豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化

目的：对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。 方法：提取豚草花粉粗提液,SDS-PAGE分离其蛋白组份并测定分子量,Western-blotting鉴定其变应原组份,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。 结果：豚草花粉有30条蛋白带,其中主要条带有9条,70kDa、40kDa为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为40 kDa的变应原主要分布在Ⅰ峰。 结论：豚草花粉粗提液中主要变应原为 70 kDa、40kDa蛋白组份。     

BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE

目的 对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定.方法 通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份.采用Westem blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度.采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较.结果 短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条.Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr.BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,最适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-HRP)为1:1000.在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较.检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%.结论 本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好.     

王棕花粉变应原的分析与鉴定

目的对我国南方常见的棕榈科植物王棕花粉(Roystonea regia pollen)变应原蛋白进行分离、分析与鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供基础。方法取常规方法制备的王棕花粉浸出液,采用SDS-PAGE分离王棕花粉蛋白质组分,测定其相对分子量,同时用10例对王棕花粉过敏的患者血清作Western-blot鉴定其变应原及主要变应原成分。结果SDS-PAGE显示王棕花粉有10条可辨蛋白带,其中主要条带有8条,分别为100000、66000、38000、36000、29000、30000、24000、16000和14000Mr,Western-blot结果表明,10例王棕花粉过敏患者血清全部呈阳性反应,有66000、24000、16000和14000Mr共4条致敏条带,其中分子量在16000和14000Mr的蛋白为主要变应原。结论王棕花粉变应原的分析与鉴定为临床王棕花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

悬铃木属花粉的纯化及免疫活性分析

目的对悬铃木属花粉变应原进行初步纯化并对其主要成分进行免疫学活性分析。方法悬铃木属花粉变应原粗制浸液经过凝胶过滤层析，收集主要蛋白质，SDS-PAGE检测各段蛋白质分子量，并用免疫印记法分析7例悬铃木属花粉过敏的支气管哮喘患者血清。结果悬铃木属花粉变应原粗制液经层析柱洗脱得两个洗脱峰，第一峰及第二峰升段富含蛋白，而第二峰降段蛋白含量甚微，收集各段进行SDS—PAGE。出现6条蛋白区带，分子量分别为7、50、35、39、22和16kd。第一峰主要含22-71kd蛋白质，峰2升段以14-16kd之蛋白质为主。对7例花粉过敏的支气管哮喘患者血清免疫印记分析可见4条sIgG反应带，蛋白分子量为50、39、22和16kd，病人血清结合百分比分别为100％、28．57％、57．14％和14．29％。结论悬铃木属花粉变应原含有6种主要蛋白成分，第一峰的50、39和22kd的蛋白质为主要致敏组分，第二峰升段的16kd蛋白质为次要致原。     

刺苋花粉特异性变应原成分的分析研究

目的：分析刺苋花粉的抗原成分以及刺苋花粉特异性变应原组分,为刺苋花粉变应原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取刺苋花粉浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分离,以16例刺苋花粉过敏的病人血清为探针,进行免疫印迹（Western blotting）,检测刺苋花粉浸出液的致敏组分.结果：SDS-PAGE显示可辨蛋白条带有11条,分子量在15～80 kD之间,其中主带有9条,分子量依次为18 kD、24 kD、29 kD、35 kD、39 kD、40 kD、42 kD、62 kD、78kD.Western blotting结果表明,16份刺苋花粉过敏患者的血清全部呈阳性反应,浸出液中共有4条致敏条带,其中主要致敏蛋白的分子量是78 kD和40 kD.结论：刺苋花粉78 kD和40 kD的变应原为主要特异性变应原.     

湖北省荆门地区气传花粉与过敏性哮喘的相关性

目的调查荆门地区年空气中气传花粉的种属、数量、分布及飘散规律,探讨气传花粉与过敏性哮喘相关性。方法2008年3月～2009年2月在城区选取一调查点进行空气中的花粉取样,同时对荆门城区130例过敏性哮喘患者进行标准花粉抗原皮肤敏感试验。并对患者发病季节进行调查。结果荆门市城区全年均有气传花粉飘散并出现2次花粉飘散高峰期,分别在3～4月和8～10月,荆门市主要致敏气传花粉,春季为松属、柏科等;秋季为蒿属、豚草属等。结论蒿属、豚草属等气传花粉是荆门地区过敏性哮喘的主要致敏花粉。     

短穗鱼尾葵及长穗鱼尾葵花粉过敏原的分析、鉴定与纯化

目的对长穗鱼尾葵和短穗鱼尾葵花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取这两种花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分并测定其分子量。收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果长穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有18条,12000和14000 Mr为长穗鱼尾葵花粉特异性变应原;短穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有9条,26000、12000和14000 Mr为短穗鱼尾葵花粉特异性变应原,其中14000 Mr为主要变应原;通过离子交换层析方法纯化出长穗鱼尾葵花粉相对分子质量为12000和14000的变应原主要分布在Ⅱ峰中,短穗鱼尾葵花粉相对分子质量为14000的主要变应原分布在Ⅴ峰和Ⅵ峰中。结论对长穗和短穗鱼尾葵花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床鱼尾葵花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

西宁地区花粉症患者致敏花粉和季节分析

目的：调查了解西宁地区致敏花粉症病人的发病季节和致敏花粉的种类;方法：采用花粉变应原皮肤敏感试验;结果：通过对患者进行花粉抗原皮肤试验及发病季节观察,发现西宁地区花粉过敏患者的发病高峰期为4月－6月和8月－11月,102例花粉抗原皮试阳性者中,蒿属花粉阳性者占总数的69．60％,“＋＋”以上者蒿属花粉占59．80％,夏秋花粉占30．39％,早春花粉占19．60％,晚春花粉占13．74％;结论：西宁地区花粉症中蒿属花粉为主要致敏花粉,依次为夏秋花粉、早春花粉、晚春花粉为本地区花粉症患者的诊断、治疗和预防提供依据。     

武汉地区豚草花粉分布及其对过敏性哮喘患者气道反应性的影响

目的 研究武汉城区豚草花粉的飘散规律并探讨其对豚草花粉过敏的哮喘患者气道反应性的影响.方法 2003年11月～2004年10月,在武汉城区选点,采用重力沉积法,进行了豚草花粉的调查;同时对560例豚草花粉过敏的哮喘患者进行发病季节调查,其中对在6～11月份发病的531例患者进行了气道反应性测定,并采用酶联免疫法检测血清总IgE(TIgE)水平.结果 武汉城区豚草花粉飘散的高峰期为7～10月份;豚草花粉过敏患者的发病季节与豚草花粉播散高峰期相吻合;气道反应性与血清TIgE水平变化相一致,并与豚草花粉浓度存在对应关系.结论 豚草花粉是武汉城区秋季的主要致敏花粉之一,调查结果对豚草花粉过敏性疾病的防治具有重要的临床指导意义.     

呼和浩特地区气传与致敏花粉的探讨

本文通过两年的空气暴片与镜检计数,连续三天的24小时内每隔3小时暴片调查,常见的22种花粉浸液含氮量的测定及对70例花份症患晋进行了生物学测定,认为呼和浩特地区主要的致敏花粉是蒿属。     

Durham花粉监测与实时自动花粉监测结果相关性分析

目的探讨Durham采样器和自动实时采样器2种方法采集大气花粉量的优缺点以及二者监测结果的相关性。方法在相同的高度和地点设置Durhum花粉采集仪和KH3000-1自动花粉采集仪,监测相同时间段的大气花粉浓度,分析2种方法采集的大气花粉浓度以及二者监测结果的相关性。结果 Durham采样器操作比较繁复,需要镜检人员有丰富的植物学专业知识,优点是可以分辨花粉的种属,对于了解一个地区不同种属花粉的飞散时段有重要意义;KH3000-1采样器实现了实时花粉计数,可高效地采集花粉,减少了显微镜计数的复杂工作,节省大量时间和体力。缺点是不能分辨花粉的种类。结论 2种监测仪监测到的花粉开始时间和高峰时间一致,但KH3000-1采样器易受花粉颗粒大小和气象因素的影响,结果可出现异常增高或减少。     

纯化花粉变应原免疫治疗的疗效观察

目的:观察纯化花粉(黄蒿、葎草、藜草花粉)变应原特异性免疫治疗(SIT)的疗效.方法:采取凝胶过滤方法分别提纯上述花粉变应原.采取随机、对照方法将102例确诊为季节性黄蒿、葎草、藜草花粉过敏性哮喘患者分为观察组(A组)及对照组(B组),应用纯化花粉变应原(PPA)及粗花粉变应原(CPA)分别对两组患者进行季节前SIT,疗程3 mo.临床疗效判断标准为显效、好转及无效.临床不良反应观察包括局部或全身皮疹、哮喘加重等.实验观察指标为两组SIT前后的皮肤试验(ID)风团直径、特异性IgE(sIgE)、A值均值.结果进行组内和组间比较.结果:A组SIT总有效率90%(47/52),B组78%(39/50),前者明显高于后者(P<0.05);A组仅3例轻度副反应,B组有13例(26%)出现副反应;A组及B组SIT后ID风团直径、sIgE, A值均值都较SIT前明显下降(P<0.01);A组SIT后上述指标下降程度较B组更明显(P<0.05).结论:PPA及CPA的SIT疗效均较满意,但用PPA进行SIT的安全性和疗效更好.     

石嘴山地区夏秋季致敏花粉的调查研究

目的调查石嘴山地区夏秋季致敏花粉的种类、数量和飘散规律,并进行花粉致敏性测定,为花粉症的诊断和防治提供依据。方法采用叶氏采样器重力沉降法设立花粉曝片点,结合皮肤点刺试验（SPT）和特异性IgE检测结果调查夏秋季致敏花粉。结果全年出现2个花粉高峰期,3~5月份为木本花粉高峰期,7~9月份为草本植物花粉高峰期,共收集花粉24 906粒,鉴定出7种花粉,石嘴山地区蒿属花粉总量最多,占29.53%;其次为藜属,苋属,豚草。根据花粉变应原SPT及特异性IgE结果显示,蒿属花粉阳性率最高,具有很强的致敏性;夏秋季花粉的致敏率高于春季花粉。结论蒿花粉属已成为本地区夏秋季主要致敏花粉,是花粉症的主要病因之一。     

二球悬铃木花粉主要变应原蛋白编码基因克隆的制备

目的:构建含二球悬铃木花粉主要变应原蛋白编码基因的重组质粒。方法:用PCR扩增二球悬铃木花粉主要变应原编码基因的cDNA序列,将扩增的目的片段用双酶切法与质粒pET32a连接,CaCl2法转入工程菌DH5α制备基因克隆。碱裂解法提取质粒DNA,测序鉴定目的片段存在。结果:构建了含二球悬铃木花粉主要变应原编码基因的重组质粒。结论:用天然二球悬铃木花粉可成功地制备含有其主要变应原编码基因的重组质粒,用于变应原蛋白诱导表达。     

花粉症的发病特点与大气花粉种属和浓度的关系

目的 调查分析花粉症患者的发病特点以及发病时间与大气花粉浓度的相关关系.方法分析14 426例变应性鼻炎患者皮肤点刺试验结果和患者发病特征,监测每年3至9月北京地区花粉浓度,分析花粉症患者发病时间与花粉播散浓度的相关关系.结果① 14 426例皮肤点刺试验阳性的变应性鼻炎患者中花粉症患者8 127例,平均占55.9%;②花粉症患者患病年龄主要集中在15~18岁以及31~40岁.③ 花粉症患者每年的发病时间与花粉浓度有明显相关.结论 花粉变应原是引起变应性鼻炎的重要变应原;花粉症患者每年的发病时间与花粉浓度显著相关,这样的相关关系为花粉症的发病预报奠定基础.     

普通口罩预防气传花粉效果观察

目的探讨普通口罩对气传花粉的干预作用,为花粉症患者的户外预防提供依据。方法采用全国统一标准的暴片法。对取样器无遮蔽暴片为对照组,将取样器用口罩遮蔽暴片为预防组,并分二期、分组进行。一期纱布口罩组分别为6层、12层、16层;二期医用口罩组分别为一次性口罩和N95口罩、4层纱布。分别观察各组口罩干预气传花粉的价值。结果纱布口罩组6层、12层、16层与对照组比较(7·39±0·86、4·18±0·42、2·86±0·47、13·07±1·94),差异均有显著性统计学意义(P<0·01);4层与对照组比较(分别为32·50±5·29、40·18±5·57),差异有显著性统计学意义(P<0·01)。医用口罩组一次性口罩、N95口罩与对照组比较(分别为5·79±1·53、2·79±0·87、40·18±5·57),差异均有显著性统计学意义(P<0·01)。结论戴普通口罩能干预气传花粉的吸入,建议花粉症患者在室外积极戴口罩进行预防。     

藜草花粉变应原免疫活性分析

目的:分析藜草花粉变应原成分及其变应原性、免疫原性.方法:用Sephacryl S-200HR葡聚糖凝胶层析法分离、纯化藜草花粉变应原,通过十二烷硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电脉法(SDS-PAGE)测定变应原各组分的分子质量;应用免疫印迹法检测各组分蛋白质与藜草花粉过敏性哮喘患者血清中sIgG和sIgE的反应率.结果:藜草花粉经电泳后得到12条蛋白质区带,分子质量依次为92,63.1,61,52,45,43,39.7,38.9,34,31.6,28.4和18.5～12 ku;免疫印迹可见4条sIgE反应带,蛋白分子质量依次为92,34,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是70%,50%,80%和90%;与血清sIgG结合的反应带有8条,蛋白分子质量为92,61,52,45,43,39.7,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是80%,40%,10%,20%,80%,10%,10%和100%.结论:藜草花粉变应原主要含12种蛋白质成分,其中分子质量为18.5～12 ku和92 ku的蛋白质变应原活性及免疫原活性均很强,是主要变应原成分;分子质量在34和31.6 ku的蛋白质有较强的变应原性而无或仅有较弱的免疫原性;而分子质量为43,61,45,52和39.7 ku的蛋白质具有一定的免疫原性而无变应原性.     

重庆市南郊气传致敏花粉调查

目的 调查重庆市南郊空气中气传花粉的种属和散规律及与花粉症的相关性。方法 1999年10月1日－2000年9月30日期间，在重庆市南郊设暴片点，每天换片，并将优势致敏花粉对180例花粉症病人行皮肤敏感试验。结果 发现重庆南郊一年中空气中花粉高峰期在3月，占全年总数的52.87％，即春季花偻为本地区最优势，其主要气传花粉为：构属、松属、柏属，此三种春季花偻的总计占全年总数的72.95%。结论 重庆市南郊空气中致敏花粉以春季花粉为主，此特点与本季节的气温、降雨量及风力有关，而秋季气传花粉是花粉症重要致敏原。     

肉苁蓉花粉生活力测定研究

目的了解肉苁蓉花粉在自然条件下的寿命。方法采用花粉离体萌发法，对自然生长的肉苁蓉花粉生活力进行测定研究。结果肉苁蓉花粉萌发的最佳条件为初花期花粉，在恒温25℃，以0．6％琼脂 10％蔗糖 0．1％硼酸为离体培养基进行培养，有利于花粉的萌发和花粉管的生长；低温(4℃)条件下可进行短期的花粉贮藏，延长花粉的寿命。结论为采用肉苁蓉花粉进行优良种质资源的保存和人工育种工作提供了理论依据。     

A study on pollen allergens in China

Objective Allergic disease caused by airborne pollen is a major health problem in China. Intensive study on pollen allergens can be of great help for preventing and treating pollinosis. Four aspects of the study on pollen allergens in China including major allergic pollen in our country, analysis and purification of pollen allergen composition, recombinant pollen allergens and clinical application of pollen allergens are described in this paper.