重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、周期、凋亡的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、周期及凋亡的影响。方法 1. 将对数生长期的人肝癌细胞MHCC97-H,加入不同浓度的重楼皂苷Ⅰ和索拉菲尼,24h后CCK8法检测药物对细胞增殖的影响。2. 根据CCK8实验结果,选取相应浓度的重楼皂苷Ⅰ和索拉菲尼,作用于细胞24h,观察细胞周期及凋亡情况。结果 重楼皂苷Ⅰ及索拉非尼作用于人肝癌细胞MHCC97-H的IC50的浓度分别是5.7μg/mL、10μmol/mL。重楼皂苷Ⅰ及索拉菲尼均能抑制S期,将细胞阻滞于G0/G1期,能明显促进细胞凋亡,与空白对照组比较具有显著差异（P＜0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H具有明显的抑制增殖及促进凋亡的作用。     

索拉非尼对MHCC97-H 肝癌细胞增殖、 侵袭以及PRL-3 蛋白表达的影响研究

目的 探讨索拉非尼对体外培养MHCC97-H 肝癌细胞中肝再生磷酸酶3（PRL-3）表达水 平的影响,以及对肝癌细胞侵袭力的作用。方法 在24、48 及72 h 测定经不同浓度梯度索拉非尼处理 MHCC97-H 肝癌细胞增殖抑制率以筛选合适的干预浓度和时间。采用MHCC97-H 肝癌细胞培养传代, 用索拉非尼干预处理,瑞氏吉姆萨法染色观察形态学变化,MTT 法检测其增殖抑制率,Western blot 法检测 PRL-3 蛋白表达水平,Transwell 实验检测癌细胞侵袭力。结果 该实验索拉非尼体外最佳干预实验浓度和时 间分别为16 μmol/L 和48 h ;索拉非尼能诱导肝癌细胞株MHCC97-H 的凋亡,肝癌细胞增殖抑制率与时间 和剂量呈正相关。经索拉非尼作用后PRL-3 蛋白也出现不同程度下降,肝癌细胞侵袭能力明显下降。结论 索拉非尼能降低MHCC97-H 肝癌细胞株中PRL-3 蛋白表达水平,降低肿瘤细胞侵袭力,从而诱导肝癌细胞 凋亡;索拉非尼降低癌细胞的侵袭可能是通过下调PRL-3 蛋白进行。     

穿心莲内酯对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及其机制研究

【目的】观察穿心莲内酯(Andro)对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及作用机制,探讨其体外抗肝癌作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Andro不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)及不同处理时间(24、48、72 h)对MHCC97H细胞增殖的影响;采用Annexin V—碘化丙啶(PI)双染法、Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测凋亡相关蛋白如Bax、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、裂解型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PAPR),周期相关蛋白如周期素B1(cyclin B1)、周期素依赖性激酶1(CDK1)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白如m TOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的表达。【结果】穿心莲内酯5、10、20、30、40、50μmol/L组24、48、72 h MHCC97H细胞增殖率下降,且随着Andro浓度、处理时间的增加而逐渐降低。Andro 25、50μmol/L组12、24、48 h MHCC97H细胞凋亡率均升高,呈浓度和时间依赖性。Andro 50μmol/L组48 h MHCC97H细胞发生G2/M期阻滞。与溶剂对照组比较,Andro 50μmol/L组中促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP表达升高(P0.05或P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.01),周期蛋白cyclin B1和CDK1表达及mTOR信号通路蛋白mTOR、p70S6K的磷酸化水平均下降(P0.05或P0.01或P0.001)。【结论】Andro可能通过调控MHCC97H细胞凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、Bcl-2及周期相关蛋白cyclin B1、CDK1的表达及抑制mTOR-p70S6K信号通路的激活,促进细胞凋亡及细胞周期阻滞,从而发挥体外抗肝癌作用。     

生长抑素类似物对人肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H的影响及可能机制.方法:MHCC97-H肿瘤组织种植于裸鼠肝脏建立肝癌动物模型27只,随机分为3组:阴性对照组和小、大剂量干预组,同等条件下饲养35d,记录动物模型生存期,死亡时质量;观察肝脏,肺脏病理改变;免疫组化方法检测肝脏肿瘤组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达变化.结果:奥曲肽干预组动物模型较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肝癌转移率下降(P＜0.05);干预组间对比未见统计学差异(P＞0.05);免疫组化显示干预组肝脏肿瘤细胞MMP-2表达较阴性对照组下调(P＜0.05);干预组组间比较未见统计学差异(P＞0.05).结论:奥曲肽可改善荷MHCC97-H细胞裸鼠肝癌模型生存质量,抑制MHCC97-H细胞肺转移,下调肿瘤组织MMP-2的表达是奥曲肽抑制MHCC97-H细胞侵袭转移的可能机制之一.     

雌激素通过调节AKT信号通路活性抑制肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭转移的作用及其相应机制。方法利用划痕试验检测雌激素对MHCC97H 肝癌细胞迁移能力的影响。Transwell小室法检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭能力的影响。利用Western blotting法检 测雌激素对MHCC97H肝癌细胞中MMP-2和MMP-9 表达水平的影响。检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞中AKT和p-AKT 蛋白表达水平的影响。结果雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭能力,随着浓度的升高抑制能力逐渐增 强,0.1 μmol/L和1 μmol/L浓度组MHCC97H肝癌细胞穿过基质胶到达小室底端的细胞数目分别为对照组的（68.99±15.74）% 和（34.28±8.17）%（P<0.05）。雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞中MMP-2和MMP-9的表达,当浓度为1 μmol/L时,差 异具有统计学意义（P<0.05）。雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞AKT的磷酸化水平,当浓度为1 μmol/L时,磷酸化水 平为对照组的（90±2）%（P<0.05）。结论雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭,这种作用可能部分与调节 AKT信号通路的活性进一步调节MMP-2和MMP-9的表达有关。然而,需要进一步的深入研究以证实这种作用关系。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

臭牡丹含药血清对人肝癌MHCC97-H细胞周期和凋亡的影响

目的观察臭牡丹含药血清对B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达及人肝癌MHCC97-H细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗肝癌的可能机制。方法 15%臭牡丹高、中、低剂量含药血清作用于MHCC97-H细胞,显微镜下观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果不同剂量臭牡丹含药血清作用于细胞后,细胞形态发生稀疏杂乱、折光性增强等改变;流式细胞术结果显示,随含药血清浓度的增加,细胞的凋亡比例和G2/M期细胞比例亦相应增加,S期细胞比例降低,中、高剂量组与模型组比较,差异显著(P0.05);Western blot法结果显示不同浓度臭牡丹含药血清干预下各组Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达降低(P0.01)。结论臭牡丹含药血清可以促进MHCC97-H肝癌细胞凋亡并阻止其细胞周期,机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白,影响Bax/Bcl-2比值有关。     

地尔硫卓通过下调钙激活氯离子通道抑制肝癌细胞增殖和运动

目的观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制。方 法采用不同浓度地尔硫卓（0、25、50、100、200、400 μmol/L）干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间（12、24、48 h）后,用MTT 法测定地尔硫卓对肝癌细胞增殖的影响,体外细胞划痕实验检测处理后肝癌细胞运动侵袭能力;通过RT-PCR和免疫细胞化学 检测地尔硫卓对肝癌细胞中TMEM16A mRNA和蛋白表达水平的影响。结果地尔硫卓能够有效抑制肝癌MHCC97H、7402 细胞的增殖和运动侵袭能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点（P<0.05）。其中,100 μmol/L浓度的地尔硫卓作用24 h对 MHCC97H肝癌细胞抑制较明显,TMEM16AmRNA和蛋白表达减少（P<0.05）,而50 μmol/L浓度的地尔硫卓作用48 h对7402 肝癌细胞抑制较明显,TMEM16AmRNA和蛋白表达减少（P<0.05）。结论地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞 侵袭,这种作用可能与其通过调节钙离子通道TMEM16A的mRNA和蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用有关。     

缺氧对HCT116肠癌细胞成纤维细胞生长因子21的调节作用

目的观察缺氧模拟物二氯化钴(CoCl_2)对人源HCT116肠癌细胞成纤维细胞生长因子21(FGF21)表达的影响。方法分别用0、50、100和200μmol/L的CoCl_2处理HCT116细胞24 h,同时用200μmol/L的CoCl_2处理HCT116细胞12、48 h,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中的FGF21 m RNA和蛋白的表达水平;分别用缺氧诱导因子抑制剂2ME2和YC-1,同时加入CoCl_2处理HCT116肠癌细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中的FGF21 mRNA;用抗氧化剂NAC和CoCl_2同时处理HCT116肠癌细胞24 h,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中的FGF21 mRNA和蛋白的表达量。结果随CoCl_2浓度增加和作用时间延长,HCT116细胞FGF21 m RNA相对表达量逐渐降低(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,CoCl_2组FGF21蛋白表达水平显著下降(P0.05)。缺氧诱导因子抑制剂处理后,HCT116细胞FGF21 m RNA相对表达量依然降低(P0.05)。抗氧化剂处理后,HCT116细胞FGF21 mRNA和蛋白相对表达量未出现明显降低(P0.05)。结论 CoCl_2对HCT116肠癌细胞FGF21的表达有抑制作用,该作用与缺氧诱导因子无关,而与氧化应激有关。     

LncRNA RNU12上调热休克蛋白72抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨46 ～ 50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制.方法 建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组.根据前期肝癌细胞Agilent Human lncRNA+ mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象.构建LncRNA RNU12-shRNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞.qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72) mRNA和蛋白的表达变化.利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响.采用荧光原位杂交(FISH)技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况.结果 温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46～50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能.HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低(P＜0.01);在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低(P＜0.05).转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36％、8.84％(P＜0.01).利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达.结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46 ～ 50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一.