缺氧缺血大鼠脑组织GLUT-1表达及地塞米松对其表达的影响

目的观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织的表达,了解地塞米松对GLUT-1表达的影响。方法7日龄新生SD大鼠,分为对照组、缺氧缺血组、地塞米松给药组0.5mg/(kg.d),于HIBD模型制成后0,6,12,24h及72h处死,取脑组织作免疫组化图像分析,观察各组GLUT-1蛋白水平的变化。结果HIBD大鼠脑内GLUT-1表达较对照组增高,24h达高峰(P<0.05);地塞米松给药组GLUT-1蛋白水平6h即达高峰,在72h内维持在较HIBD组更高的水平(P<0.05)。结论HIBD大鼠脑GLUT-1蛋白表达增加;地塞米松可迅速提高GLUT-1蛋白水平并使其维持在较HIBD组更高的水平。在HIBD后早期给予适当剂量的地塞米松可能具有脑保护作用。     

黄精对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠葡萄糖转运蛋白-4基因表达的影响

目的观察黄精水提液对2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗大鼠肌肉组织葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)基因表达的影响。方法采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养方法建立2型糖尿病胰岛素抵抗模型,将造模大鼠随机分为模型对照组和黄精高、中、低剂量治疗组(分别灌胃10.0、5.0、2.5 g·kg-1·d-1),另选10只为正常对照组。灌胃8周后,空腹取材,反转录-聚合酶链反应法检测肌肉组织GLUT-4基因mRNA水平。结果与正常对照组相比,模型对照组及黄精高、中、低剂量治疗组大鼠GLUT-4基因mRNA表达减少,空腹血糖(FPG)显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,黄精高、中、低剂量治疗组FPG均降低,其中以中、高剂量治疗组降低显著,差异有统计学意义(P<0.01);黄精高、中、低剂量治疗组GLUT-4基因mRNA表达均增高,其中以中、高剂量治疗组增高显著,差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄精水提液具有增强T2DM胰岛素抵抗大鼠GLUT-4基因表达,从而降低血糖的作用。     

TRPV1在炎症性肠病大鼠结肠黏膜表达及其与肥大细胞相关性研究

目的:探讨炎症性肠病(IBD)大鼠模型肠黏膜TRPV1表达和肥大细胞变化,以及二者在IBD发病机制中的作用。方法:雄性SD大鼠用Morris法制备炎症性肠病模型,免疫组化法检测大鼠结肠黏膜TRPV1蛋白表达,RT-PCR检测TRPV1 mRNA表达,并设正常对照组。结果:正常组肠黏膜无或弱阳性TRPV1表达,IBD组肠黏膜TRPV1 mRNA和蛋白表达较正常组增强,肥大细胞数显著增多(P<0.01)。TRPV1蛋白及mRNA水平与肥大细胞数量之间呈正相关(r1=0.528,r2=0.62,P<0.01)。结论:IBD发生发展与TRPV1过度表达及肥大细胞数量变化密切相关。     

老龄小鼠肠短链脂肪酸对肠屏障功能的影响

目的探讨肠内短链脂肪酸(SCFAs)水平对老龄小鼠肠屏障功能的影响及其机制。方法老龄小鼠随机分为禁食和正常进食组,以不同月龄(6、10和14月龄)成年小鼠为对照。采用高效液相色谱法检测小鼠肠内容物中SCFAs含量,鲎试验法检测血浆内毒素,改良酶法检测血浆D-乳酸水平,逆转录-聚合酶链反应检测小肠黏膜细胞钠葡萄糖共转运载体-1(SGLT-1)mRNA的表达。结果成年小鼠SCFAs水平并不随月龄增加而降低,但老龄小鼠的SCFAs水平明显低于成年小鼠(P值均<0.05),禁食组小鼠SCFAs水平较正常饮食组虽有下降,但差异无统计学意义(P值均>0.05)。老龄小鼠的血浆内毒素和D-乳酸水平均明显高于成年小鼠(P值均<0.05),而肠黏膜细胞上SGLT-1 mRNA表达水平明显低于成年小鼠(P<0.05)。结论老龄小鼠肠内容物SCFAs水平下降预示肠屏障功能下降,内毒素和D-乳酸易位入血增加,其机制与肠道内低水平SCFA降低肠黏膜细胞的正常功能有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对炎症性肠病大鼠肠黏膜的保护作用

目的探索儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对炎症性肠病（IBD）模型大鼠肠黏膜的保护作用及机制。方法将72只健康SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,药物阳性对照组,大、小剂量（100、50mg／kg）EGCG组及EGCG预处理组,每组12只,以三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠制作大鼠IBD模型。灌肠用药2周后,评价各组大鼠肠黏膜病理组织学表现及评分;应用免疫组织化学法和半定量逆转录（RT）＊PCR法分别从蛋白、mRNA水平检测各组肠黏膜细胞环氧合酶（COX）-2表达水平的变化。结果不同剂量EGCG灌肠均能不同程度改善IBD模型大鼠肠黏膜病理组织学征象,其中模型组,EGCG大、小剂量组组织学评分为6．8±1．0、3．6±0．8、4．1±1．0,后两者与模型组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）,均能抑制肠黏膜细胞COX-2的蛋白和RNA表达水平,且与用药剂量呈一定量效关系;其中以EGCG预处理组的效果最好（P〈0．01）。结论EGCG对IBD模型大鼠肠黏膜有保护作用,该作用可能是通过抑制COX-2的活性实现。     

祛胰抵方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4的影响

目的 观察不同浓度祛胰抵方对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞上葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)表达的影响并探讨其发生的可能机制.方法 健康的雄性Wistar大鼠80只,随机抽取10只作为正常对照组(NC),饲以普通饲料,其余以高脂饲料喂养4周后腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的模型.将建模成功后大鼠随机分为糖尿病模型(DM)组,高、中、低浓度中药组以及迪化唐锭组.NC组与DM组给予生理盐水,各组均给药12周.应用葡萄糖转运蛋白4(GLUT4) ELISA试剂盒测定骨骼肌组织胞膜GLUT-4蛋白的含量.结果 与NC组比较,DM组大鼠的骨骼肌细胞中GLUT-4表达明显降低;与DM组比较,药物治疗组骨骼肌细胞中GLUT-4的表达明显增强.结论 祛胰抵方可能通过增强大鼠骨骼肌组织细胞中GLUT-4的表达以改善2型糖尿病胰岛素抵抗.     

三甲氧苄嗪对低流量灌流大鼠心肌细胞葡萄糖转运蛋白-1、4 mRNA表达的影响

目的通过离体心脏灌注模型,观察低流量缺血及TMZ对大鼠心肌细胞葡萄糖转运蛋白-1、 4(glucose transporter type1、4,GLUT1/4)mRNA表达的影响.方法成年、雄性Wistar大鼠,分为(1)对照组(N);(2)缺血再灌注组(R);(3)缺血组(Ⅰ);(4)预处理/缺血(PI);预处理/缺血/再灌注组(PR).另取12只雄性Wistar大鼠,喂以TMZ14日,随机分为TMZ对照组(TC)和TMZ缺血/再灌注组(TR).各组均测定灌流液LDH、CK含量,并用RT-PCR方法观察心肌GLUT-1/GLUT-4 mRNA表达的变化.结果预处理和TMZ饲喂明显降低心肌缺血及再灌注期间LDH和CK的释放;GLUT-1 mRNA含量Ⅰ组、R组、PI组、PR组、TC组和TR组明显高于正常对照组(P值均小于0.05);R组、PI组和PR组含量明显低于Ⅰ组(P值均小于0.05);PR组和R组或PI组间比较,差值没有显著意义;TR组GLUT-1 mRNA含量明显高于R组及PR组(P值均小于0.05);而TR组和Ⅰ组比较则无显著差异.各组间GLUT-4 mRNA含量变异大,没有显著差异.结论低流量缺血显著增加了心肌GLUT-1 mRNA的表达,丽对GLUT-4 mRNA的含量没有显著的影响;而再灌注后,GLUT-1 mRNA含量较再灌注开始前有所下降,但仍高于基础状态.口服TMZ增加非缺血心肌在正常氧供状态下GLUT-1 mRNA表达,有助于提高心脏对低流量缺血的耐受性,并减轻再灌注对心肌细胞的损伤程度.     

妊娠期糖尿病患者肌肉组织中胰岛素信号转导和GLUT-4表达的变化

目的研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)孕妇肌肉组织中胰岛素信号通路及葡萄糖转运蛋白表达的变化,探讨其在GDM发病过程中的作用。方法将40例孕妇分为糖耐量正常(NGT)组和GDM组,每组20例,分离少量腹直肌,分别置于含和不含胰岛素的培养液中温育30 min。用Real-time PCR法检测胰岛素受体底物1(insu-lin receptor substrate 1,IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT-2)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)mRNA的表达,Western blot检测蛋白激酶B(Akt)的磷酸化程度、GLUT-4蛋白水平的变化。结果①基础状态时,GDM组IRS-1、IRS-2和GLUT-2 mRNA表达较NGT组降低(P<0.05);GLUT-4 mRNA表达2组无统计学差异(P>0.05);经胰岛素刺激后,NGT组中GLUT-4 mRNA较基础状态升高(P<0.05),而GDM组则无明显变化(P>0.05)。②NGT组经胰岛素刺激后,Akt蛋白的磷酸化程度明显增高(P<0.05),GDM组无明显变化(P>0.05);基础状态时,GDM组与NGT组相比,GLUT-4蛋白表达明显降低(P<0.05);经胰岛素刺激后,GLUT-4蛋白的表达水平均增高,NGT组增加的幅度明显高于GDM组(P<0.05)。结论 GDM患者胰岛素信号通路中的关键效应分子存在转录或翻译水平的缺陷,对胰岛素的反应降低,导致胰岛素抵抗。     

脾虚1号方对脾虚证功能性消化不良大鼠小肠葡萄糖转运蛋白1的影响

目的探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠小肠组织葡萄糖转运体蛋白1(GLUT1)蛋白与mRNA表达及脾虚1号方的干预作用。方法 70只7日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、FD模型组(单模型组,n=10)、脾虚型FD模型组(n=50)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,FD模型组和脾虚型FD模型组均给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,0.2 m L/只·d,连续6d。脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d;造模结束后随机分为双模型组、多潘立酮组和脾虚1号方低、中、高剂量组,每组10只,连同正常组、单模型组,每日分别给予蒸馏水10 m L/kg、多潘立酮3.125 mg/kg和脾虚1号方1.275、2.55、5.1 g/kg和灌胃14d。采用免疫组化、Western-blot和RT-PCR方法检测小肠组织GLUT1蛋白与mRNA表达。结果与正常组相比,双模型组大鼠小肠黏膜GLUT1蛋白平均光密度值、小肠组织GLUT1蛋白和mRNA表达量均降低(P0.05,P0.01);与双模型组相比,脾虚1号方低剂量组大鼠小肠黏膜GLUT1蛋白平均光密度值、小肠组织GLUT1蛋白和mRNA表达量均升高(P0.01)。结论脾虚型FD大鼠存在GLUT1 mRNA及蛋白的表达量降低,脾虚1号方能够上调GLUT1 mRNA及蛋白的表达量。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达影响

目的 通过检测大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达水平,探讨五子衍宗丸治疗少弱精子症的作用机制。方法 将体质量200～220 g的雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,生精胶囊组,五子衍宗丸低剂量、中剂量、高剂量组。采用连续灌服雷公藤多苷8周的方法复制少弱精子症模型,模型复制成功后连续给药4周。采用Western blot法测定Catsper1蛋白含量,采用荧光定量PCR法测定Catsper1 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测睾丸组织中cAMP含量。结果 生精胶囊和高剂量五子衍宗丸能明显提高模型大鼠睾丸组织中降低的cAMP含量以及升高睾丸组织中降低的Catsper1蛋白及其mRNA表达水平（P<0.05）。结论 促进Catsper1蛋白表达并参与cAMP-Ca2+正反馈可能是五子衍宗丸提高精子质量的机制之一。     

大建中汤对粘连性肠梗阻大鼠肠黏膜免疫系统中CD4＋、CD8＋及SIgA表达的影响

目的：观察大建中汤对粘连性肠梗阻大鼠肠黏膜免疫系统中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞及SIgA表达的影响。方法：复制粘连性肠梗阻大鼠模型,将140只SD大鼠随机分7组,即正常组、模型组、假手术组、理中组、建大组、建中组、建小组,分别予生理盐水、附子理中丸、大建中汤灌胃治疗。于造模术后7、14 d各取一半大鼠取回肠组织,运用免疫组织化学染色法标记小肠黏膜中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞及SIgA数量,用图像分析仪统计其含量。结果：与正常组比较,模型组大鼠肠黏膜免疫系统中SIgA及CD4＋、CD8＋T淋巴细胞数量明显减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）;建大组较模型组上述各指标均有升高（P〈0.05）,其中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞数量显著升高（P〈0.01）;各给药组治疗7 d与14 d后无明显差异。结论：大建中汤可增强粘连性肠梗阻大鼠肠黏膜免疫功能,发挥肠黏膜的保护作用。     

易激胶囊对腹泻型肠易激综合征模型大鼠血管活性肠肽和肥大细胞表达的影响

目的 观察腹泻型IBS大鼠模型血浆和肠黏膜组织中血管活性肠肽(VIP)表达及肥大细胞计数的变化.方法 采用束缚-制动及乙酸灌肠联合法制备动物模型.SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、斯巴敏组和易激胶囊低、中、高剂量组.测定各组大鼠肠道敏感性指标、应用放射免疫分析法(mA)测定各组大鼠血浆及乙状结肠黏膜内VIP的含量以及...     

清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的影响

目的：观察清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、易善复组和清肝化痰活血方组（简称清肝组）。采用高脂饲料复制NASH模型大鼠;清肝组和易善复组在进食高脂饲料的同时分别予清肝化痰活血方药液和易善复混悬液进行灌胃;第12周时处死所有大鼠,留取血清和肠组织标本。采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）;双抗体夹心ABC—ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的含量;经HE染色光镜下观察肠黏膜组织的病理学变化;RT-PCR法检测肠组织中紧密连接蛋白occludin的mRNA表达。结果：模型组大鼠血清AST、ALT、TNF-α的含量与正常组比较明显升高（P〈0．01）,肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin mRNA的表达与正常组相比明显下降（P〈0．01）;清肝组大鼠血清AST、ALT、TNF—α的含量较模型组降低（P〈0．05,P〈0．01）,肠组织中的occludin mRNA的表达较模型组明显增加（P〈0．01）。结论：清肝化痰活血方具有改善和修复NASH大鼠肠黏膜损伤的作用。     

甲状腺激素对大鼠急性肝衰竭肠粘膜屏障功能的保护作用

目的探讨补充外源性甲状腺激素(thyroid hormone,TH)对急性肝衰竭(acute hepatic failure,AHF)肠粘膜屏障的保护作用.方法 SD大鼠36只,随机分为3组:对照组(SO组)、急性肝衰竭组(AHF组)和治疗组(AHF+TH组).腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)制作AHF模型.15μg/kg的标准腹腔注射三碘甲状腺原氨酸(T3),取下腔静脉血检测TH水平,取小肠组织测二胺氧化酶(DAO)活性,取末段回肠行普通HE染色观察,并使用图像分析系统测量小肠绒毛长度.结果 AHF+TH组较AHF组小肠组织DAO活性升高(P<0.05),小肠绒毛长度升高(P<0.05),肠粘膜损伤程度降低(P<0.05).结论补充外源性TH对AHF时肠粘膜屏障有明显的保护作用.     

清肠栓对急性溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜GM—CSF及G-CSF的影响

目的：观察清肠栓对急性溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠黏膜粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSV）和粒细胞集落刺激因子（G—CSF）的影响。方法：48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、清肠栓组和柳氮磺胺吡啶（SASP）组,每组12只。用三硝基苯磺酸（TNBs）复制大鼠急性溃疡性结肠炎模型。造模后第3天开始给药,连续给药7d后处死大鼠。采用免疫组化、实时荧光定量PCR检测结肠组织中GM—CSF、G—CSF蛋白及mRNA表达。结果：模型组GM-CSF和G-CSF蛋白表达较正常组升高（P〈0．05）,清肠栓组及SASP组均较模型组降低（P〈0．05）;模型组GM—CSF和G—CSF mRNA表达较正常组明显增高（P〈0．05）,清肠栓组及SASP组均较模型组减低（P〈0．05）。结论：清肠栓可通过调节结肠黏膜GM—CSF、G-CSF蛋白及基因表达,以治疗急性溃疡性结肠炎。     

艾灸胃经穴对大鼠胃黏膜损伤的修复效应研究

目的:探讨艾灸胃经穴对大鼠急性胃黏膜损伤的保护及修复作用。方法:40只健康SD大鼠随机分成4组:正常组、模型组、艾灸胃经穴组、艾灸对照点组。采用水浸束缚法制作胃黏膜损伤大鼠模型,检测各组胃黏膜溃疡指数、溃疡面积和出血指数。结果:艾灸胃经穴组和艾灸对照点组的溃疡指数、出血指数及溃疡面积显著低于模型组,与其比较差异有显著性意义(P<0.05);并且艾灸胃经穴组与艾灸对照点组相比更低(P<0.05)。结论:艾灸胃经穴对大鼠急性胃黏膜损伤具有很好的修复作用。     

高尿酸血症大鼠的肠道尿酸排泄研究

目的观察果糖诱导的高尿酸血症大鼠肠道尿酸排泄量的改变,从肠道转运蛋白腺苷三磷酸结合转运蛋白(ABCG2)的表达探讨高尿酸血症的病理机制。方法将24只雄性SD大鼠按体质量随机分为正常组与模型组,正常组给予清水,模型组给予10%果糖饮水建立高尿酸血症模型。每10 d动态检测大鼠血清尿酸(SUA)、粪便尿酸(FUA)水平。在体肠灌流结合高效液相检测各组大鼠肠道尿酸排泄量(IUC)的变化。免疫组化染色观察转运体ABCG2在大鼠各肠段的表达位点,并进行蛋白表达半定量分析。蛋白质免疫印迹法(Western blot)进一步检测各组大鼠各肠段转运体ABCG2的蛋白表达。逆转录实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测各组大鼠各肠段转运体ABCG2的mRNA表达水平。结果实验第20~40天,与正常组比较,模型组的SUA水平显著升高(P0.05)。实验第10~30天,与正常组比较,模型组的FUA水平显著降低(P0.05或P0.01)。模型组大鼠肠道IUC显著低于正常组(P0.05)。免疫组化实验结果显示,ABCG2蛋白主要表达于各肠段的肠绒毛及肠腺中,模型组空肠与回肠的ABCG2蛋白表达显著低于正常组。Western blot蛋白分析结果亦显示模型组空肠和回肠的ABCG2蛋白表达显著低于正常组。RT-q PCR结果显示,与正常组比较,模型组空肠、回肠的ABCG2 mRNA表达显著减少。结论 10%果糖饮水可成功诱导大鼠高尿酸血症模型,该模型存在肠道尿酸排泄障碍,可能与下调空肠和回肠ABCG2 mRNA表达,抑制其蛋白表达有关。     

牛磺酸营养干预下缺氧大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1的表达

目的 观察高原缺氧条件下大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的变化,探讨牛磺酸对视网膜缺氧适应的影响.方法 96只SD大鼠随机分为6组,对照组(C)、牛磺酸组(T)、4 500 m缺氧组(45H)、4 500 m缺氧 牛磺酸组(45HT)、5 500 m缺氧组(55H)和5 500 m缺氧 牛磺酸组(55HT),分别以基础饲料和添加了2.4%牛磺酸的饲料喂养1周,营养干预后C组、T组继续在平原饲养,45H组、45HT组和55H组、55HT组放入低压氧舱分别模拟4 500 m和5 500 m高度的高原缺氧条件.在处理0、1、2、3 d后取视网膜,提取总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Western blot方法检测视网膜GLUT-1 mRNA和蛋白表达.结果 缺氧第1天视网膜中GLUT-1 mRNA与蛋白的表达显著降低(P＜0.05).缺氧第2天 mRNA与蛋白的表达开始回升,第3天 mRNA的表达恢复正常水平,蛋白的表达高于对照,牛磺酸处理后表达量均比对应的缺氧组高.结论 高原缺氧条件下,牛磺酸能通过上调GLUT-1的表达促进视网膜缺氧适应性调节机制的建立.     

孕期膳食锌缺乏下向调控胎盘IGF-Ⅱ和GLUT-1 mRNA的表达

目的探讨孕期膳食锌缺乏对胎盘IGF-Ⅱ和GLUT-1 mRNA表达的影响。方法36只SD孕鼠随机分为喂饲AIN93G配方饲料的正常对照组（ZC）、锌缺乏组（ZD）、配对喂养组（PF）以及国产商业饲料对照组（GC）。分别于孕9．5d、孕13．5d和孕17．5d取母鼠血清、肝脏及胎盘，以半定量聚合酶链反应测定胎盘中IGF-Ⅱ和GLUT-1 mRNA以及肝脏MT-1 mRNA的相对表达量，以原子吸收法测定血清锌浓度。结果孕9．5d和孕13．5d时，ZD组血清锌浓度显著低于PF组、ZC组和GC组。孕17．5d时，ZD组血清锌与PF组和ZC组相比无统计学差异。孕9．5d和孕13．5d时，ZD组母鼠肝脏MT-1 mRNA的相对表达量均显著低于PF组、ZC组和GC组。孕9．5d、孕13．5d和孕17．5d时，ZD组胎盘IGF—Ⅱ和GLUT-1 mRNA相对表达量均显著低于ZC组、PF组和GC组。胎盘GLUT-1 mRNA的表达呈现出随着孕龄延长而增高的趋势。孕17．5d时，PF组GLUT-1 mRNA的表达量与ZC组（P〈0．05）和GC组（P〈0．01）相比差异显著。结论孕期膳食锌缺乏显著下向调控胎盘IGF-Ⅱ和GLUT-1 mRNA的表达。