露蜂房纯化蛋白对白血病细胞抑制作用的研究

目的 研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ) 对白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法 采用NVP-Ⅱ在体外作用于人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60及急性髓系白血病患者(AML)骨髓单个核细胞(BMMNC),MTT比色法检测NVP-Ⅱ对白血病细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微变化,并用Hochest33258荧光染色法和TdT缺口末端标记(TUNEL)技术分析细胞凋亡.结果 0.019 19 mg/L、0.191 9 mg/L NVP-Ⅱ组能明显抑制白血病细胞的生长,使白血病细胞在透射电镜和荧光显微镜下呈现典型的凋亡形态特征,而且TUNEL检测见凋亡细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水对照组比较,阳性细胞明显增多(P＜0.05).结论 NVP-Ⅱ体外对白血病细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导其凋亡.     

露蜂房纯化蛋白对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用

目的研究中药露蜂房纯化蛋白（nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ）对人早幼粒白血病HL-60细胞的生长抑制作用。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于HL-60细胞,经光镜、电镜、荧光显微镜观察形态学变化,TdT缺口末端标记（TUNEL）技术检测NVP-Ⅱ对HL-60细胞增殖、凋亡的影响。结果①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞数量减少,胞质内颗粒增多。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质靠核膜边集,呈块状或半月形;有的细胞核固缩、断裂为质膜包绕的碎块,有凋亡小体出现。③荧光显微镜下观察到,NVP-Ⅱ处理组HL-60细胞核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰,呈现典型的凋亡形态特征。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多（P〈0.05）。结论NVP-Ⅱ可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡。     

DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

土槿乙酸联合9-顺式维甲酸促进白血病细胞凋亡的机制研究

目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸 (PLAB) 联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸 (9-cis RA) 促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。 方法 应用透射电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳分析 H-60 细胞凋亡,RT-PCR 检测 HL-60 细胞 Cyclin D1 和 CDK4 mRNA 表达。 结果HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现 DNA Ladder,Cyclin D1 及 CDK4 mRNA 的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大 (P＜0.05)。结论PLAB 联合 9-cis RA 抑制 HL-60 细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关。     

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。     

醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。     

环孢菌素A诱导人白血病HL-60细胞株凋亡机制的研究

目的:观察环抱菌素A对人白血病HL-60细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法:采用瑞氏染色、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对HL-60细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响HL-60细胞凋亡时bcl-2基因表达的改变情况。结果:20mg/L环孢菌素A作用6h可诱导HL-60细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪显示凋亡峰。细胞周期分析发现,环孢菌素A可使HL-60细胞生长阻滞于G_0-G_1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组(P<0.01)。环孢菌素A处理组的bcl-2蛋白阳性率低于对照组(P<0.01)。结论:环孢菌素A可诱导HL-60细胞株凋亡,其机制可能是通过下调bcl-2基因表达。     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.     

外源性褪黑激素对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的 观察褪黑激素对生精细胞凋亡的影响。方法 HE染色、TUNEL测定(核快红复染)。结果 HE染色下睾丸间质细胞的面积随褪黑激素的增多而减小，与睾酮的浓度变化相一致。TUNEL阳性细胞随褪黑激素的增加有增多的趋势，但超过一定量后(100ug)，不再增多。20～30d的处理组呈现与30～40d的处理组不同的结果。结论 外源性褪黑激素具有促进生精细胞凋亡的作用。这种作用与其对睾酮的抑制作用不相一致。     

芹菜素对雄性大鼠睾丸间质细胞作用机制的研究

目的 研究芹菜素对大鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)的作用机制。方法 应用Perooll不连续密度梯度法分离培养大鼠睾丸问质细胞，观察芹菜素对间质细胞睾酮生成的影响。应用MTT方法和流式细胞术观察芹菜素对间质细胞增殖及凋亡的影响。结果 芹菜素作用于大鼠睾丸间质细胞时，以剂量依赖方式使原代培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌量明显减少。MTT及FCM分析显示芹菜素能促进间质细胞凋亡及抑制增殖。结论 芹菜素能不同程度抑制大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮并促进睾丸间质细胞凋亡及抑制其增殖。     

芹菜素对大鼠生精细胞凋亡作用的影响

目的研究芹菜素对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法应用percoll不连续密度梯度分离培养大鼠睾丸生精细胞,应用流式细胞术观察芹菜素对生精细胞凋亡的影响。结果芹菜素作用于大鼠生精细胞,FCM分析显示芹菜素能促进生精细胞凋亡,并呈剂量依赖方式。结论芹菜素能呈剂量依赖式促进睾丸生精细胞凋亡。     

Th17细胞在白癜风发病中的作用研究进展

在某些特定细胞因子的作用下,CD4+T细胞分化为Th17细胞,Th17细胞可参与多种疾病的发病。在白癜风发病过程中,调节性T细胞(Treg细胞)数量减少、功能缺陷,Th17细胞数量增多,功能活跃。Th17细胞在树突细胞的协助下参与发病过程。Th17细胞主要分泌白介素17(IL-17),还分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-21、IL-22和IL-26等细胞因子参与白癜风发病,导致黑色素细胞生成减少,黑色素细胞萎缩、消失,最终形成白癜风。     

Ultrastructural observation on influence of gossypol on the hormone-secreting cells of pituitary-testis axis of rats

Summary After 8 weeks of administration of gossypol (30 mg/kg/day for 6 days/week) to Wistar rats, the following changes in gonadotropic hormon (GTH) cells were observed by electron microscopic examination: slight to medium enlargement of rough endoplasmic reticulum and more apparent development of Golgi complexes in the cytoplasm. These findings suggested an enhanced secretory function. Moreover, increase of ring-shaped mitochondria, increase of lipid droplets and lysosomes, enlargement of smooth endoplasmic reticula and appearance of intracytoplasmic gaps in Sertoli cells were noted. However, no significant changes could be seen in Leydig cells.     

一种测定动物细胞平均沉降速率的新方法

通过构建细胞沉降过程的理想化模型，提出了一种简易的细胞沉降速率测定方法。标准颗粒沉降实验结果验证了这种方法的准确性。利用该方法测定杂交瘤细胞的沉降速率，定量描述了杂交瘤活细胞与死细胞之间的沉降速率差异，活细胞的沉降速率(15．5mm／h)大约是死细胞(9．36mm／h)的1．67倍，约是细胞碎片(1．46mm／h)的10倍；把该方法用于不同种类不同培养时期的脐血造血细胞，发现它们具有不同的沉降速率。这些数据将为细胞连续灌注培养过程的细胞截留研究提供依据。     

Th17细胞、调节性T细胞、Th1细胞平衡失调与AS病情活动度的关系

目的探讨效应CD4+T细胞分泌的Th1细胞、Th17细胞及调节性T细胞(Treg)免疫平衡失调与强直性脊柱炎(AS)患者强直性脊柱炎疾病活动评分(ASDAS)的关系。方法采用流式细胞仪测定60例强直性脊柱炎患者(AS组)及60例健康体检者(对照组)外周血CD4+Th17、CD4+Th1及CD4+CD25+Treg细胞的比率。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素(IL)6、IL-8、IL-17、IL-23以及肿瘤细胞坏死因子α(TNF-α)等水平。分析不同AS患者Th1、Th17以及Treg细胞免疫失衡情况及与ASDAS相关性。结果 AS组患者CD4+Th17细胞水平高于对照组,而CD4+Th1及CD4+CD25+Treg细胞水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AS组IL-6、IL-17、IL-23及TNF-α蛋白水平高于对照组(P<0.05)。与病情稳定(ASDAS<1.3)患者、病情中度活动患者(1.3≤ASDAS<2.1)相比,重度患者(ASDAS≥2.1)CD4+Th17细胞水平、IL-6、IL-17、IL-23及TNF-α蛋白水平显著升高(P<0.05),而CD4+Th1、CD4+CD25+Treg细胞显著下降(P<0.05)。经Pearson相关分析可知,ASDAS与IL-6(r=0.412,P=0.000)、IL-17(r=0.396,P=0.000)、IL-23(r=0.384,P=0.000)及TNF-α(r=0.318,P=0.004)呈正相关。结论 AS患者中存在Th1细胞、Th17细胞及Treg细胞免疫平衡失调,且与AS患者ASDAS程度具有密切的关系,可为AS临床防治提供指导。     

Research progress on the treatment of spinal cord injury with cellular transplantation

Spinal cord injury(SCI) is a severe trauma to the central nervous system(CNS). This article reviews recent advances in cellular transplantation to treat SCI. Transplanted cells can supply new neurons to replace injured ones, promote regeneration of axons and myelin sheath, modulate the inflammatory response, and thus promote recovery from traumatic injury of the CNS. Cellular transplantation is a promising potential method for the treatment of SCI.     

壳多糖对兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响

目的：研究壳多糖对体外培养的兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响。方法：将不同质量浓度（０．２,２,２０,２００,２０００μｇ／ｍｌ）的壳多糖溶液分别加入兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞培养液中,培养１２,２４,４８ｈ后用ＭＴＴ经色法测定细胞数。结果：平滑肌细胞数随着壳多糖质量浓度和作用时间的增加而减少;内皮细胞数随着其质量浓度和作用时间的增加,在一定范围内相应增加。结论：壳多糖能抑制兔主动脉平滑肌