氢过氧化枯烯对整装培养人血管内皮细胞损伤作用的研究

本实验改良了传统方法,自创PF膜和浮膜培养法,首次整装培养人血管内皮细胞成功,经高锰酸钾固定剂固定,消化细胞内蛋白质,保留脂质膜性系统,应用透射电镜进行整体观察。在此基础上,用氢过氧化枯烯处理,造成整装内皮细胞线粒体,内质网的脂质过氧化损伤模型。本实验进一步证实脂质过氧化对内皮细胞生物膜的损伤,并报告了内质网和线粒体损伤的整体结构变化。     

血管内皮细胞脂质过氧化对平滑肌细胞和纤维母细胞DNA…

为探讨血管内皮细胞受脂质过氧化作用后对中膜平滑肌细胞增殖的影响，以氢过氧化枯烯作为引发剂引发培养牛主动脉内皮细胞的过氧化瓜在，测定其内皮细胞条件培养液对培养的牛主动脉中膜平滑肌细胞和Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果：氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞脂质过氧化物的含量明显增加；各实验组均未见明显的形态改变和乳酸脱氢酶含量的增加；由氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞的条件培养使平滑肌细胞和Ｓｗｉｓｓ３     

血管内皮细胞脂质过氧化对平滑肌细胞和纤维母细胞DNA合成的影响

为探讨血管内皮细胞受脂质过氧化作用后对中膜平滑肌细胞增殖的影响，以氢过氧化枯烯作为引发剂引发培养牛主动脉内皮细胞的过氧化反应，测定其内皮细胞条件培养液对培养的牛主动脉中膜平滑肌细胞和Ｓｗｉｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果：氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞脂质过氧化物的含量明显增加；各实验组均未见明显的形态改变和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量的增加；由氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞的条件培养液使平滑肌细胞和Ｓｗｏｓｓ３Ｔ３细胞的〔３Ｈ〕－ＴｄＲ掺入率明显增高。可以认为：脂质过氧化作用使内皮细胞对平滑肌细胞和纤维母细胞的增殖促进活性增强。为阐明脂质过氧化作用促进和加重体内动脉粥样硬化病变形成的机理提供了实验资料。     

钩端螺旋体冷冻蚀刻复型的超微结构研究

作者应用冷冻蚀刻复型技术研究3株钩用螺旋体的超微结构,发现:①钩体在冷冻蚀刻复型下的形态与超薄切片及负染的观察结果基本一致,不同种属与毒力的钩体其冷冻蚀刻复型的超微结构无明显差异;②钩体外膜蛋白颗粒呈球形,其分布明显不对称。在外膜的EF面,蛋白颗粒密集分布,其密度为776～2303个/μm~2,直径为14.25±2.25nm,而PF面则甚少,呈平滑状;③轴丝位于圆柱形菌体与外膜之间,直径20nm,外周有一7nm鞘状结构包绕;④钩体细胞质中有核糖体、核质及包涵体等亚细胞结构存在。本研究结果表明:冷冻蚀刻复型技术较其他方法能更清晰地显示接近生活状态的钩体的超微结构。     

人胎隔腹膜毛细血管超微结构的研究

本文应用血管铸型、ODO冷冻断裂、超薄切片和冷冻复型技术,在电镜下观察了人胎隔腹膜毛细血管的超微结构.研究结果表明:①人胎膈腹膜毛细血管有三种构型,即网囊型、树枝型和发丝型;②毛细血管属连续型,无窗孔;③毛细血管内皮细胞以桥粒连接;④胞质小泡是内皮细胞中最明显特征,可开口在细胞间隙、基底面和管腔面.     

维生素E对培养人内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

本实验以维生素E作用于培养的人血管内皮细胞,从形态结构和功能方面观察了维生素E对内皮细胞脂质过氧化作用的影响,探讨维生素E抗动脉粥样硬化作用的途径。结果表明:维生素E能抑制内皮细胞的脂质过氧化反应,使脂质过氧化引起的细胞收缩和生物膜系统损伤的程度减轻,使细胞PG_2合成增加。提示维生素E通过防止内皮细胞的氧化性损伤,可能在抗动脉粥样硬化病变形成中起重要作用。     

开搏通对高糖引起肾小球内皮细胞损伤防治作用的研究

目的 观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。并探讨开搏通对其损伤的防护及机制。方法 采用体外人肾小球内皮细胞培养，八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化产物丙二醛，Prendergast法测定细胞膜流动性，Fura-2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化，并观察开搏通过高糖致内皮细胞损伤的治疗作用。结果 高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤，使细胞膜流动性明显增高，细胞内钙含量增加，随着培养时间的延长，糖浓度愈高，作用愈明显，而开搏通可抑制细胞内钙积聚，改善细胞膜流动性及减轻过氧化损伤。结论 高糖引起的内皮细胞损伤和膜流动性改变是导致糖尿病肾病发生发展的因素之一。开搏通可防治高糖致内皮细胞损伤，是治疗糖尿病肾病较理想的药物之一。     

体外培养后深低温保存兔颈总动脉结构和力学性能

①目的　观察深低温保存后兔颈总动脉内皮细胞存在状态、平滑肌细胞存活与再生能力;观察并分析深低温保存后、体外培养后动脉血管壁的结构变化、血管力学性能变化。②方法　获取兔子的颈总动脉并用含有1.5 mol/L 1,2 丙二醇(PROH)的低温保护剂深低温保存,复温时采用液氮中预冷的冰袋缓慢复温。以新鲜动脉作为对照。体外培养新鲜和冷冻复温后的动脉的平滑肌细胞(SMCs);同时将冷冻复温后的血管组织在体外培养6、12和24 h,以观察血管内皮细胞和SMCs的变化,以及血管壁的完整性(弹力膜或纤维的完整性)和这些血管的力学特性(弹性模量和断裂压力)的变化。③结果　冷冻复温后血管SMCs在体外培养开始生长增殖所需的时间(24~36 h)几乎与新鲜血管相似,生长的速度也相似。冷冻复温后,血管内壁存留有少量的内皮细胞,平滑肌和血管壁结构没有明显变化。但是,血管力学性能显著降低(F=5.325~97.458,q=2.32~12.38,P<0.05、0.01)。冷冻复温后的血管作为完整的组织体外培养后,所有的内皮细胞脱落,部分SMCs出现变性和坏死;弹力纤维和胶原出现不同程度的断裂,力学性能进一步降低(q=2.12~8.76,P<0.05、0.01)。④结论　本研究中应用的方法对于保护血管的SMCs是有效的,但是对于血管内皮细胞效果不好;冷冻复温过程和复温后体外培养     

高糖对培养肾小球内皮细胞细胞膜流动性影响的研究

目的 观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法 采用体外人肾小球内皮细胞培养,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化物丙二醛、Prendergast法测定细胞膜流动性,Fura-2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化。结果 高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤,使细胞膜流动性明显增高,细胞内钙含量增加,随着培养时间的延长,糖浓度愈高,作用愈明显。结论 高糖致内皮细胞过氧化损伤影响细胞膜流动性改变,可能是糖尿病肾病发生的始动因素。     

内皮细胞脂质过氧化损伤对单核细胞粘附与内皮下穿入的影响

将处理后的人羊膜夹在改进的Ｂｏｙｄｅｎ小室中间，于羊膜绒毛膜面培养人血管内皮细胞，建立了稳定的血管内膜培养模型。以巯基氧化剂联胺作用于内皮细胞，引发细胞过氧化脂质蓄积与脂质过氧化损伤。此内皮细胞损伤能增加单核细胞对内皮细胞的粘附和内皮下穿入；单核细胞主要粘附于内皮细胞间隙与受损伤细胞表面；在内皮细胞剥脱区域穿入内皮下的单核细胞较非剥脱区域为多。结果提示，内皮细胞脂质过氧化损伤通过增加单核细胞的粘附与内皮下穿入而在动脉粥样硬化发生中起重要作用。     

氢过氧化枯烯对培养心肌细胞DNA的影响

应用氢过氧化枯烯作用于体外培养大鼠心肌细胞，观察其对ＤＮＡ的影响。结果表明，氢过氧化枯烯引起心肌细胞￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低、ＤＮＡ断裂，脂质过氧化物含量增加。提示氢过氧化枯烯引发了心肌细胞的脂质过氧化过程，说明培养心肌细胞ＤＮＡ对自由基损伤作用是敏感的。     

脂质过氧化对培养心肌细胞的损伤作用

应用氢过氧化枯烯作用于培养的心肌细胞,观察到心肌细胞及培养液中脂质过氧化物含量增加,细胞膜流动性下降,细胞维生素E含量减少,~3H—TdR掺入率降低,细胞内酶类漏出增加以及细胞超微结构改变。表明氢过氧化枯烯激发和促进了培养心肌细胞的脂质过氧化过程,提示以氢过氧化枯烯作用于培养心肌细胞,可作为估价体外心肌细胞脂质过氧化损伤的模型之一。     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

Kaposi 肉瘤电镜观察

本文报道一例经典型Kaposi肉瘤结节损害的透射电镜观察结果。发现结节主要为梭形细胞和血管,血管仅有一层内皮细胞,细胞间仅有狭窄的电子致密区相连接,内皮细胞常不连续,基底膜不规则增厚,或分层、断裂,以至有的内皮细胞外基底膜缺如,也有的缺乏周皮细胞。故作者同意这些改变可能为红细胞外渗提供了病理机制。本文报告的病例电镜下所见与Mc Nutt等报告的年轻同性恋Kaposi肉瘤的早期损害的改变相一致,也支持该病的血管来源学说。     

纳米二氧化硅颗粒对血管内皮细胞的毒性及其凋亡诱导作用

目的:研究纳米二氧化硅(SiO₂)颗粒的血管内皮细胞毒性和可能的作用机制,为探讨纳米SiO₂颗粒毒性效应及安全性评价提供参考依据。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为对照组和不同浓度纳米SiO₂颗粒暴露组,暴露浓度分别为12.5、25.0、50.0及100.0 mg·L^-1。采用透射电镜(TEM)观察纳米SiO₂颗粒粒径、形貌及分散性。细胞处理24 h后,电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法测定细胞中硅水平;MTT法测定细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞膜的完整性;DCFH-DA荧光探针标记激光共聚焦显微镜观察细胞中活性氧(ROS)水平;DAPI染色荧光显微镜下观察细胞核形态;Annexin Ⅴ/PI双染标记流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;罗丹明123线粒体试剂盒检测细胞线粒体膜电位。结果:TEM观察,纳米SiO₂颗粒分布均匀,大小一致,颗粒呈球形,分散性好,未发生聚集。用Image J 软件计算得到颗粒平均粒径为(57.66 ± 7.30)nm。与对照组比较,纳米SiO₂颗粒作用于HUVECs后,细胞活力下降(P<0.05),细胞中硅水平和培养液中LDH活性增加(P<0.05),细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位下降,甚至发生细胞凋亡。上述细胞效应均表现为随颗粒作用浓度的增加而逐渐明显,呈现一定的剂量依赖关系。结论:纳米SiO₂颗粒具有血管内皮细胞毒性,可诱导ROS生成和氧化应激,从而破坏细胞膜、损伤线粒体,最终引发细胞凋亡。     

阿替普酶对急性脑梗死大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的：探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1（Claudin-1）和闭合蛋白5（Claudin-5）表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法：建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿替普酶溶栓组,每组18只。透射电子显微镜下观察大鼠脑内皮细胞超微结构,荧光免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果：透射电子显微镜检测,模型组大鼠缺血区域脑体积明显增大,内皮细胞肿胀,部分皮质与周围脑组织界限明显,基膜厚薄均匀,紧密连接结构非常松散、出现断裂和消失;阿替普酶溶栓组大鼠脑梗死区域毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻,基膜厚薄不均匀改善,脑毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间大部分紧密连接结构断裂情况消失,无紧密连接结构消失。荧光免疫组织化学检测,与模型组比较,阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达有明显改善。Western blotting检测,与假手术组比较,模型组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平明显减少（P<0.01）;与模型组比较,不同时间点阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平均升高（P<0.01）。结论：阿替普酶对急性脑梗死大鼠大脑内皮细胞的结构有改善作用,其作用机制可能与阿替普酶能降低大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平有关。     

射频烧灼兔眼角巩膜后超微结构的改变

目的 探讨射频烧灼对兔角膜、巩膜及晶状体、视网膜等眼组织的超微结构影响。方法 应用射频(功率15 W)烧灼24只成年新西兰兔眼角膜、巩膜10s，随机分为四组，每组6只，并分别在烧灼后2h、24h、3d、14d采集标本和用透射电镜观察烧灼组兔角膜、巩膜及晶状体、视网膜的改变，并同时观察对照组的表现。结果 射频烧灼后2h，角膜上皮细胞核染色质固缩、基质部分胶原纤维断离、内皮细胞线粒体肿胀、空泡；巩膜成纤维细胞核染色质固缩、粗面内质网扩张、线粒体肿胀；晶状体无改变；视网膜色素上皮细胞线粒体肿胀、视细胞外节紊乱、内节线粒体肿胀，外核层细胞核染色质固缩等改变。烧灼后3d，角膜上皮细胞结构较为清晰，内皮细胞个别线粒体肿胀，巩膜成纤维细胞线粒体轻度肿胀，视网膜结构基本正常。烧灼后14d，角膜、巩膜和视网膜的超微结构与对照组比较无明显差异。结论 研究结果表明射频烧灼角膜、巩膜可导致角膜和巩膜的直接损伤及视网膜的间接损伤，但其超微结构改变在烧灼后14d可基本恢复正常。     

老年慢性硬膜下血肿30例临床分析

本文报道老年慢型硬膜下血肿３０例。全组均行钻颅冲洗治疗。２４例血肿外包膜有大量毛细血管新生，均由一层内皮细胞组成．基底膜不完整，内皮细胞的间隙增宽，作者认为这种内皮细胞改变是血肿形成的主要机制。此外，血肿液镜检均见新鲜红细胞，分光分析以Ｈｂ－Ｏ２为主，也支持血肿膜微血管不断少量出血，从而使血肿逐步扩大的理论。