We isolated exosomes from serum of donor mice 24 h after lethal dose (9 Gy) TBI (Exo-IR-24h), then intravenously injected the exosomes into receipt mice, and found that Exo-IR-24h injection not only exacerbated 9 Gy TBI-induced lethality and weight loss, but also promoted crypt-villus structural and functional injury of the small intestine in receipt mice. Moreover, Exo-IR-24h injection significantly enhanced the apoptosis and DNA damage of small intestine in receipt mice following TBI exposure. In murine intestinal epithelial MODE-K cells, treatment with Exo-IR-24h significantly promoted 4 Gy ionizing radiation-induced apoptosis, resulting in decreased cell vitality. We further demonstrated that Exo-IR-24h promoted the IR-induced injury in receipt mice partially through its DNA damage-promoting effects and attenuating Nrf2 antioxidant response in irradiated MODE-K cells. In addition, TBI-related miRNAs and their targets in the exosomes of mice were enriched functionally using Gene Ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway analyses. Finally, injection of GW4869 (an inhibitor of exosome biogenesis and release, 1.25 mg·kg⁻¹·d⁻¹, ip, for 5 consecutive days starting 3 days before radiation exposure) was able to rescue mice against 9 Gy TBI-induced lethality and intestinal damage. Collectively, this study reveals that exosomes are involved in TBI-induced intestinal injury in mice and provides a new target to protect patients against irradiation-induced intestinal injury during radiotherapy.     

p38蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响

目的观察特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响。方法BALB/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组。通过原位分子杂交和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-4、IL-5 mRNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4、IL-5含量以及肺组织IL-4、IL-5mRNA的表达较正常对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.01);SB203580干预组小鼠上述指标较哮喘模型组小鼠明显降低,差异亦具有显著性(P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻。结论SB203580能降低气道炎症细胞的聚集和炎症介质的表达。抑制p38 MAPK的活性可能成为哮喘治疗的新途径。     

E838对小鼠骨髓细胞染色体的辐射防护作用

目的探讨E838对γ射线照射小鼠骨髓细胞染色体损伤的防护作用。方法将615小鼠,随机分为对照组、辐射对照组、E838组、炔雌三醇(EE3)组。E838组和EE3组分别腹腔注射E838和EE3,另两组给予等体积茶油,第3次给药24 h后进行剂量为1.5 Gy的137Csγ射线全身照射,观察其骨髓细胞染色体畸变率。结果 E838组、EE3组骨髓细胞染色体畸变与辐射对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),E838组畸变细胞与EE3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E838可降低辐射诱发的骨髓细胞染色畸变细胞数,对骨髓细胞染色体具有一定的辐射防护作用。