HPLC法测定低分子量肝素钠的分子量及其分布

采用HPLC法对低分子量肝素钠(LMWH)分子量及其分布进行了测定.流动相选用2.84%的硫酸钠溶液,采用紫外检测器与示差折光检测器串联连接,紫外检测波长234 nm,色谱柱为Protein-Pak Φ8 mm×300 mm.结果表明:所测三批LMWH的重均分子量分别为3 158 D,4 387D,4 226D;其中分子量小于8 000D的量分别为86.2%,89.4%,87.8%,符合英国药典1993年增补版标准.     

SEC-MALLS法测定羟乙基淀粉130/0.4重均分子量及分子量分布

目的分子排阻色谱与多角度激光光散射联用技术(SEC-MALLS)测定羟乙基淀粉130/0.4重均分子量(Mw)及分子量分布。方法以醋酸盐缓冲液(醋酸钠18.7 g,叠氮钠1.72 g,冰乙酸34.5 mL,加水至5 000 mL)为流动相,流速0.5 mL.min-1,色谱柱:预柱TSKgel Guard column pwxl(4 cm×6 mm),分离柱TSKgel G4000 pwxl(30 cm×7.8mm)2根串联,检测器:十八角度激光光散射检测器和示差折光检测器联用。结果三批供试品重均分子量均在110000～150 000,10%大分子部分重均分子量均小于380 000,10%小分子部分重均分子量均大于15 000。结论该方法检测结果准确,重现性好。     

高效凝胶渗透色谱法测定莫海林分子量及其分布

目的 :建立一种莫海林分子量及其分布测定的质控方法。方法 :采用高效凝胶渗透色谱法 (HPGPC) ,色谱柱为ShodexAsahipakGF 5 10HQ (7 6mm× 30 0mm) ,以已知分子量的葡聚糖 (Dextran)为标样 ,0 2mol·L-1硫酸钠 (稀硫酸调至pH 5 0 )为流动相 ;柱温 35℃ ;流速 0 5mL·min-1;示差折光检测器。结果 :利用GPC软件处理 ,得到莫海林的数均、重均分子量和分子量累积重量分布曲线。结论 :本文所建立的HPGPC法简便、快速、重现性好 ,适合于该类药物的质量控制     

高效凝胶色谱法测定罗勒多糖的分子量与分子量分布

目的 建立测定罗勒多糖的分子量与分子量分布的方法.方法 应用高效凝胶色谱法,色谱柱为Shodex SB-804HQ凝胶色谱柱,检测器为示差折光检测器,流动相为0.7%硫酸钠溶液(含0.02%叠氮化钠),柱温为35℃,流速为0.5 mL/min.结果 6批样品的重均分子量分布在80 000-100 000之间,精密度、重现性良好.结论 试验方法快速、准确,结果可靠,为质量控制提供了基础.     

高效凝胶渗透色谱法测定硫酸软膏素的分子量及其分布

目的用高效凝胶渗透色谱法对硫酸软骨素的相对分子量及其分布进行测定.方法色谱柱为TSK4000PW(7.8mm×300mm),以已知相对分子量的葡聚糖为标样,0.2mol/L硫酸钠溶液(用稀硫酸调pH5.0)为流动相,柱温35℃,示差折光检测器.结果测得硫酸软骨素的重均分子量(Mw)为37000～48000D,分布宽度(Mw/Mn)为1.34～1.45.结论该法操作简便,快速,可用于硫酸软骨素的分子量及其分布的质量控制.     

藻酸双酯钠分子量及其分布的测定

采用示差折光检测器,以高效凝胶色谱法测定藻酸双酯钠分子量及其分布.以已知分子量的右旋糖酐为对照,采用Shodex OHpak SB-803HQ色谱柱,2.8%硫酸钠溶液(含0.02%叠氮钠)为流动相,检测池温度40℃,柱温35℃,流速0.5ml/min.     

SEC-RI-MALLS测定甘露聚糖肽分子量与分子量分布

目的:建立尺寸排阻色谱-示差折光-多角度激光光散射检测器联用(size exclusion chromatography-refractive index-multiangle laser light scattering, SEC-RI-MALLS)测定甘露聚糖肽原料药和制剂分子量及分子量分布的方法。方法:采用SEC-RI-MALLS联用技术,以0.05 mol·L^-1硫酸钠溶液为流动相,Shodex OHpak SB-804 HQ为色谱分离柱,在流速0.5 mL·min^-1,柱温35℃的条件下对甘露聚糖肽分子量及其分布进行专属性、准确度、精密度、耐用性方法学验证,并与现行质量标准方法进行比较。结果:片剂辅料淀粉对测定无干扰,右旋糖酐标准品实测值同标示值的准确度相对误差<3.0%;当样品配制浓度为2 mg·mL^-1时精密度最好,RSD为0.40%;重现性、耐用性RSD均不大于5.0%。79批次样品采用Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱和TSK-GEL G4000 PW_XL色谱...     

茯苓多糖的提取及其分子量测定

目的：优化茯苓多糖的提取工艺,测定茯苓多糖分子量及其分布。方法：采用正交试验设计对影响茯苓多糖提取的因素(超声时间、料液比、提取温度、提取时间)进行优化;以葡萄糖作标曲通过苯酚硫酸法测定茯苓多糖的含量;高效尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光联用(HPSEC-MALLS-RI)测定其分子量及其分布。 结果：茯苓多糖的最佳提取工艺为超声时间30min,液料比1：50,提取温度100℃,提取时间4h;茯苓多糖含量为93.5%;测得茯苓多糖组分A的重均分子量为4.671×106(±1.003%)Da,组分B的重均分子量为6.144×104(±2.466%)Da。     

聚乙二醇400分子量测定方法比较研究

目的：建立高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定聚乙二醇400（PEG400）分子量及其分布,并与《中国药典》所用的端基分析滴定法比较。方法：采用Shodex OHpak SB-802.5HQ与Shodex OHpakSB-803HQ色谱柱串联分离,以0.1 mol·L^-1硝酸钠（0.02%叠氮钠）为流动相,流速0.5 mL·min^-1,柱温30℃,样品浓度2 mg·mL^-1,采用示差折光检测器进行测定。结果：HPGPC测定的聚乙二醇400的分子量结果与《中国药典》2015年版所用的端基分析法测得的平均分子量结果接近,采用不同厂家色谱柱、对照品可影响PEG400的分子量测定结果,选用Shodex OHpak SB色谱柱串联测定聚乙二醇400重均分子量的范围为407~440,分子量分布宽度1.0~1.1,该方法的精密性RSD为0.2%,重复性为2.89%,24 h内样品稳定性RSD为0.66%。结论：经方法学验证,HPGPC法准确、重复性好,可用于聚乙二醇400分子量及其分布测定。     

高效液相色谱法测定尿多酸肽注射液中小分子肽的分子量

目的 :采用凝胶排阻色谱法测定尿多酸肽注射液中的小分子肽的分子量。方法 :采用Waters 5 10型高效液相色谱仪 ,TSK -GELG2 0 0 0SW×L色谱柱 (30 0mm× 7 8mm ,粒度 5 μm) ,以乙腈 -水 -三氟乙酸 (10∶90∶0 0 5 )为流动相 ,流速 :1 0mL·min- 1 ,紫外检测器于 2 14nm测定。结果 :测定尿多酸肽注射液中的小分子肽的分子量均为 10 4Da以下。结论 :方法简单 ,重现性好 ,可作为测定小分子肽分子量的参考依据。     

鱼皮胶原蛋白水解液中小分子寡肽的分子量分布测定

目的建立测定鱼皮胶原蛋白水解液中小分子寡肽相对分子量分布的方法。方法采用高效凝胶排阻色谱法用3根TSK-GEL G2000SWXL色谱柱（300 mm×7.8 mm,5μm）串联,室温;流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶液（15∶85）,流速0.6 mL.min-1,检测波长220 nm。结果在相对分子量149～2 490 Da内,寡肽相对分子量的对数与其保留时间具有良好的线性关系（r=0.995 6）;精密度和重复性RSD均〈0.1%。结论本方法简便准确,重复性好,可作为测定小分子寡肽分子量分布的方法。     

分子排阻色谱法测定低浓度肝素钠注射液的相对分子质量与相对分子质量分布

目的： 建立分子排阻色谱法测定低浓度肝素钠注射液相对分子质量与相对分子质量分布的方法。方法： 采用分子排阻法,检测器为示差检测器,TSK G4000SWXL（300 mm×7.8 mm,5 μm）和TSK G3000SWXL（300 mm×7.8 mm,5 μm）色谱柱串联,柱温为30℃,流动相为0.1 mol·L^-1醋酸铵溶液,流速为0.6 mL·mL^-1。结果： 该方法专属性强,回收率试验中重均相对分子质量（M_w）的RSD为0.38%,相对分子质量大于24 000级分的RSD为1.81%,相对分子质量8 000~16 000与16 000~24 000级分之比的RSD为0.42%。样品定量限为2.0 mg·mL^-1,测定结果符合《中国药典》2015年版标准。结论： 本方法操作简便,重复性好,结果准确可靠,可用于测定低浓度肝素钠注射液相对分子质量与相对分子质量分布。     

低分子肝素分子量的测定

用高效液相色谱法，以低分子肝素的标准对照品为标准，测定了低分子肝素的平均分子量。其重均分子量范围在3500～5000，分子县在8000以下者占85％以上。对该法的实验条件进行了探讨。     

高效体积排阻色谱-示差折光检测器-多角激光光散射仪联用测定右旋糖酐70原料药的分子质量

目的:建立测定右旋糖酐70原料药的分子质量的方法。方法:采用不需要对照品的高效体积排阻色谱-示差折光检测器-多角激光光散射仪(HPSEC-RID-MALLS)联用法,另与《中国药典》方法即HPSEC-RID法(采用3种来源对照品)测定3批样品重均分子质量(Mw)的结果进行比较。两种方法色谱柱均为TSK-GEL G4000SWXL凝胶色谱柱,流动相分别为0.2 mol/L氯化钠水溶液和0.71%硫酸钠水溶液(均含0.02%叠氮化钠)。结果:采用HPSEC-RID-MALLS法与采用其中2种来源对照品的HPSEC-RID方法测得的样品Mw结果相近。结论:HPSEC-RID-MALLS法不需要对照品,可直接测定样品的分子质量,方法更简便、快速,且结果准确。     

中药注射液中高分子物质初步研究

目的:应用凝胶色谱法对几种中药注射液中的高分子物质进行测定。方法:采用TSK GEL 2000 SWxl(7.8 mm×300mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.83%三氟乙酸溶液(40∶60),流量为0.7 mL.min-1,检测波长214 nm,进样量为20μL。结果:清开灵注射液和黄芪注射液中均检出高分子物质,而参芪扶正注射液中未检出。结论:凝胶色谱法测定中药注射液中高分子物质操作简便,结果准确可靠,可作为中药注射液的质量控制方法,为中药注射液的安全性评价提供了思路。     

那屈肝素钙注射液重均相对分子质量与相对分子质量分布探析

目的：考察那屈肝素钙注射液重均相对分子质量与相对分子质量分布情况及存在问题，并对现行标准检验方法进行改进与统一以便更有效评价产品质量。方法：按照现行标准对市售的4家企业47批样品的相对分子质量与相对分子质量分布项目进行检验；改进并统一检验方法：采用TSKgel G2000SWXL （300 mm×7.8 mm）色谱柱分离，以0.1 mol·mL^-1醋酸铵溶液为流动相，流速0.5 mL·min^-1，柱温30℃，样品浓度1 500 IU·mL^-1，示差折光检测器对47批样品进行测定；比较分析法定方法和拟定方法对相对分子质量与相对分子质量分布测定结果的影响及不同企业样品相对分子质量与相对分子质量分布的差异；比较分析加速时间对样品相对分子质量与相对分子质量分布的影响。结果：4家企业47批那屈肝素钙注射液的相对分子质量与相对分子质量分布按法定标准检验均符合规定。拟定方法经方法学验证，样品主峰与溶剂峰分离度良好，精密度RSD为0.1%；重均相对分子质量与相对分子质量分布结果的重复性RSD依次为0.1%、1.5%、0.1%、0.1%；日间精密度RSD依次为0.2%、1.9%、0.4%、0.4%。47批样品的相对分子质量与相对分子质量分布按拟定方法检验均符合规定，法定方法与拟定方法测定结果略有差异。B企业、C企业样品相对分子质量小于2 000的级分所占比例较D企业高。A、B、C 3家企业样品重均相对分子质量与加速时间呈负相关性。结论：A、B、C 3家企业样品的相对分子质量与相对分子质量分布及加速试验稳定性较D企业样品有一定差距。1家企业的现行质量标准较低，亟待提高。拟定方法降低流动相盐浓度，减少对色谱柱的损害，操作简便，检验成本低，重复性良好，方法耐用性符合要求，结果准确可靠，可用于那屈肝素钙注射液相对分子质量与相对分子质量分布的测定。     

高效分子排阻色谱法分析注射用头孢噻吩钠中的高分子杂质

目的：建立高效分子排阻色谱（HPSEC）法测定注射用头孢噻吩钠中的高分子杂质。方法：采用TSK-GEL G2000SWXL凝胶色谱柱（30cm×7．8mm×5μm）,流动相为0．002mol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH7．0）-乙腈（95：5）,流速为0．6mL·min^-1,检测波长235nm。结果：头孢噻吩和高分子杂质的线性范围分别为1．01～25．7μg·mL^-1（r=1．000）和0．0252～7．00g·L^-1（r=1．000）;头孢噻吩的检测限为0．5ng,头孢噻吩高分子杂质的定量限以头孢噻吩计为1．4ng;对照溶液重复进样（n=6）的精密度（RSD）为0．23％,样品测定（n=6）的重复性（RSD）为0．70％。结论：本方法操作简单,专属性强,灵敏度高。