高密度脂蛋白（HDL）拮抗内毒素的实验研究

目的：通过对高密度脂蛋白（HDL）体内外生物学活性实验研究，探讨HDL对内毒素的中和作用。方法：应用勤和生物传感器技术检测HDL与LPS的结合活性，采用ELISA方法检测HDL对LPS攻击小鼠的保护作用等试验来阐明HDL对LPS的中和效果。结果：应用亲和生物传感器亲和力检测，结果发现HDL与lipidA之间具有很高的．木和能力；HDL可以显抑制LPS刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF—α，并成量效关系；在小鼠体内使用剂量为120mg／kg的HDL可以明显保护致死剂量LPS攻击小鼠，保护率达到70％。结论：HDL在体内外与LPS结合，从而抑制了LPS的生物学活性，被认为是一种内毒素清除剂，对防治脓毒症具有临床指导意义，     

青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究

目的 革兰阴性菌细胞外膜成分脂多糖／内毒素（Ljpopolysaccharide／endotoxin）和存在于革兰阴性、阳性细菌的基因组DNA（CpGDNA）是导致细菌脓毒症发生的主要致炎因子：但细菌脓毒症仍缺乏有效的治疗措施。本课题旨在明确青蒿素防治细菌脓毒症的作用及机制，为青蒿素的老药新用提供实验依据？方法①体外培养小鼠RAW264，7细胞，观察青蒿素对CpGDNA、LPS和热灭活大肠杆菌诱导RAW264．7细胞释放TNF—α和IL-6的抑制作用；②建立小鼠脓毒症模型，观察青蒿素对CpGDNA、LPS和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用；     

栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过6年的应用评估,其疗效已被否定,迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子,进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷,通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用;RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响;ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用;观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用,并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调,细胞因子TNF-α的产生减少）;在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平;对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。     

诃子抗CPG ODN组分的分离及活性评价

目的：从诃子中分离制备具有拮抗CPGODN作用的活性组分。方法：应用水提、离子色谱技术等方法，从诃子中分离制备具有拮抗CPGODN活性的组分；并应用生物传感器技术，对所得到的组分进行与CPGODN结合活性的筛选；观察其对CPGODN刺激的小鼠RAW264.7细胞释放炎症介质的抑制作用。结果：应用生物传感器技术筛选出与CPGODN结合活性最高的诃子作为研究对象，应用离子色谱技术从诃子中分离出3组分，其中有3个组分均具有一定的与Lipid A的结合活性，以第3组分与Lipid A的结合活性最强；并对CPGODN刺激的小鼠RAW264．7细胞释放TNF-α具有显著的抑制作用；结论：从诃子中分离出的第3组分具有显著的拮抗CPGODN活性。     

赤芍拮抗内毒素活性的实验研究

目的:提取分离中药赤芍中拮抗内毒素(LPS)的有效成分并进行药理学活性检测。方法:通过生物传感器,结合常规的中药分离技术,分离提取出赤芍拮抗LPS的有效成分,应用鲎实验和ELISA法检测该有效成分对LPS的中和作用。结果:赤芍中的有效成分与LPS具有较高的结合作用,该结合作用具有较强的中和LPS活性,在体外能够显著抑制由LPS介导小鼠RAW 2 6 4.7细胞释放TNF α。结论:以LPS为靶点,应用生物传感器技术,可快速、有效地提取分离赤芍中具有较强的中和LPS活性的有效成分。     

以lipid A为靶点应用生物传感器技术筛选抗炎中药

目的应用生物传感器跟踪检测技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗内毒素作用的中药，并对其进行活性物质含量排序。方法将lipid A包被于生物传感器的非衍生板，建立靶点，测定22种去鞣质后的中药水煎液与lipid A的亲和力；选择具有较高亲和力的药物与定量脂多糖（5ng／mL）于37℃混合孵育30min，再测定其与lipidA的亲和力，以评价药物水提液中活性物质的含量。结果22种中药均具有与lipidA较高的亲和力（大于100RU）；侧柏叶、地骨皮、石榴皮等16种中药中与lipidA特异性结合的活性物质含量较高。结论应用生物传感器技术建立的筛选平台快速而客观，筛选出的16种中药均含有能与lipidA发生特异性结合作用的非鞣质类活性物质。     

中药赤芍抗内毒素活性的实验观察

目的：通过提取中药赤芍中抗内毒素（LPS）活性的有效成分,进行药理学观察,探讨赤芍抗内毒素活性的内在机制。方法：将常规中药化学分离技术与生物传感器相结合,分离赤芍抗LPS的有效成分,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和鲎试验法检测该有效成分对LPS的中和作用。结果：赤芍中抗LPS的有效成分具有较强的中和LPS的活性．该有效成分能够在体外实验中显著抑制由LPS介导的培养细胞系释放TNF-α。结论：中药赤芍中存在高活性的抗LPS有效成分．该成分可以LPS为靶点,应用常规中药化学分离技术与生物传感器相结合的方法进行快速、有效地提取分离。     

栀子苷拮抗内毒素的实验研究

目的 研究栀子苷的抗内毒素/脂多糖生物学活性。方法 应用生物传感器技术检测栀子苷与LPS活性中心Lipid A的结合活性、动态比浊法鲎试验检测栀子苷(0、2.5、5.0、10.0 mg/L)对LPS(0.1 μg/L)的中和活性、ELISA法检测栀子苷(0、25、50、100 mg/L)对LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞释放细胞因子的影响,进而观察栀子苷(0、10、20、40 mg/kg)对致死剂量LPS攻击模型小鼠的保护作用。结果 栀子苷与Lipid A具有结合活性,量效关系明显;栀子苷(2.5、5.0、10.0 mg/L)在体外对LPS(0.1 μg/L)具有显著的直接中和作用(P<0.01);栀子苷在50-100 mg/L浓度水平能够显著抑制LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞释放TNF-α(P<0.01);40 mg/kg的栀子苷对脓毒症模型小鼠具有显著的保护作用(P<0.01)。结论 栀子苷可能通过与Lipid A结合中和LPS的活性,抑制LPS介导的细胞活化,减少细胞因子释放,进而保护脓毒症模型小鼠。     

姜黄素衍生物体外抗炎及防治小鼠脓毒症的研究

目的探讨姜黄素衍生物FM0901体外抗炎作用,及其对大肠埃希菌引起的细菌脓毒症小鼠的保护作用。方法①用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞,ELISA法测定FM0901对细胞分泌TNF-α、IL-6水平的变化硝酸还原酶法测定NO的变化;②小鼠尾静脉注射大肠杆菌建立脓毒血症模型,考察FM0901对小鼠血清中TNF-α、IL-6及NO的影响,观察小鼠的活动状态及生存率。结果①FM0901显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的TNF-α、IL-6和NO释放,并具有明显的量效关系;②FM0901降低脓毒血症小鼠血清中TNF-α、IL-6和NO的含量,改善小鼠的状态,低剂量组提高大肠埃希菌感染小鼠的生存率。结论FM0901抑制RAW264.7细胞炎症介质释放,减轻脓毒症小鼠的炎症反应,提高其生存率。     

青蒿琥酯通过降低TLR4和TLR9mRNA表达保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用，探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型，观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响；采用ELISA法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清TNF-α及内毒素水平的影响；采用小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7细胞从离体水平观察青蒿琥酯对不同致炎因子LPS、CpG ODN和热灭活大肠杆菌诱导细胞因子TNF-α和IL-6释放的影响；采用生物传感器技术、流式细胞技术及RT-PCR分别研究青蒿琥酯与LPS和cpG ODN的直接结合、对细胞表面结合及内吞及TLR4和TLR9mRNA表达的影响。结果：青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠具有明显保护作用，可明显降低血清TNF-α及内毒素水平；青蒿琥酯在体外不能直接中和或结合LPS和cpGODN，但可抑制抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的促炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放；青蒿琥酯对细胞内吞或表面结合没有影响，但可抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的RAW264．7细胞TLR4和TLR9 mRNA高表达。结论：青蒿琥酯可通过降低血清TNF-α释放及内毒素水平保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠，其作用可能与降低TLR4和TLR9 mRNA表达有关。     

青蒿素对CpG DNA攻击小鼠保护作用的实验研究

目的:观察青蒿素对CpGDNA攻击小鼠的保护作用及对CpGDNA诱导小鼠单核 巨噬细胞RAW2 6 4.7释放促炎细胞因子的影响。方法:清洁级昆明小鼠6 0只,随机分为CpGDNA、青蒿素(2 0 0mg·kg-1)、CpGDNA 青蒿素(5 0、10 0、2 0 0mg·kg-1)及生理盐水对照组,每组动物10只。CpGDNA及CpGDNA 青蒿素组小鼠提前1h腹腔注射D 氨基半乳糖溶液(6 0 0mg·kg-1)进行敏化。CpGDNA组尾静脉给予4mg·kg-1的CpGDNA敏化;青蒿素组,灌胃给予2 0 0mg·kg-1的青蒿素;CpGDNA 青蒿素组在给予不同剂量的青蒿素后,立即给予4 0mg·kg-1的CpGDNA敏化;生理盐水对照组仅给予相同量的生理盐水。体外培养小鼠巨噬细胞RAW2 6 4.7,加入不同浓度的青蒿素,观察其对CpGDNA刺激细胞分泌TNF α及IL 6的拮抗作用及其量效、时效关系。结果:青蒿素可降低CpGDNA引起的小鼠死亡,死亡率由80 %降至10 % (P <0 .0 1)。青蒿素在2 0g·ml-1时显著抑制CpGDNA诱导RAW2 6 4.7释放TNF α和IL 6 (P <0 .0 1)。提前给予青蒿素,其拮抗CpGDNA诱导细胞因子释放的作用非常显著(P <0 .0 1) ,但青蒿素在刺激物CpGDNA给予后再加入,也能观察到显著拮抗作用(P <0 .0 5 )。结论:青蒿素对CpGDNA攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制CpGDNA诱导的促炎细胞因子释放     

白花蛇舌草化学成分及其抗结肠癌活性初探

目的 分析中药白花蛇舌草40%乙酸乙酯部位的化学成分,并初步探讨其抗结肠癌活性。方法 采用中压制备色谱、制备型高效液相色谱对白花蛇舌草40%乙酸乙酯部位进行分离纯化;根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。采用MTT法检测化合物对结肠癌细胞HT-29和SW480的生长抑制作用。结果 共分离得到9个化合物,分别鉴定为齐墩果酸（1）、白桦脂酸（2）、熊果酸（3）、山柰酚（4）、槲皮素（5）、大黄素（6）、大黄酸（7）、芦荟大黄素（8）、大黄酚（9）,其中化合物1,2（半数抑制浓度≥100.4,26.5μmol/L）对HT-29和SW480细胞的生长抑制作用较强。结论 化合物2,6,7,8为首次从该植物中分离得到,化合物1,2为白花蛇舌草的抗结肠癌活性成分。     

秦岭大黄化学成分研究

首次从秦岭大黄（RheumqinlingenseY．K．Yang，D．K．Zhanget．J．K．Wu）根和根茎的乙醇提取物中分离并鉴定了6个化合物，即大黄酚（chrysophanol）、大黄素甲醚（physcion）、大黄素（emodin）、芦荟大黄素（aloe－emodin）、大黄酸（rhein）、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖甙（chrysophanol－8－O-β-D－glucopyranoside）：利用GC－MS－DS对其挥发性成分进行了分析，鉴定出27个化合物。     

金黄色葡萄球菌细胞壁可溶性肽聚糖的分离纯化和鉴定

目的：从金黄色葡萄球菌中提取纯化可溶性肽聚糖并鉴定其活性。方法：采用小剂量青霉素作用金黄色葡萄球菌（ATCC25923），诱导合成可溶性肽聚糖（PGN）粗品，经Sephadex G-100凝胶层析进一步分离纯化；采用SLP试剂盒对纯化的可溶性PGN定性，ELISA法检测纯化的可溶性PGN对小鼠RAW264．7细胞的活化作用。结果：分离纯化的可溶性PGN经SLP试剂检测阳性，该可溶性PGN可刺激RAW264．7细胞释放TNF-α，并具有明显的量效关系。结论：采用青霉素诱导结合凝胶层析技术可从金黄色葡萄球菌获取纯度及生物学活性较高的可溶性PGN。     

人高密度脂蛋白受体CLA-1上调剂9179D的分离、结构鉴定和活性研究

目的从微生物代谢产物中分离能够上调人高密度脂蛋白受体（CLA-1）表达的新型活性化合物,并对其活性进行研究。方法应用已建立的CLA-1表达上调剂的模型,对阳性菌株链霉菌104A-9179发酵产物的活性成分进行分离纯化,获得活性化合物9179D;通过理化性质、质谱、紫外和核磁等波谱学数据进行结构鉴定;利用RT-PCR和Western Blot方法检测9179D对HepG2中CLA-1表达的影响;利用流式细胞仪检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7结合DiI-HDL的影响。结果从链霉菌104A-9179发酵产物中得到活性化合物9179D,并确定了其结构为曲占柳菌素D（Trichostatin D）;9179D在CLA-1上调剂模型上的EC₅₀为46.02μmol/L,表达活性最高值为934%;9179D能增加HepG2中CLA-1的mRNA和蛋白表达;增加RAW264.7对DiI-HDL的结合。结论得到一个微生物来源的具有强的上调CLA-1的表达活性的化合物-9179D（曲古柳菌素D）,属首次报道。     

中药羊蹄的化学成分研究

目的对羊蹄（Rumexjaponicus）进行化学成分研究。方法采用色谱技术进行分离纯化,通过波谱分析技术鉴定化合物的结构。结果从羊蹄提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为大黄酚（1）、大黄素（2）、6一羟基芦荟大黄素（3）、大黄素甲醚（4）、白藜芦醇（5）。结论化合物3、5为首次从该植物中分离得到。     

生物传感器技术在分离赤芍抗内毒素单体成分中的研究

目的 :利用生物传感技术从赤芍中分离抗内毒素单体成分。方法 :以LipidA包被生物传感器样品池表面 ,建立筛选靶点 ,并以传感器上回收物的紫外扫描结果为参照 ,通过跟踪测定硅胶柱层析、高效液相色谱 (HPLC)流出组分与LipidA的结合能力 ,分离抗内毒素的单体成分 ,并应用鲎试剂法测定单体成分与体外脂多糖 (LPS)的中和作用。结果 :从生物传感器回收到可与LipidA结合的组分 ,其紫外吸收峰分别为194、215、275nm波长。通过HPLC分离出与LipidA具有较高结合活性的单体成分为1 ,2 ,3 ,4 ,6—O—五没食子酰—β—D—葡萄糖 (PGG ) ,浓度为8、4、2μg/ml的PGG分别能够中和0 1EU/mlLPS活性的68 8 %、43 7 %、31 4 %。结论 :利用生物传感器技术 ,以LipidA为靶点分离赤芍抗内毒素单体成分是可行的 ,且具有高效、快速、准确等优点 ,适合于大规模地从中草药中分离抗内毒素的单体成分。     

1-苯甲酰基-4-(4-氯苄基)哌嗪衍生物的设计、合成以及抗炎活性研究

目的:以1-苯甲酰基-4-(4-氯苄基)哌嗪为先导化合物,经进一步的结构优化,期望获得一类抗炎活性更好的多靶点抑制剂。方法:以取代苯甲酸为起始原料,经取代、酰化反应合成18个目标化合物。测定所有化合物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-6的抑制作用,并对活性较好的化合物进行分子对接。结果:所有化合物均经¹H NMR,¹³C NMR,HRMS确定其结构,化合物3d,8k对TNF-α的分泌具有较好的抑制活性,化合物3b,3d对IL-6的分泌具有较好的抑制活性。结论:化合物3d对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6具有较好的抑制活性,有进一步研究的价值。     

板蓝根多糖对NF—κB活性的作用

观察板蓝板多糖对核因子-κB（muclear factor Kappa B,NF-κB）核结合活性的影响。人内毒素（LPS）刺激J744.a.1小鼠的巨噬细胞株,可诱生出较高的NF-κB与DNA结合活性,分别采用LPS预刺激、LPS后刺激和LPS与板蓝根多糖同时刺激等3种方法对其处理,分离核蛋白,进行NF-κB与DNA结合活性测定,结果用光密度扫描定量分析。板蓝根多糖在3种情况下均可降低LPS刺激所致的NF-κB与DNA的结合活性升高。     

黑鱼鱼胆抗炎活性成分研究

目的研究黑鱼鱼胆的抗炎成分活性。方法采用萃取、硅胶柱层析等方法进行分离纯化,然后通过氢谱、碳谱对分离出的单体进行结构鉴定,利用小鼠脾淋巴细胞增殖实验和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)实验评价黑鱼鱼胆抗炎活性成分。结果利用活性追踪的方法分离得到化合物牛黄胆酸钠(C1)和化合物牛黄鹅去氧胆酸钠(C2),且两个化合物对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖实验的细胞相对活力分别为65.9%±11.7%、60.5%±9.4%,与模型组相比差异均具有极显著性(P<0.01);对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的量分别为(16.4±1.9)、(15.5±1.7)μmol·L~(-1),与模型组相比差异均具有极显著性(P<0.01)。结论黑鱼鱼胆中牛黄胆酸钠和牛黄鹅去氧胆酸钠具有一定的抗炎活性且对正常脾淋巴细胞和巨噬细胞无毒性作用。