液相色谱-质谱联用技术在体外药物代谢物筛查中的应用

高效液相色谱与质谱联用技术已是现代药物发现中药物代谢产物筛查和鉴定最强大的分析手段,可以从品种繁多的样品中得到丰富的信息。本文关注这些技术在体外代谢研究中的应用,尤其是在筛查和鉴定生物转化形成的化学稳定代谢产物或反应性代谢产物方面的应用。为满足指定检测任务需审慎考虑选择合适的检测仪器,在代谢产物筛查中飞行时间质谱和静电场轨道阱质谱检测效率明显高于其他类型质谱。     

液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中药根碱代谢物

目的研究药根碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法健康大鼠尾静脉注射12 mg·kg^-1药根碱，收集0～72 h的尿样，尿样经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，经液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱(LC-ESI/ITMSⁿ)分析鉴定其中的代谢物。代谢物的结构鉴定主要依据各代谢物与原药的一级质谱电离规律和二级或三级质谱裂解规律间的关联性。结果在大鼠尿样中检测到7种I相代谢产物(如原药的脱氢、脱甲基、羟基化代谢物)及11种II相代谢产物(如甲基化轭合物和葡糖醛酸轭合物)。结论本方法用于大鼠尿样中药根碱的代谢物研究不仅操作简单、快速，而且灵敏度高、专属性强。     

反应性代谢产物的研究进展

大部分药物经体内代谢转化为无活性产物排出体外,部分药物经药物代谢酶转化为活性代谢产物和反应性代谢产物,其中反应性代谢产物可与肝细胞内大分子共价结合,通过不同的机制造成药物诱导的器官损伤。鉴别这些反应性代谢产物对于设计候选新药的毒性控制以及临床用药非常重要,本综述概述了反应性代谢产物的分类、其引起的药物毒性以及目前高通量搜索和鉴定反应性代谢产物等相关实验进展,讨论了处理反应性代谢产物的策略及本领域未来的发展。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的白术内酯I在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的 采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物，并探讨其可能的代谢途径。方法 SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后，收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相，梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量，鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果 共鉴定出大鼠体内代谢产物30个，其中血浆样品中5个，尿液样品中17个，粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论 首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径，为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考，此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。     

乙烷硒啉的临床药物动力学和代谢转化特点研究

目的研究肿瘤患者口服乙烷硒啉(1,2-[bis(1,2Benzisoselenazolone-3(2H)-ketone)]ethane,BBSKE)后的药物动力学及体内代谢转化特征。方法3例肿瘤患者单次口服给药剂量为600mg.d-1,采集各个时间点的血浆样品及尿样,用液相色谱-串联四极杆质谱(LC/ESI-MS/MS)联用技术测定血浆样品中BBSKE的含量,用液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI/MSn)联用技术对尿及血浆中的代谢产物进行分析鉴定。结果得到了BBSKE在血浆中的药时曲线图及主要的药物动力学参数。在尿中共发现了6个BBSKE的氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化代谢产物,在血浆中共发现了2个BBSKE的氧化、葡萄糖醛酸化代谢产物。结论BBSKE的血药浓度较低,表观分布容积大。氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化反应是BBSKE在人体内的3种重要代谢途径。     

HPLC-ESI/ITMSn法分析大鼠体内4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3，3-二苯基)丙酯盐酸盐及其主要代谢物

目的研究新化合物4-甲基哌嗪-1-二硫代甲酸-(3-氰基-3，3-二苯基)丙酯盐酸盐(TM208)在大鼠体内的主要代谢产物。方法大鼠ig TM208 500 mg·kg^-1后，收集粪样、尿样和血样，用液相色谱-电喷雾离子阱质谱法测定。根据TM208及其代谢产物的色谱保留时间和电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMSⁿ )电离规律及生物体内药物代谢转化规律，推导代谢物的结构。结果在粪样中发现8种I相代谢产物，在尿样和血样中发现5种I相代谢产物，未发现II相代谢产物。结论本法操作简便、快速、灵敏度高、专属性强，是一种研究TM208体内代谢产物的有效方法。     

基于UPLC/Q-TOF-MS/MS对雷公藤次碱在小鼠体内代谢的分析

目的:研究雷公藤次碱在小鼠体内的生物转化规律。方法:以昆明山海棠根皮提取物中雷公藤次碱为研究对象,借助UPLC/Q-TOF-MS/MS高分辨质谱系统,基于多重质量亏损技术,结合MetabolitePilot代谢物分析鉴定软件,系统分析雷公藤次碱在小鼠体内的代谢产物。结果:雷公藤次碱在小鼠体内经一系列生物转化后,生成包括氧化、N-乙酰化、脱C₂H₂O基团等在内的多种代谢产物。结论:本方法能鉴定雷公藤次碱在小鼠体内的生物转化规律,为中药昆明山海棠的临床使用提供重要参考。     

Q TRAP在药物代谢研究中的应用

三重四极杆质谱仪在定量分析方面较优,而离子阱质谱仪则在定性分析方面较优。Q TRAP质谱仪将三重四极杆质谱仪和离子阱质谱仪的功能以一种新的方式结合在一起,既保留了串联四极杆质谱仪的优点,如母离子扫描、中性丢失扫描、选择反应监测的功能,又克服了传统3D离子阱质谱仪诸如低质量截止点(1/3效应)等缺点,是一台集定性与定量功能于一体的质谱仪。该文介绍了QTRAP四极杆-线性离子阱质谱仪的基本原理和分析策略,并简述其在药物代谢研究方面的应用。     

高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法研究大鼠尿内毛果芸香碱代谢产物

首次应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法鉴定了大鼠灌胃给予毛果芸香碱0.2mg后0-8小时内尿中的代谢物。4只大鼠给药毛果芸香碱盐酸盐,收集给药后尿液,固相萃取柱富集、然后应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法在线进行多反应监测,进而对尿中微量的代谢物进行了质谱解析。分别定性为毛果芸香碱的葡萄糖醛酸结合物、毛果芸香酸和毛果芸香酸的葡萄糖醛酸结合物。而且发现了各种代谢产物及原形药物在大鼠体内均有构型变化。     

LC/MS分析大鼠体内氧化苦参碱及其主要代谢物LC/MS分析大鼠体内氧化苦参碱及其主要代谢物

目的研究氧化苦参碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法以氧化苦参碱和苦参碱为对象优化液相色谱/电喷雾离子阱质谱(LC/ESI-ITMSⁿ)实验条件，分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和二级质谱裂解规律，作为氧化苦参碱大鼠体内代谢物结构分析的依据。健康大鼠腹腔肌注40 mg·kg^-1氧化苦参碱，收集0~24 h的尿样，尿样中的代谢物经C₁₈小柱进行富集与纯化后，在优化的LC/ESI-ITMSⁿ条件下进样分析。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMSⁿ)电离规律。结果在大鼠尿样中有原药及其6种I相氧化及还原代谢产物，且主要代谢物为苦参碱。未发现II相代谢物。结论本法不仅操作简便、快速，而且灵敏度高、专属性强。该分析技术是研究药物代谢最有效的方法之一。     

小克银汉霉菌对萘普生的微生物转化

目的：通过分离和鉴定萘普生由真菌转化生成的代谢产物,研究微生物转化和哺乳动物体内药物代谢之间的相似性．方法：选用3种小克银汉霉菌对萘普生进行微生物转化研究．采用液相色谱—质谱联用法检测代谢产物,并通过半制备高效液相色谱法分离出主要代谢物,经质谱和核磁共振光谱确证其结构．结果：萘普生被转化成去甲萘普生和去甲萘普生硫酸结合物,这两种代谢产物都是已知的哺乳动物代谢产物．其中去甲萘普生硫酸结合物是首次在微生物转化样品中发现．结论：小克银汉霉菌对萘普生的转化结果与哺乳动物的体内代谢有某些相似性,有可能成为一种新的体外模型进行药物代谢研究,用于预测和制备可能的药物代谢产物．     

罂粟碱的体内与体外代谢物研究

利用HPLC-MSⁿ检测罂粟碱及其在大鼠体内(大鼠粪便)和体外(肝微粒体, 肠道菌)代谢物。体内与体外的代谢物经C₁₈小柱进行富集和纯化后, 直接采用优化的HPLC-ESI/ITMSⁿ方法对样品进样分析。以罂粟碱标准品为对象优化高效液相色谱/电喷雾离子阱质谱(HPLC-ESI/ITMSⁿ )实验条件, 分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律, 作为罂粟碱大鼠体内与体外代谢物结构分析的依据。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱HPLC-ESI/ITMSⁿ电离规律。在大鼠粪便中有原药及其8种代谢产物。体外代谢物检测到原药的脱甲基和羟基化。     

桂枝茯苓胶囊在原发性痛经模型大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢产物研究

目的:研究桂枝茯苓胶囊在原发性痛经模型大鼠体内的代谢产物。方法:基于超高效液相色谱-线性离子阱-静电轨道阱串联质谱联用(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS)方法,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,质谱采用电喷雾(ESI)离子源,以正负离子模式采集多级质谱碎片信息,对大鼠灌服桂枝茯苓胶囊混悬液后的血浆、胆汁、尿液和粪便进行分析,利用质量亏损过滤(MDF)技术进行代谢产物鉴定分析。结果:共鉴定出8个原形及50个代谢产物,在体内主要发生Ⅰ相代谢反应(脱羧、水解、脱羟基和脱水等)及Ⅱ相代谢反应(甲基化、乙酰化、硫酸化及葡萄糖醛酸化等)。结论:采用LC-MS方法鉴定了原发性痛经模型大鼠体内桂枝茯苓胶囊代谢产物,为该复方制剂的药物代谢动力学研究提供依据。     

20(R)-25-OCH_3-PPD在大鼠体内代谢产物的鉴定

目的鉴定抗肿瘤药物20(R)-25-OCH3-PPD在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠单次灌胃给予药物20(R)-25-OCH3-PPD(40 mg·kg-1),收集粪便、尿液及血浆。采用LC-MS/MS法,以多反应监测(MRM)和二级全扫描质谱(Full Scan MS2)方式,对大鼠粪便、尿液及血浆中代谢产物进行分析和鉴定。结果在粪中检测到原形药物及8个代谢物,在血浆中检测到原形药物和1个去甲基代谢物,在尿液中没有检测到相关代谢物。结论 20(R)-25-OCH3-PPD在大鼠体内代谢广泛。     

电喷雾离子阱质谱法直接测定几种药物的葡萄糖苷酸型代谢物

为研究药物代谢产物的质谱规律,用电喷雾离子阱质谱法对溶液中乙氧苯柳胺、SFZ-47羧基衍生物、5-羟基普罗帕酮及普罗帕酮的β-D-葡萄糖苷酸型代谢物的结构进行了测定。结果表明,它们的(-)ESI-MS均生成[M-H]^-准分子离子,(-)ESI-MS²和(-)ESI-MS³则分别生成m/z175和m/z113碎片离子。提示这些共同特征可用于LC/MS法直接分析药物的葡萄糖苷酸型代谢物。     

高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用对人体内西替利嗪的代谢产物考察

目的：鉴定人体内盐酸西替利嗪的代谢产物。方法：本试验采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱（ESI／MS^n，electrospray ion trap mass spectrometry）联用技术对2名中国健康志愿受试者口服20mg盐酸西替利嗪胶囊后尿中代谢物进行了初步鉴定。尿样经液-液萃取和C18固相萃取小柱处理后，先用HPLC色谱法将主要代谢物分离，然后将其导入ESI离子源，选择可能代谢物的质荷比进行选择离子扫描（selected ion monitoring，SIM），确定存在的代谢物，再对各自的母离子分别进行全扫描二级（full scan MS^2）质谱分析，以其生成的离子来鉴定主要代谢物。结果：未发现除原形药外存在其他可能的代谢物。结论：西替利嗪自人体内经肾脏主要以原形排泄。     

药物代谢及其多态性在药物依赖性中的作用

<正> 药物作用的性质和程度取决于体内药物浓度和作用部位的反应性,因此,药物依赖性的产生可能与药物浓度和作用部位反应性的改变有关。目前有关药物依赖性机理的研究,主要从(1)药代动力学的改变和(2)药效动力学的改变二方面进行。本文主要从药代动力学角度介绍有关方面的进展及展望。体内药物浓度与该药的药代动力学,特别和药物的代谢消除密切相关。绝大多数药物,包括依赖性药物,均通过体内药物代谢酶的作用生成具有活性或毒性或无活性的代谢物而改变药物的效应。近年对肝微粒体细胞色素P_(450)酶系进行了广泛深入的研究。P_(450)酶基因工作表     

高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱分析水苏碱及其大鼠体内代谢物

目的鉴定水苏碱在大鼠体内的代谢物。方法应用高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(HPLC-ESI/MSⁿ)技术研究水苏碱的一级质谱电离规律、二级质谱裂解规律及其色谱保留，以此作为水苏碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据；再将健康大鼠空腹灌胃25 mg·kg^-1水苏碱，收集0～24 h的尿样，经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，应用HPLC-ESI/MS分析尿样中水苏碱代谢物。结果在大鼠尿样中发现了母药及其N-去甲基、氧化脱氢、环氧化等6种I相代谢产物及两种环氧化物的甘氨酸轭合II相代谢产物。结论HPLC-ESI/MS法灵敏度高，快速，定性能力强，适合于水苏碱大鼠体内代谢物的分析。     

肝细胞代谢模型及色谱技术在药物代谢研究中的应用

药物代谢即药物的生物转化过程,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物的检测具有一定的困难。体外代谢法在短时间内可以得到大量的代谢产物,且代谢条件可控,代谢体系比较“干净”,代谢物易于分离、提取,有利于代谢途径研究及代谢产物结构的确定等,因而,体外代谢法具有突出的优越性。     

利用电喷雾质谱仪快速鉴定二咖啡酰喹宁酸的取代位置

目的确定二咖啡酰喹宁酸的取代位置。方法利用电喷雾质谱仪ESI-MS（n）的四极杆离子阱多级质谱技术，根据质谱裂解规律，归属咖啡酰喹宁酸衍生物主要的离子峰。结果不同取代的二咖啡酰喹宁酸在电喷雾质谱四极杆离子阱中具有一定的特点和规律。结论在三级负离子质谱中，脱掉两个咖啡酰基的碎片离子强度很大，为基峰时，可以判断衍生物没有4位取代。3，5-取代和4，5-取代可以通过比较P值（一级质谱中的基峰峰高与二级质谱中的基峰峰高之比）来判断，当3，4位有取代基时其P值大于4，5位有取代基时的P值。