雌二醇对大鼠肝星状细胞TGF-β1、CTGF表达的影响

目的 探讨雌二醇对肝星状细胞(HSC)的影响及其可能的作用途径.方法 培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,加药后72小时,噻唑蓝(MTT)法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析其对HSC的转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α-SMA蛋白的表达的影响.结果 MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖;RT-PCR分析雌二醇干预组HSC TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的表达明显下降;免疫细胞化学分析雌二醇干预组HSC α-SMA蛋白表达明显下降;并且都随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性(P＜0.05).结论 雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为:①可以抑制HSC的增殖、活化;②抑制了致纤维化生长因子TGF-β1及其下游信号CTGFmRNA表达.     

酒精对HBV转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制

目的探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制。方法20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)和普通小鼠对照组(control Wtmice),以生理盐水灌胃。连续处理10wk后检测各组小鼠血清ALT、AST水平,肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平及TGF-β1、CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果酒精可升高转基因小鼠血清ALT、AST水平,诱发其肝脏病理损伤,但纤维化不明显;肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7、CTGF mRNA及TGF-β1、CTGF、α-SMA蛋白表达增加。结论酒精和HBV对肝损伤协同作用的机制可能与TGF-β1、Smad3、CTGF、α-SMA表达增加以及TGF-β1/Smads通路信号分子表达比例失调有关。     

PDTC抑制TGF-β1对肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞的诱导作用

目的:通过核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),观察NF-κB在转化生长因子(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)及向肌成纤维细胞(MF)分化中的作用。方法:一次性气管内滴注博莱霉素-A5复制肺纤维化模型,取肺组织培养肺成纤维细胞,细胞分为Sham组、TGF-β1组、PDTC TGF-β1组和PDTC组。采用免疫细胞化学技术、流式细胞术检测PDTC对TGF-β1诱导的成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CTGF的影响。结果:TGF-β1组和Sham组比较,肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA明显增加,PDTC TGF-β1组肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA低于TGF-β1组,单独PDTC对肺成纤维细胞无影响。结论:NF-κB促进TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF及肺成纤维细胞向MF分化。     

氟伐他汀对转化生长因子β_1诱导的系膜细胞结缔组织生长因子和Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨氟伐他汀对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的影响。方法选择对数生长期的MCs,分成对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1加不同浓度氟伐他汀(Flu)诱导组,采用MTT法检测MCs增殖,RT-PCR和Westernblot方法检测MCsCTGF表达,ELISA法检测ColⅣ表达。结果5μg.L-1TGF-β1能明显促进MCs的增殖及CTGF和ColⅣ的表达。Flu可呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导下的系膜细胞增殖和CTGF及ColⅣ的表达:1μmol.L-1Flu即能明显抑制MCs的增殖及CTGFmRNA和ColⅣ蛋白的表达,10μmol.L-1Flu即能明显抑制MCsCTGF蛋白的表达。同时,还观察到外源性CTGF呈浓度依赖性地促进MCsColⅣ的表达,2.5μg.L-1CTGF即可明显促进ColⅣ蛋白的表达。结论氟伐他汀可抑制MCs增殖和CTGF介导的ColⅣ表达。     

汉防己甲素对TGF-β1诱导L929细胞活化和分泌FN、α-SMA的影响

目的 研究汉防己甲素对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的L929细胞活化和分泌纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的作用.方法 体外培养L929细胞,分别以TGF-β1和汉防己甲素作用,观察细胞形态变化,测定FN及α-SMA mRNA、蛋白质表达水平.结果 TGF-β1诱导L929细胞72 h,能显著上调FN及α-SMA mRNA、蛋白质表达;加入汉防己甲素后能显著抑制FN和α-SMA的表达.结论 汉防己甲素能够抑制TGF-β1诱导L929细胞活化和分泌细胞外基质的作用.     

高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA和CTGF表达的影响

目的 探讨高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA反映肝星状细胞HSC活化)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 将52只SD雄性大鼠随机分为糖尿病肝纤维化组、正常血糖肝纤维化组与正常对照组.通过链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导糖尿病,后用四氯化碳诱导肝纤维化.肝组织HE染色检测病理改变.免疫组化法检测肝组织α-SMA、CTGT蛋白表达.结果 高血糖肝纤维化组α-SMA(灰度值142.5±3.67)和CTGF(灰度值144.2±5.01)表达水平较正常血糖肝纤维化组(α-SMA灰度值158.9±2.18,CTGF灰度值157.7±6.80)显著升高(P＜0.05).结论 高血糖可通过诱导肝脏α-SMA、CTGF表达,加重大鼠肝纤维化的程度,促进肝纤维化的形成.其机制与促进肝星状细胞的增殖活化及细胞外基质的合成分泌等有关.     

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。     

枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响

目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

西红花酸在AngⅡ诱导的大鼠肺成纤维细胞中的作用

目的:通过观察西红花酸(CRT)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肺成纤维细胞(LFB)增殖及转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ERK1/2和P-ERK1/2基因蛋白水平的影响,探讨其抗肺纤维化的作用机制.方法:酶消化法提取原代LFB,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR法相对定量检测TGF-β1和COL-Ⅰ mRNA表达,Western Blot法检测α-SMA、ERK1/2和P-ERK1/2蛋白的表达.结果:10-7、10-6 mol· L-1西红花酸可显著减少AngⅡ诱导的LFB细胞增殖,降低TGF-β1和COL-Ⅰ mRNA的表达,降低α-SMA和P-ERK1/2的蛋白表达.结论:西红花酸可显著减少AngⅡ诱导的LFB细胞增殖,并呈剂量依赖关系,其作用机制可能与调节TGF-β1-ERK1/2信号通路有关.     

三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞TGF-β_1、CTGF基因表达和蛋白分泌的影响

目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达和蛋白分泌的影响,为临床上应用PNS延缓肾衰竭的进展提供理论依据。方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清。应用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株(HK-2)。应用ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;W estern B lot方法检测CTGF的蛋白表达;RT-PCR方法检测TGF-β1、CTGFmRNA表达。结果10%尿毒血清组与正常对照组相比,TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量均增高(P<0.01),而PNS 400~800mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的TGF-β1基因表达(P<0.01),200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清诱导的TGF-β1蛋白分泌(P<0.01);200~800 mg.L-1可恢复尿毒血清所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌(P<0.01)。结论在体外实验中,PNS可在一定程度上降低尿毒血清诱导的HK-2细胞TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量,减少细胞外基质聚集,从而延缓人肾小管-间质纤维化的进展,有望成为一种能有效延缓肾纤维化进展的中药。     

银杏叶提取物对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响。方法大鼠气管内一次性滴注博来霉素制备肺纤维化模型,原代培养大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组、GBE 25,50,100 mg/L组,共培养24 h,采用免疫细胞化学法和流式细胞技术检测GBE对各组细胞表达CTGF和α-SMA的影响。结果与对照组比较,50,100 mg/L组细胞表达CTGF和α-SMA依次降低,各组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取物能部分抑制大鼠肺成纤维细胞的表型转化。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

盐酸吡格列酮对肾小球系膜细胞megsin基因表达和α-SMA、TGF-β1合成的影响

目的 研究盐酸吡格列酮对培养的人肾小球系膜细胞(hMC)megsin基因表达及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)合成的影响.方法 培养hMC,设计并合成针对megsin基因编码区的siRNA双链,经原位杂交方法筛选出有效的序列,采用siRNA专用脂质体RNA-mate将siRNA转染至hMC,同时设盐酸吡格列酮组(1、5、10μmol/L三种浓度)和正常对照组.MTT方法检测细胞增殖,免疫组化方法检测α-SMA、TGF-β1的合成,原位杂交法检测细胞megsin mRNA表达.结果 不同浓度盐酸吡格列酮可以抑制hMC megsin基因mRNA的表达,48 h抑制效果最强.megsin siRNA能够阻抑hMC细胞megsin基因表达.结论 盐酸吡格列酮可以抑制hMC megsin基因mRNA的表达,但对体外培养的hMC增值无明显影响,对α-SMA、TGF-β1合成无明显影响.     

Effect of CTGF siRNA plasmid on renal interstitial fibrosis in mice with UUO

目的 利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响.方法 制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达.结果 转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05).结论 经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略.     

咖啡因对乙醛诱导的HSC-T6中TGF-β1,CTGF信号转导通路的影响

目的探讨咖啡因(caffeine)对乙醛诱导的大鼠肝星状细胞系(Hepatic Stellate Cell-T6,HSC-T6)中转化生长因子-β1(Trans-forming Growth Factor-β1,TGF-β1),结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)信号转导通路的影响。方法实验设正常组(常规培养),模型组及腺苷受体(Adenosine Receptor,AR)调节剂干预组。分别给予caffeine(4 mmol.L-1)[1-2],腺苷A2A受体拮抗剂ZM241385(1μmol.L-1)[3],腺苷A2A受体激动剂CGS21680(1μmol.L-1)[3],caffeine+CGS21680,ZM241385+CGS21680与HSC-T6共同培养,1 h后加入终浓度200μmol.L-1的乙醛刺激(每12 h补充1次),继续培养48 h。采用免疫细胞化学法检测HSC-T6中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,RT-PCR法检测TGF-β1和CTGF mRNA水平,Western blot方法检测各组HSC-T6中CTGF蛋白表达。结果与模型组比较,caffeine及ZM241385均显著降低HSC-T6中α-SMA,TGF-β1和CTGF的表达,而caffeine及ZM241385合用CGS21680上述作用有所逆转。结论 Caffeine能够显著降低乙醛诱导的HSC-T6活化,并且显著抑制HSC-T6中TGF-β1和CTGF的表达水平,其机制可能与拮抗腺苷A2A受体介导的信号通路有关。     

小白菊内酯对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响

目的探讨小白菊内酯(PNT)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响。方法选择12周龄健康SD大鼠12只,组织块法体外培养大鼠肺成纤维细胞,免疫细胞化学染色,观察不同浓度PNT对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。结果 TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,表达α-SMA增强(P<0.05),20μmol/L的PNT部分抑制TGF-β1的诱导作用(P<0.05);50μmol/L的PNT可完全抑制TGF-β1的诱导作用。结论 PNT有抑制TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化的作用。     

银杏叶提取物对肝星状细胞TGF-β_1,CTGF及细胞外基质表达的影响

目的:研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子(TCF)-β1、结缔组织生长因子(CTCF) mRNA表达及细胞外基质分泌的影响。方法:用不同浓度(0,1,10,100,500 mg·L-1)的银杏叶提取物处理 HSC-T6 24 h及48 h后,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测各组细胞及空白对照组中TGF—β1,CTGF mRNA的表达;放射免疫法分析上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量;MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响。结果:银杏叶提取物10,100,500 mg·L-1能明显抑制 TGF-β1和CTGF mRNA的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量 (P<0．01或P<0．05),在一定范围内呈随剂量增加及时间的延长,抑制效率增加;并可抑制肝星状细胞的增殖,影响HSC-T6的细胞周期,使细胞周期阻滞于G1期。结论:银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6的增殖,降低其细胞因子基因表达及细胞外基质的分泌。     

CTGF siRNA质粒对UUO小鼠肾脏间质纤维化的影响

目的利用单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化模型,采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达,观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响。方法制备UUO模型及活体CTGF基因转染;应用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测CTGF及α-SMA蛋白的表达;半定量RT-PCR检测α-SMA mRNA的表达。结果转染CTGF-siRNA质粒的UUO小鼠CTGF及α-SMA的基因表达明显下降(P<0.05)。结论经小鼠尾静脉注射CTGF siRNA质粒能显著抑制小鼠肾CTGF和α-SMA基因表达并能有效抑制小鼠肾脏间质纤维化,提示CTGF siRNA有潜力成为防治肾脏间质纤维化的一种新策略。