批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物

目的制备纯度较高,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ(FⅨ)复合物.方法以人新鲜冰冻血浆为原料,采用SD病毒灭活工艺,经国产DEAE-Sepharose Fast Flow胶批式吸附和Ca3(PO4)2吸附制备凝血因子Ⅸ复合物.结果两步的活性收率分别为(89.94±1.31)%(n=7)、(82.27±2.18)%(n=6),制品的FⅨ∶C比活为(16.28±2.80)IU/mg.FIX的量为(126.82±11.60)IU/瓶(200PE).结论本工艺实用性较高,可用于制备低成本,高质量的凝血因子Ⅸ复合物.     

可变误差多面体法用于多种维生素的同时测定

本文基于对多元校正分析模型的简要讨论,探索了应用可变误差多面体法同时测定维生索B₁,B₂,B₆和烟酰胺的可行性。其结果准确度和精密度均较满意。维生素B₁,B₂,B₆及烟酰胺的回收率分别是99.8±0.9%(CV),100.1±0.8%(CV),100.2±2.1%,100.1±0.7%(CV)。结果表明,通过公式K_S=A_SC_S^T(C_SC_S^T)^-1计算校正系数矩阵K_S,并结合可变误差多面体法这一直接求解方法,能有效地提高分析结果的准确度,克服组分间的交互作用及病态,是多元校正分析的较佳策略之一。     

卡尔曼滤波分光光度法测定复方维生素B片四组分含量

复方维生素B片中的主要成分维生素B₁,B₂,B₆及烟酰胺各具有一定的不稳定性,且配方比例差较大,因而给多组分同时测定带来一定的困难。本文研究了应用卡尔曼滤波分光光度法同时测定复方维生素B片中的主要成分的可行性,并在处理由于分子间的相互作用引起的吸收度偏离Beer-Lambert定律的现象作了探索,得到较满意的结果。维生素B₁,B₂,B₆及烟酰胺的回收率分别是:100.2±0.90%(CV),100.3±1.7%(CV),101.1±3.3%(CV),99.90±0.65%(CV)。较已有的报道结果均好,表明方法可行。     

银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和谷氨酸损伤时谷氨酸引起的大鼠星形胶质细胞［Ca2+］i变化的影响

目的研究银杏叶提取物对低氧复氧、H₂O₂和L-谷氨酸损伤时谷氨酸升高大鼠星形胶质细胞［Ca²⁺］_i的影响。方法钙荧光探针Fluo-3/AM标记胞浆内游离钙离子，激光扫描共聚焦显微镜测定［Ca²⁺］_i的变化。结果 在低氧复氧、H₂O₂以及高浓度的L-谷氨酸损伤后，外源性谷氨酸（27 μmol·L^-1）均不能引起培养乳大鼠星形胶质细胞正常的［Ca²⁺］_i升高，反而使［Ca²⁺］_i分别降低(3.3±1.6)%，(81±11)%和(81±7)%；损伤前预先给予GbE（10 mg·L^-1）不能明显改善星形胶质细胞的谷氨酸反应，但预先给予GbE（100 mg·L^-1）后，27 μmol·L^-1谷氨酸可使损伤的星形胶质细胞［Ca²⁺］_i分别升高(135±98)%，(117±93)%和(89±36)%。结论低氧复氧、H₂O₂以及高浓度的L-谷氨酸均能损伤星形胶质细胞的谷氨酸反应，影响神经细胞与胶质细胞的双向交流。GbE能明显逆转不同损伤后谷氨酸诱导星形胶质细胞［Ca²⁺］_i的异常变化，使星形胶质细胞在不同损伤时能维持正常功能，该作用可能与GbE的脑保护作用有关。     

三七皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1口服吸收及其体内药代动力学的研究和比较

分别考察三七总皂苷(PNS)在大鼠灌胃和静脉给药后的人参皂苷Rg₁(Rg₁)、人参皂苷Rb₁(Rb₁)的胆汁排泄；采用平衡透析法测定药物的血浆蛋白结合率；并结合药代动力学的实验结果，研究和比较Rg₁与Rb₁的口服吸收及其体内药代动力学性质。结果表明，静脉给药后10 h，Rg₁及Rb₁胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(61.48±18.30)%和(3.94±1.49)%；灌胃给药后12 h，Rg₁及Rb₁胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(0.91±0.51)%和(0.055±0.02)%。Rg₁及Rb₁的血浆蛋白结合率分别为6.56%～12.74%和80.11%～89.69%。Rg₁的胃、肠和肝的通过率(F_S，F_I和F_H)分别为49.85%，13.05%和50.56%；Rb₁分别为25.82%，4.18%和65.77%。因此，肠壁吸收差是Rg₁和Rb₁生物利用度低的主要原因。Rg₁具有较高的胆汁排泄和较低的血浆蛋白结合率，Rb₁的胆汁排泄较低，而血浆蛋白结合率较高。Rb₁的肠黏膜透过性和体内消除速度都低于Rg₁，但前者的平均滞留时间(MRT)和血药浓度曲线下面积(AUC)均大于后者。     

胸腺肽α1缓释注射微球的研究

制备胸腺肽α₁(Tα₁)的长效注射微球，并对微球的体外释放特性、体外活性及药效学进行考察。采用复乳法(W/O/W)制备了载Tα₁聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)的微球；考察微球的粒径大小、外观及包封率等理化特性；以HPLC法测定微球的体外释放速率；采用CCK-8法评价微球制备工艺和体外释放过程中Tα₁的生物学活性；体内药效学研究中采用流式细胞仪检测免疫抑制模型大鼠给予Tα₁微球后所产生的CD₄⁺，CD₈⁺因子的量，根据CD₄⁺/CD₈⁺的比值变化评价体内药效。微球球形圆整，分散性好，两个优选处方(外水相中加入5%氯化钠和10%葡萄糖)的微球包封率分别为87.8%和90.2%；Tα₁微球1个月的体外累积释放可达90%以上。使用含10%葡萄糖的PVA溶液作为外水相，较好地保持了制备工艺过程中的Tα₁生物学活性，在体外释放过程中Tα₁的生物学活性略有下降；Tα₁微球可显著提高免疫抑制模型小鼠的免疫力。用可生物降解的聚合物PLGA作为载体材料，可以将Tα₁制备成缓释1个月的注射微球。     

反相高效液相色谱分析赤霉素GA3含量

以μBondapak C₁₈柱建立了赤霉素GA₃的HPLC分析方法。反相HPLC梯度条件可使GA₃与包括双键异构体GA₁在内的其它同系物通过离子配对机制获得分离。此法操作简便,不需衍生化;分析快速,色谱全程仅15 min;检测灵敏,0.5μg即可准确定量;线性(r=0.999,n=5)、重复性(RSD<2%,n=4)均佳;结果准确。优越性全面超出各传统分析方法,可望成为赤霉素质量分析的标准方法。     

HPLC梯度法测定复方三七维康胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、Rg1的含量

摘 要 目的:建立HPLC梯度法同时测定复方三七维康胶囊中三七皂苷R₁、人参皂苷R_b1、R_g13种皂苷的含量。方法: 色谱柱：大连Spherisorb C¹⁸分析柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-水,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^-1;检测波长 203 nm。结果:三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1和R_b1分别在1.06～18.55 μg（r=0.997 3）、2.02～35.35 μg（r=0.998 2）和2.02～35.35 μg（r=0.998 2）之间线性关系良好。平均回收率三七皂苷R₁为100.8%（RSD=1.53%,n=5）,人参皂苷 R_g1为98.9%（RSD=1.87%,n=5）,人参皂苷R_b1为99.7%（RSD=1.90%,n=5）。结论:HPLC梯度洗脱法能够将多种皂苷很好地分离检测,该方法准确可靠,重复性好,可用于控制其质量。     

辅酶Q10乳剂的处方工艺改进与质量评价

目的 对处方工艺改进的辅酶Q₁₀乳剂进行质量评价,并建立其含量测定方法。方法 制备高油量辅酶Q₁₀乳剂,利用HPLC建立其含量测定与有关分析方法,并进行理化性质表征,测定包封率,考察灭菌、冻融和稀释稳定性,进行强光降解试验以及影响因素、加速和长期试验。结果 辅酶Q₁₀乳剂粒径、Zeta电位、pH值、含量和包封率分别为（239.5±0.8）nm、（?32.28±2.04）mV、（5.86±0.02）、（100.59±1.24）%和（98.5±1.1）%,灭菌、冻融和稀释稳定性均良好。乳剂光解速率与稀释倍数呈正比,与载药量呈反比。辅酶Q₁₀乳剂需避光制备、低温储存;（40±2） ℃避光放置10天,pH值下降0.61;加速和长期试验稳定性良好。结论 高油量辅酶Q₁₀乳剂符合静脉注射液的质量要求,稳定性良好。     

慢性孵育β-淀粉样肽(25-35)对培养大鼠海马神经元外向钾电流的影响

目的　研究慢性孵育β-淀粉样肽_(25-35) (β-AP_25-35)对海马神经元上瞬时外向钾电流(I_A)和延迟整流钾电流(I_K)的影响。方法　在培养的大鼠海马神经元上用膜片钳全细胞记录钾通道电流。结果　β-AP_25-35 3μmol·L^-1 孵育细胞24h ,I_K 电流幅度增加(44.3±5.4)% ,电流密度由(30.4±6.4)pA·PF^-1 增加至(43.8±4.7)pA·PF^-1 ;β-AP_25-3510μmol·L^-1 孵育12h ,I_K 电流幅度增加(69.8±4.1) % ,电流密度增加至(51.6±7.9)pA·PF^-1,呈浓度依赖性;β-AP_25-35引起的I_K 增加对TEA 5mmol·L^-1 敏感;β-AP_25-35上调I_K 的作用主要发生在β-AP_25-355用药后48h内。β-AP_25-35对I_A无显著性影响。结论　β-AP_25-35选择性地增加海马神经元上I_K,这一作用可能与β-AP的神经毒性有关     

超临界快速膨胀法制备厚朴SCF-CO2萃取物超微颗粒及其溶出度和药动学考察

应用超临界快速膨胀技术 (RESS) 制备中药厚朴超临界CO₂ (SCF-CO₂) 萃取物超微颗粒,初步探讨该技术应用于中药领域的可行性和优越性。以平均粒径、厚朴酚 (magnolol,MN) 及和厚朴酚 (honokiol,HN) 的总酚含量为考察指标, 采用L₉(3³) 正交实验,对影响RESS制备厚朴SCF-CO₂萃取物超微颗粒的因素 (萃取温度、萃取压力、喷嘴孔径）进行优选,并通过扫描电镜、HPLC、结合溶出度及体内动物实验对粒子各评价指标进行考察。该法最佳制备条件为:萃取温度T = 50 ℃、萃取压力P = 25 MPa、喷嘴孔径d = 100 μm;此条件下得到灰白色粒子, 电镜下观察为不规则的片状或块状,平均粒径为4.7 μm,粒子中总酚含量为91.2%。在15%甲醇中90 min内厚朴SCF-CO₂萃取物超微颗粒的溶出度为14.77 mg·L⁻¹,显著高于厚朴SCF-CO₂萃取物原料粒子的溶出度6.37 mg·L⁻¹  (P < 0.01);两组大鼠分别灌胃原料粒子混悬液和RESS粒子混悬液后,于不同时间测定血药浓度,得HN和MN的平均血药浓度-时间曲线,采用WINNONLN软件计算求得药动学参数,对两组药动学参数进行t检验,结果表明RESS粒子中HN、MN的AUC_0−t值 [(5.41 ± 0.63) 和 (7.24 ± 0.83) mg·h·L⁻¹]和C_max值 [(2.31 ± 0.17) 和 (2.84 ± 0.21) mg·L⁻¹] 均显著高于原料粒子组中HN、MN的AUC_0−t值 [(4.23 ± 0.36) 和 (5.46 ± 0.57) mg·h·L⁻¹] 和C_max值 [(1.55 ± 0.22) 和 (2.35 ± 0.14) mg·L⁻¹] (P < 0.05)。RESS技术可用于厚朴SCF-CO₂萃取物超微粒子的制备,得到的粒子粒径小,分布均匀,其溶出度、AUC和C_max值均明显高于普通工艺制备的厚朴提取物粒子,且操作温度低、工艺流程简单、对环境无污染及无有机溶剂残留。
     

辛伐他汀联合辅酶Q10对慢性心衰大鼠心肌转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨辛伐他汀联合辅酶Q₁₀对慢性心力衰竭大鼠心肌转化生长因子β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)表达的影响。方法 利用腹主动脉缩窄法制作SD大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为模型组、辛伐他汀组、辅酶Q₁₀组、辛伐他汀+辅酶Q₁₀组,另设假手术组,每组8只大鼠,观察各组大鼠血流动力学参数(左室舒张末压、±dp/dt_max) 和左心室心肌组织病理学改变,SP免疫组化检测各组大鼠左心室心肌中TGF-β₁表达情况。结果 与模型组相比,辛伐他汀组、辅酶Q₁₀组和辛伐他汀+辅酶Q₁₀组左室舒张末压显著降低(P<0.01),±dp/dt_max显著升高(P<0.01),左心室肌TGF-β₁阳性表达水平显著降低(P<0.01);联合用药较辛伐他汀组、辅酶Q₁₀改变更为显著(P<0.05)。结论 辛伐他汀与辅酶Q₁₀联合应用较两药单独应用改善心衰大鼠心功能、抑制心室重塑和减少TGF-β₁表达作用明显。     

HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B1、B2和B6含量

摘 要 目的:建立HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆含量的方法。方法: 采用Insteril ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：0.01 mol·L^-1庚烷磺酸钠（含0.25%三乙胺,用冰醋酸调节pH至3.8)-甲醇（75∶25）,柱温30℃,检测波长为280 nm,流速：1.0 ml·min^-1。结果: 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆分别在3.98～99.40 μg·ml^-1（r=0.999 7）、4.08～101.91μg·ml^-1（r=0.999 9）、2.08～52.00 μg·ml^-1（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.18%、99.53%、99.27%,RSD分别为0.60%、0.67%、0.71%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确,可用于复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆的含量测定     

HPLC-ELSD同时测定跌打丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的 建立同时测定跌打丸中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb1含量的HPLC-ELSD检测方法。方法 采用Phenomenex Kinetex C₁₈色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.6 μm),柱温30 ℃,流速0.5 mL·min^-1,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,ELSD检测器,漂移管温度110 ℃,载气(空气)体积流量3.0 L·min^-1。结果 三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb1分别在0.158~3.16 μg(r=0.999 8),0.407~8.14 μg(r=0.999 5),0.446~8.92 μg(r=0.999 9)内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55%(RSD=1.04%),98.09%(RSD=1.03%),97.34%(RSD=0.81%)。结论 该方法简便、快速、准确,可用于跌打丸的质量控制。     

山莨菪碱对乙酰胆碱和去甲肾上腺素引起的兔虹膜释放前列腺素的影响

本文研究了654-2对Ach及NE引起的兔虹膜释放PGE₂及6-keto-PGF_1α作用的影响。Ach及NE使虹膜释放PGs增加,654-2对Ach释放PGs的作用呈剂量依赖性抑制,当654-2浓度为3×10^-5mol/L时,Ach(5x10^-5mol/L)引起的PGE₂及6-keto-PGF_1α的释放量分别降低31%及30%。654-2浓度高于6x10^-5mol/L时显著抑制NE(5x10^-5mol/L)释放虹膜PGs的作用,当654-2浓度为3x10^-4mol/L时,使NE增加虹膜释放PGE:及6-keto-PGF_1α的量分别从62%及34%降至7.5%及4%(p<0.01)。654-2抑制PGs释放对其抗感染性休克等作用可能是有利的。     

维生素B2和B6的同步荧光分析法及其在维生素复合制剂中的应用

本文建立了维生素B₂和B₆的同步荧光分析法。以△λ=58nm进行同步扫描所得的两个同步荧光峰(以发射波长表示,分别位于526nm和389nm)可用以同时分别定量维生素B₂和B₆。方法快速、灵敏。维生素B₂和B₆的工作曲线线性范围分别为0～1μg/ml和0～1.5μg/ml,检出限分别为0.5ng/ml和1ng/ml。方法已应用于三种复合维生素B制剂中维生素B₂和B₆的分析。     

利凡诺引产时羊水中前列腺素水平的动态研究

利凡诺为一有效的中期引产药,但对其作用机制,迄无定论。本实验采用放射免疫测定技术,观察了10例孕妇在给利凡诺前、给药后10～15小时、宫缩开始时和流产前羊水中前列腺素水平的动态变化,其中PGE分别为213±54,553±138,968±243和1475±869(pg/ml);PGF_2α分别为369±104,392±167,1582±548和6006±2131(pg/ml)。结果表明,利凡诺引产的发动和进展,可能与内源性前列腺素的合成和释放增加有关。     

联合测定非霍奇金淋巴瘤患者血清乳酸脱氢酶及β2-微球蛋白的临床意义

目的 探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)和β₂-微球蛋白(β₂-MG)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者中的水平及临床意义。方法 回顾性分析2009年1月至2014年1月住院治疗的280例初治NHL患者治疗前后血清LDH及β₂-MG动态水平,并组成A组(研究组),另选取门诊同期进行健康体检者270例组成B组(对照组),按淋巴瘤国际预后指数(IPI)评分分为低危及中低危组(0~2分)95例,中高危及高危组(3~5分)185例,对比分析A组和B组血清中LDH及β₂-MG水平。结果 A组血清LDH及β₂-MG水平范围为488.11±222.13U/L和4.48±1.21 mg/L;B组血清LDH及β₂-MG水平范围为116.05±106.51 U/L和1.61±0.37 mg/L;两组比较,A组明显高于B组(P < 0.05);LDH和β₂-MG水平在Ⅲ~Ⅳ期患者高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P < 0.05),有全身症状组与无全身症状组以及IPI(3~5分)组与(0~2分)组比较,前者LDH及β₂-MG的范围为(573.71±257.28) U/L和(5.75±0.81) mg/L,后者LDH及β₂-MG的范围为352.81±188.02 U/L和2.8±0.58 mg/L,两者比较,前者明显高于后者(P < 0.05);A组患者治疗后血清中LDH及β₂-MG水平明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P < 0.05);血清LDH及β₂-MG水平正常的NHL患者临床疗效优于血清LDH及β₂-MG水平异常患者。结论 血清LDH及β₂-MG水平可作为NHL的辅助诊断及患者分型、分期、疗效的评估和预后判断的一个有效指标。     

维生素K3粉末降解动力学

在温度为50～90℃,相对湿度为50～93%范围内,维生素K₃的变色速率方程为—dR/dt=k_RR,降解速率方程为d(C_o—c)/dt=k_C(c_o—c)^1/2,光解速率方程为—dR/dt=k_P(R_o—R)^-1。k_R和_C与热力学温度T和相对湿度RH的关系通式为k=k′exp(—E_A/RT)exp(m′RH)。在实验温度和湿度范围内,变色和降解的表观活化能平均值分别为105.51和130.72 kJ/mol。     

不同粒径聚乙二醇化维生素K1脂质体的制备及体内外评价

目的 制备不同粒径聚乙二醇化维生素K₁（VK₁）脂质体,并对其进行制剂学表征,考察体内药动学和促凝药效。方法 采用薄膜分散法制备不同粒径的VK₁脂质体,采用马尔文粒径仪测定粒径、聚合物分散性指数（PDI）、Zeta电位;透射电子显微镜观察形态;以粒径为指标,考察脂质体在4℃下储存1个月、在磷酸缓冲液（PBS,pH 6.8）及pH 1.2水溶液中48 h的稳定性;采用超滤离心法测定包封率与载药量;采用大鼠在体肠吸收模型考察肠吸收特性;ig给药考察脂质体在大鼠体内药动学行为;以华法林钠诱导大鼠低凝血酶原血症,采用ELISA试剂盒检测血浆中凝血因子II、V、VII和IX含量,检测凝血酶原时间（PT）,评价不同粒径VK₁脂质体（2 mg·kg^-1）促凝效果。结果 制备了3种VK₁脂质体（Lip-180、Lip-120、Lip-60）,粒径分别为（182.40±2.17） nm、（114.38±0.60） nm和（68.42±0.73） nm,PDI分别为0.21±0.01、0.12±0.00和0.17±0.01 ,电位分别为（-27.67±1.58）、（-22.93±1.81）、（-26.63±1.37）mV,脂质体均呈球形,分布均匀,包封率均>90%,载药量均>2.90%,稳定性良好。与Lip-180相比,Lip-120和Lip-60表现出更缓慢的释放性能和更好的跨膜吸收速率。Lip-120及Lip-60的药时曲线下面积（AUC_0-∞）分别是Lip-180的1.52和1.80倍,并且Lip-120与Lip-60的AUC_0-∞分别是维生素K₁注射剂（市售对照）的1.24与1.46倍。与低凝血酶原血症模型大鼠比较,经ig给药Lip-180、Lip-120、Lip-60及维生素K₁注射剂后,PT显著降低（P<0.001）,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ水平均升高,其中,Lip-60作用最显著,除给药后6 h的凝血因子Ⅹ外,均差异显著（P<0.05、0.01、0.001）。结论 聚乙二醇化VK₁脂质体分布均匀,稳定性高,释放缓慢,口服生物利用度高,体内促凝效果较好,优选粒径最小的Lip-60。