聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体制备及体外实验研究

目的 制备聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体并研究其理化性质的表征参数和体外转染效率.方法 通过化学还原法制备聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体,用绿色荧光蛋白质粒(pAcGFP-N1)做报告基因,纳米基因载体可通过静电吸附的方式结合质粒DNA.用紫外分光光度计检测其吸收光谱,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),1％琼脂糖凝胶电泳检测该基因载体与质粒DNA的结合稳定性,CCK-8实验检测聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体及DNA-纳米金复合物对HEK293细胞的细胞毒性作用,通过荧光显微镜观察聚乙烯亚胺纳米基因载体介导pAcGFP-N1在体外培养的HEK293细胞中的表达,并分析其转染效率.结果 聚乙烯亚胺还原氯金酸可以得到带正电荷的纳米颗粒,呈单分散球形分布,其粒径为(12.3 ±3.3)nm.在pH =7.2时,Zeta电位为+(29.7±5.1)mV.1％琼脂糖凝胶电泳结果表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,质粒DNA可完全结合到纳米金表面.体外转染实验表明,聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体能介导pAcGFP-N1转染HEK293细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白,其转染效率可达25％.结论 聚乙烯亚胺修饰纳米金是一种新型非病毒基因载体,具有转染效率高、对细胞毒性小等优势.     

腹腔镜联合胆道镜行保胆取息肉86例治疗体会

目的探讨腹腔镜联合胆道镜行保胆取息肉术治疗胆囊息肉的手术方法及临床疗效。方法回顾分析86例胆囊息肉患者行腹腔镜联合胆道镜保胆取息肉术治疗的临床资料。结果 86例患者中,成功行微创保胆取息肉术80例,成功率93.2%,4例患者由于腹腔粘连,慢性炎症较重中转行开腹胆囊切除术,2例患者由于术中快速病检提示胆囊癌中转行胆囊癌根治切除术。术后住院时间1～5 d,平均4 d。全部病例术后复查彩超显示无息肉残留,切口愈合良好。随访76例,随访率95%,术后随访2个月～2年,2例病人胆囊息肉复发(2.5%);2例胆囊收缩功能不良(2.5%);1例胆漏(1.2%)。结论应用腹腔镜联合胆道镜保胆取息肉术治疗胆囊息肉创伤小、恢复快,是可行的、安全的,并且有效的保留了胆囊功能,复发率低。     

肝细胞癌综合治疗的现状和前景

肝细胞癌(HCC)在全世界有很高的发病率和病死率,因为HCC发生发展的复杂性,到目前为止,HCC的管理策略尚未完全统一。特别近十年来,HCC的治疗方案已发展为以外科手术为主的多学科综合治疗。除了肝切除和肝移植以外,消融治疗是另外一种根治性治疗方法,目前针对肿瘤直径3 cm且不能接受肝移植的肝癌患者,可作为一线治疗方案;肝动脉化疗栓塞术是针对不适合根治性治疗的中晚期肝癌的首选治疗方法,可联合消融治疗和化疗,显示出良好的疗效;对于诊断为晚期HCC或在其他治疗失败后进展到晚期HCC患者可以选择分子靶向治疗;细胞免疫治疗是HCC新型治疗方法,可以为进展性HCC患者带来有效的缓解率和生存获益。充分解析HCC各种治疗方法特点,制订个体化治疗方案,合理综合治疗HCC,以提高HCC整体疗效。     

先天性胆总管囊肿的诊断和治疗——附26例患者治疗结果分析

目的:探讨先天性胆总管囊肿的最佳诊疗措施。方法:应用本科室近七年来的诊治病案,进行回顾性总结结果:在所有就诊的患者中,以ERCP的诊断方法最佳,B超次之;先天性胆总管囊肿一旦诊断清楚,应尽早实施手术治疗。结论:先天性胆总管囊肿的诊断并不困难,关键是手术治疗应迅急。     

LncRNA RNU12上调热休克蛋白72抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨46 ～ 50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制.方法 建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组.根据前期肝癌细胞Agilent Human lncRNA+ mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象.构建LncRNA RNU12-shRNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞.qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72) mRNA和蛋白的表达变化.利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响.采用荧光原位杂交(FISH)技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况.结果 温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46～50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能.HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低(P＜0.01);在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低(P＜0.05).转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36％、8.84％(P＜0.01).利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达.结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46 ～ 50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一.     

多电极转换射频消融系统治疗肝脏肿瘤临床疗效分析

目的总结第三军医大学西南医院肝胆外科研究所临床使用多电极转换系统射频消融治疗肝脏肿瘤的临床经验,以评估其有效性和安全性。方法 2014年12月至2015年12月第三军医大学西南医院肝胆外科研究所在178次多电极转换系统射频消融治疗304个肿瘤,平均直径4.72cm(2.2~10.4cm);入组病人176例(134例男性和42例女性),平均年龄52.95岁(22~83岁),术后24 h或者48 h行肝脏超声造影或者肝脏增强CT检查,以评估是否完全消融和是否有并发症的发生。结果 304个肝脏肿瘤,多电极转换系统完全消融率为98.68%(300/304),一次性完全消融率为98.02%(298/304),176例肝脏肿瘤病人多电极转换系统总消融时间为2275min,平均消融时间为(13.04±5.39)min,比单电极射频消融时间节约56.24%;入组的176例病人无住院死亡情况,并发症发生率为2.35%。统计学单因素分析证实消融区最大直径与肿瘤类型、肿瘤数目、电极数量、肿瘤直径、起始功率和治疗时间均有关,与肿瘤直径和肿瘤数目呈正相关。结论多电极转换系统射频消融治疗肝脏肿瘤是一项安全、有效的操作方法,提高了射频消融治疗肝脏肿瘤一次性消融率,相对较短的射频消融时间降低了麻醉风险和手术风险。     

新型冠状病毒肺炎疫情下肝胆外科诊疗工作的挑战与对策

目前2019冠状病毒病(COVID-19)感染的疫情进入了一个严峻而复杂的局面。截至2020年2月23日,我国已有超过77038例新型冠状病毒感染确诊病例,COVID-19感染性强、潜伏期长、临床表现多样,给社会和经济带来极大影响,也严重影响着肝胆外科的日常医疗运行。针对肝胆外科的门诊及病房手术各个环节所需的医疗防护措施进行探讨和建议,以期减少在COVID-19疫情期间肝胆外科发生院内感染的风险。