辛开苦降法对反流性食管炎模型大鼠食道下段组织iNOS蛋白表达的影响

目的探讨辛开苦降法对反流性食管炎(RE)模型大鼠食道下段组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响。方法将98只成年雄性wistar大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(88只)。用改良部分贲门肌切开术+外置幽门半结扎术进行造模,造模后去除死亡大鼠和虚弱大鼠,选取恢复较好的大鼠60只将其随机分为模型组,中药低、中、高剂量组,中西药混合组、西药组,每组各10只。正常组不予处理,各组分别给予相应的药物灌胃,模型组给予0.9%生理盐水,中药低、中、高剂量组分别给予不同浓度的以辛开苦降法为主的半夏泻心汤加减化裁,西药组予含多潘立酮、铝碳酸镁、雷贝拉唑钠的混合药液,中西药混合组予中药中剂量组及西药组的混合药液。依据治疗时间不同,每组又分为7 d、14 d两个亚组,每个亚组5只大鼠。分别于治疗第7天和第14天取材,采用免疫组化和western-blot法,检测各组食管下段黏膜iNOS的表达水平。结果模型组与正常组对比,大鼠食道下端iNOS表达增加(P0.05),治疗7天后,各组与模型组比较,iNOS表达没有显著差异(P0.05);治疗14天后,中药高剂量组、中西药混合组、西药组与模型组比较,iNOS表达均有不同程度减少,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论辛开苦降法治疗RE模型大鼠的作用机制可能与其下调iNOS的蛋白表达相关。     

肾脏缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的变化

目的　研究大鼠肾脏缺血再灌注损伤 (IRI)过程中一氧化氮合酶 (NOS)的变化规律。方法　制作SD大鼠单侧肾脏IRI动物模型 ,用同位素法测定正常及IRI肾组织的NOS活性 ;用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化。结果　单纯热缺血 1h对肾脏NOS活性无明显影响 ,再灌注30min后NOS活性即开始升高 ,2～ 6h到达高峰 ,持续到 6h ,此后迅速下降 ,2 4h降低到正常以下 ,2 1d时恢复至正常水平。Western印迹显示IRI早期eNOS蛋白表达升高 ,12h后开始逐步降低 ,3d后明显低于正常对照组 ,以后逐步恢复正常。iNOS的变化与eNOS明显不同 ,正常肾脏iNOS表达微弱 ,IRI可诱导iNOS表达 ,12h开始表达 ,并逐渐升高 ,3d后达到高峰 ,以后逐步恢复正常。RT PCR分析发现eNOS及iNOSmRNA的变化与其蛋白变化相一致。结论　单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化 ,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加 ,酶的合成增多 ,活性增高。正常肾脏iNOS的表达微弱 ,IRI可诱导iNOSmRNA表达 ,使iNOS合成增加     

当归芍药散对阿霉素肾病综合征大鼠一氧化氮及其合酶表达影响

目的 :尾静脉注射阿霉素法建立肾病综合征(Nephrotic Syndrome,NS)大鼠,探讨当归芍药散对肾病综合征大鼠一氧化氮合酶表达的影响及其机制研究。方法 :将雄性SD大鼠复制为NS模型,随机分为阳性对照组、模型组和当归芍药散组,另设正常对照组。灌胃治疗后,HE染色观察肾脏组织病理变化;BCA法检测24 h尿蛋白量;分光光度法测定尿液NO含量;WB法检测肾组织内皮型一氧化氮合酶(endothelial NOS,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducibleNOS,iNOS)和神经型一氧化氮合酶(neural NOS,nNOS)的表达。结果 :模型组与正常组比较,尿蛋白量显著增加(P0.01),肾脏病理损伤严重;各治疗组与模型组比较尿蛋白含量下降明显,差异具有显著性(P0.01);模型组与正常组比较大鼠尿液NO含量降低显著(P0.01),当归芍药散组与模型组比较NO含量显著增加(P0.01);与正常组比模型组iNOS、nNOS和eNOS蛋白表达均降低,且差异具有显著意义(P0.01);与模型组比较各给药组能显著增加iNOS、nNOS和eNOS蛋白表达,差异具有极显著意义(P0.01)。结论 :当归芍药散可以提高肾病综合征大鼠NOS的表达,增加大鼠体内NO含量,减少尿蛋白含量,延缓肾病综合征病理进程。     

针刺大椎穴对癫痫大鼠N0含量及NOS阳性神经元数量的影响

通过针刺大椎穴治疗戊四唑"点燃"癫痫大鼠,观察其NO含量及NOS阳性神经元数量变化,探讨针刺治疗癫痫的机理。用戊四唑腹腔注射造成癫痫大鼠模型40例,随机分为模型组、针刺组、中药对照组、西药对照组,每组10例;并设立正常空白组10例。疗程结束后取材、固定、浸糖、切片;测定正常组、模型组及各治疗组治疗后NO含量及NOS阳性神经元数量,比较空白组与模型组指标变化,将针刺组与模型组、中药组、西药组之间进行比较。结果发现戊四唑造模后,各组大鼠大脑皮质、海马组织NO含量、NOS阳性神经元数量明显上升。治疗后,NO含量、NOS阳性神经元数量明显降低,其中,针刺组优于中药对照组、西药对照组(P<0.05)。说明针刺大椎穴可以有效降低癫痫大鼠海马及大脑皮质NO含量及NOS阳性神经元数量,提示针刺抗癫痫作用可能是通过降低与癫痫发作密切相关神经递质含量而发挥作用。     

一氧化氮合酶在肾脏缺血预处理中的表达

目的 :检测一氧化氮合酶 (NOS :eNOS ,iNOS ,nNOS)在肾脏缺血预处理动物模型肾组织中的表达 ,探讨NOS在肾脏缺血预处理中的可能作用机制。方法 :将 36只小白兔随机分为四组即对照组、缺血预处理组(IP)、缺血再灌注组 (I/R)和缺血预处理后再灌注组 (IP +I/R)。分别检测各组肾组织中NOS的表达及组织学变化。结果 :在急性肾缺血 6 0min再灌注 6 0min时 ,eNOS阳性表达在IP组和IP +I/R组明显高于I/R组和对照组 (P <0 .0 1) ,iNOS和nNOS在组织肾中未见明显表达。组织学变化发现I/R组肾组织中肾细胞发生明显变性坏死 ,而IP组和对照组未见明显改变。结论 :肾脏缺血预处理在肾脏缺血再灌注中具有保护作用 ,而NOS参与该作用机制。     

针刺大椎穴对癫痫大鼠NO含量及NOS阳性神经元数量的影响

通过针刺大椎穴治疗戊四唑"点燃"癫痫大鼠,观察其NO含量及NOS阳性神经元数量变化,探讨针刺治疗癫痫的机理.用戊四唑腹腔注射造成癫痫大鼠模型40例,随机分为模型组、针刺组、中药对照组、西药对照组,每组10例;并设立正常空白组10例.疗程结束后取材、固定、浸糖、切片;测定正常组、模型组及各治疗组治疗后NO含量及NOS阳性神经元数量,比较空白组与模型组指标变化,将针刺组与模型组、中药组、西药组之间进行比较.结果发现戊四唑造模后,各组大鼠大脑皮质、海马组织NO含量、NOS阳性神经元数量明显上升.治疗后,NO含量、NOS阳性神经元数量明显降低,其中,针刺组优于中药对照组、西药对照组(P<0.05).说明针刺大椎穴可以有效降低癫痫大鼠海马及大脑皮质NO含量及NOS阳性神经元数量,提示针刺抗癫痫作用可能是通过降低与癫痫发作密切相关神经递质含量而发挥作用.     

安氟醚对大鼠耳蜗一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察安氟醚对大鼠耳蜗一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨其对耳蜗影响的可能机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为3组(n=10),对照组(C组)持续吸入纯氧;低浓度安氟醚组(E1组)持续吸入1.5%安氟醚+纯氧;高浓度安氟醚(E2组)持续吸入3.0%安氟醚+纯氧,30min后处死大鼠,免疫组织化学方法检测耳蜗螺旋器、血管纹和螺旋神经节诱生型NOS(iNOS)、内皮型NOS(eNOS)和神经元型NOS(nNOS)的表达水平。结果:与C组比较,E1组耳蜗螺旋器、螺旋神经节iNOS、eNOS和nNOS以及血管纹eNOS表达均下调,E2组耳蜗螺旋器、血管纹和螺旋神经节iNOS、eNOS和nNOS表达下调(P<0.05或0.01);E2组耳蜗螺旋神经节eNOS和nNOS表达组较E下调明显(P<0.05)。结论:安氟醚可浓度依赖性地下调大鼠耳蜗NOS表达,从而影响耳蜗功能。     

补肾培元汤对肾间质纤维化大鼠肾脏影响的研究

目的观察补肾培元汤对口服氯化汞(HgCl_2)致肾间质纤维化模型大鼠的肾脏保护作用,并探讨其机制。方法将75只雄性大鼠随机分为五组,分别为正常组、模型组、中药对照组、西药对照组、治疗组,每组15只,除正常组采用生理盐水口服外,其他组采用口服氯化汞(HgCl_2)1周制作肾间质纤维化模型,1周后治疗组给予补肾培元汤为4ml·d~(-1)·只~(-1);西药对照组给予贝那普利为4ml·d~(-1)·只~(-1)(浓度为0.4mg/L)的水溶液;中药对照组给予尿毒清颗粒4ml·d~(-1)·只~(-1)(相当于生药3g·ml~(-1)·只~(-1)),每日1次给药;正常组、模型组均给予相同体积的生理盐水灌胃,每日1次。实验期间每周称一次体重,并观察大鼠生存状况,分别于第0d、8d、16d、24d采血,进行血肌酐(Scr)尿素氯(BUN)检测。于第24d处死大鼠,观察肾脏组织形态学变化,通过免疫组织化学方法检测各组大鼠肾组织肿瘤转化生长因子(TGF-β 1mRNA)的表达。结果 (1)治疗组大鼠生存质量优于模型组;(2)治疗组大鼠各时间点肌酐、尿素氮水平低于模型组,与中药对照组西药对照组相比也有所降低;(3)治疗组大鼠肾组织TGF-β 1mRNA的表达与模型组相比明显下调。结论补肾培元汤可通过减少TGF-β 1mRNA在口服氯化汞大鼠肾组织的表达,部分抑制肾间质纤维化的发生,保护肾脏,并能明显改善口服氯化汞导致肾间质纤维化的大鼠的生存质量,总体疗效优于尿毒清及贝那普利。     

绞股蓝颗粒对早期糖尿病肾病模型大鼠肾脏NO/NOS表达的影响

目的：观察绞股蓝颗粒对早期糖尿病肾病（DN）模型大鼠肾脏一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）表达的影响,探讨其治疗糖尿病肾病的作用机制。方法：48只SD大鼠,利用单侧肾切除加STZ注射法改良复制糖尿病肾病大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治疗组（绞股蓝颗粒高、中、低剂量组及缬沙坦组）,各组大鼠给予相应药物灌胃,共4周。观察各组大鼠一般情况、生化指标、肾组织NO含量、NOS活性及诱导型NOS（iNOS）mRNA表达的变化。结果：治疗组一般情况、生化指标变化均优于模型组。治疗组肾组织NO含量显著减少,NOS活性明显降低,肾组织iNOSmRNA明显下调,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：绞股蓝颗粒可用于治疗大鼠早期糖尿病肾病,其机制可能与调节一氧化氮及一氧化氮合成酶表达有关。     

活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核因子活化B细胞κ轻链增强子NF-κB信号通路的影响

目的观察活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号传导通路的影响,探讨其对DN防治作用及机制。方法建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组,观察各组大鼠24 h饮水量、24 h尿蛋白量、血肌酐、空腹血糖水平等指标;病理切片过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾脏的病理改变;采用一步法定量PCR检测肾组织NF-κB基因的表达;免疫印迹法(Western blot)检测P65蛋白质含量。结果治疗后,模型组尿蛋白量较正常组呈上身趋势,中药组治疗后,24 h尿蛋白量、血肌酐明显低于模型组(P0.01);模型组NF-κB基因在肾脏中表达量明显高于正常组,治疗后,中药组NF-κB基因在肾脏中表达水平较模型组明显下调(P0.01);相对于模型组P65蛋白表达上调,中药组治疗后P65蛋白表达量下降,接近正常组。结论活血祛痰法可用于治疗早期糖尿病肾病,机制可能与其能抑制DN大鼠肾脏中NF-κB信号传导通路的激活有关。     

肢体缺血再灌注后肺组织中NOS的表达

（1）目的 观察肢体缺血再灌注后肺组织中NOS同工酶活性，分布和mRNA表达的变化；（2）方法 复制肢体缺血再灌注模型。实验动物随机分为4组；正常对照组（Control组），损伤组（IR组），L-精氨酸组（L-Arg组）和氨基胍组（AG组），用免疫组织化学方法检测肺组织中NOS蛋白的表达；用RT-PCR方法检测肺组织中NOSmRNA的表达。（3）结果 免疫组织化学结果显示，Control组iNOS染色少有阳性；IR组iNOS染色阳性，染色阳性细胞主要分布在支气管上皮细胞，支气管平滑肌细胞，支气管周围浸润的中性粒细胞也呈阳性表达；AG组iNOS染色较IR组减弱；L-Arg组则无明显差异。eNOS染色在Control组呈阳性，主要分布于毛细血管内皮细胞，其余3组染色均减弱，RT-PCR结果显示，iNOSmRNA的表达在Control组较少，IR组呈高表达，AG组，L-Arg组表达与IR组相比无明显差异；eNOSmRNA表达降低，肺组织中NO的水平增高；给予外源性的L-Arg增加NO的生成，应用AG不影响NOSmRNA的表达，只是 在蛋白水平对iNOS有抑制作用。     

芦丁对大鼠缺血再灌注心肌组织iNOS和eNOSmRNA表达的影响

目的：研究芦丁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法通过左冠状动脉结扎建立SD大鼠心肌缺血再灌注模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、芦丁组、L-NAME（eNOS 抑制剂）组,ELISA 法检测血清一氧化氮（NO）水平,免疫抑制法检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度,实时荧光定量 PCR分析各组心肌组织iNOS 和eNOS mRNA 表达的变化。结果与模型组比较,芦丁组血清 NO 水平增高（P＜0.01）,CK-MB 浓度下降（P＜0.01）,eNOS mRNA 表达升高（P＜0.01）,iNOS mRNA 表达下降（P＜0.01）。结论芦丁缺血预处理对心肌起到了保护作用,其机制可能与上调心肌组织eNOS mRNA 、下调iNOS mRNA 表达有关。     

The antagonism of cholecystokinin octapeptide-8 to the peroxynitrite oxidation on a diabetic cataractal rat model

Background Cataracts is considered be formed because of an abnormal glucose metabolic pathway or oxidative stress. We explored the damaging role of ONOO^- and antagonism of cholecystokinin octapeptide-8 （CCK-8） in diabetic cataractal rat lenses. Methods A diabetic cataractal animal model was established by peritoneal injection of streptozotocine （STZ）. Thirty-six normal SD rats were taken as control group; seventy-two were given STZ （45 mg/kg） and then divided into STZ group and CCK-8 group （peritoneal injection CCK-8）. STZ induced diabetic rats were treated with CCK-8 for 60 days. Lenses were examined with slit lamp at 20, 40 and 60 days. Immunofluorescent staining and Western blot analysis were used for determining nitrotyrosine （NT, a marker for ONOO-）. RT-PCR and gene array analysis were used for determining the expression of inducible nitric oxide synthetase mRNA （iNOS mRNA） in lens epithelium （LEC）. Results STZ group rats developed lens opacity by 20 days that reached a high level by 60 days after STZ injection. CCK-8 group rats delayed the cataract formation. There was no distinct expression of NT and iNOS mRNA in control group. In STZ group, there were distinct expression of NT and upregulation of iNOS mRNA; however, CCK-8 group showed weak expression of NT and downregulation of iNOS mRNA. Conclusions NT, which may be a new form of oxidative stress, was expressed in diabetic rat LEC although CCK-8 could reverse NT damage in LEC. The results suggested that CCK-8 might be a useful therapeutic agent against diabetic cataract. The antagonizing mechanism of CCK-8 may be related to direct antagonism of ONOO^- as well as its inhibition of the expression of iNOS mRNA for production of NO and therefore decrease in the formation of ONOO^-.     

仙贞片对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的调节

观察仙贞片对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA高表达的影响.采用链脲佐菌素左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型,随机分模型组、仙贞片组及氨基胍组各10只,另设正常对照组10只.应用原位杂交的方法.结果模型组大鼠主动脉内皮细胞糖基化终产物受体mRNA表达的灰度值明显增高,出现过度表达.仙贞片治疗后主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的灰度值降低,与氨基胍组相近似(P>0.05),与模型组比较差异显著(P<0.05).显示仙贞片与氨基胍一样,可显著下调糖基化终产物受体-mRNA的过度表达,对糖尿病大鼠主动脉血管糖基化终产物受体高表达有明显调节作用.提示仙贞片对高血糖造成的主动脉血管损害具有保护作用.     

缺血-再灌注心肌诱导型一氧化氮合酶基因表达及其活性的变化和卡托普利的影响

目的探讨心肌诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达及其活性的变化在心肌再灌注损伤中的作用；研究卡托普利对缺血再灌注心肌保护作用的机制。方法采用Langendorff离体鼠心灌流模型；将18只SD大自鼠随机均分为3组：对照组、缺血一再灌组及卡托普利组；观察心肌iNOS mRNA表达及其活性、丙二醛（MDA）含量、过氧化物歧化酶（SOD）活性、肌酸激酶（CK）含量和冠状静脉流出液一氧化氮（NO）的变化。结果缺血再灌注后心肌iNOS mRNA表达显著上调（P〈0．001），iNOS活性增高（P〈0．001）；卡托普利组再灌注30min，心肌iNOS mRNA表达及其活性、心肌MDA含量均低于缺血-再灌组（P〈0．01，P〈0．05），而心肌SOD活性（P〈0．01）和CK含量（P〈0．05）高于缺血-再灌组，再灌注期间冠状静脉流出液NO含量高于缺血-再灌组（P〈0．01）。结论缺血-再灌注心肌iNOS基因表达上调，心肌iNOS活性增高；影响心肌iNOS mRNA表达、调节心肌iNOS活性可能是卡托普利抗心肌脂质过氧化作用的机制之一。     

实验设计（二）

4　实验设计的类型根据实验设计的目的和实验设计原则 ,研究者可选择适宜的设计类型。目前用于实验研究的设计模式有多种 ,在此仅介绍几种常用类型。4.1　完全随机化设计 ( completely randomdesign)完全随机化设计又称单因素设计 ,在实际工作中应用较多。在这种设计中 ,研究因素只有一个 ,但具有几个水平 (处理 )。它是将研究对象随机地分配到各个处理组 (水平组 )中进行实验观察 ,或者分别从不同总体中随机抽样进行对比观察。可以作两样本的比较 ,也可作多样本的比较 ,各个样本含量可以相等 ,也可不等。分组时可用抽签法 ,也可用随机数字…     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）时胰腺组织一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的变化。方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组。SAP组（n=18）以逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型;对照组（n=18）以同法注射等剂量生理盐水。造模后6、12、24 h每组随机处死大鼠6只,检测血淀粉酶、胰腺组织病理组织学改变、胰腺组织NO水平及iNOS活性以及腺腺组织iNOS mRNA表达的变化。结果与对照组相比,SAP组在6 h时间点上,胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高（P〈0.01）,免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOS mRNA表达增高（P〈0.01）;随时间延长,在12 h和24 h各指标到达高峰,24 h仍维持在较高水平（P〈0.01）。结论在SAP时,随着时间的延长,iNOS表达增高,从而产生高浓度的NO,加重胰腺组织的损伤。     

一氧化氮合酶蛋白和基因在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达

目的　探讨一氧化氮 (NO) 在肝肺综合征 (HPS) 发生机制中的作用。方法　采用 Wistar大鼠行胆总管结扎术 (CBDL) 制备HPS动物模型, 应用免疫组化方法观察内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 蛋白在肺血管的表达和分布特点, 采用RT PCR方法检测肺组织中eNOS、iNOS mRNA的表达。结果　CB- DL组肺血管eNOS染色强度较假手术组显著升高 (P<0 .01), 而 iNOS表达在两组间差异无显著性意义 (P>0 .05);CBDL组大鼠肺组织eNOS mRNA的表达较对照组增高 (P<0. 01), 两组iNOS mRNA的相对表达量差异无统计学意义; 相关分析表明, 肺组织中eNOS mRNA水平与肺泡动脉氧分压差 (A- aDO2) 显著相关 (r=0. 920 1, P<0. 01)。结论　HPS时内皮细胞eNOS表达增强可能是肺血管NO增多的主要原因。     

注射用心肌肽预处理对大鼠未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的:探讨注射用心肌肽预处理对幼鼠未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用,阐明其相应的作用机制.方法:通过结扎SD幼鼠冠状动脉左前降支建立缺血再灌注损伤模型.SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组及注射用心肌肽预处理组(CMP组).检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T (Tn-T)和心肌...     

伊贝沙坦对糖尿病大鼠心脏一氧化氮系统的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗利伊贝沙坦对糖尿病大鼠心脏的保护作用及其一氧化氮（NO）机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和伊贝沙坦组3组，每组10只：大鼠腹腔一次注射2g／L链脲佐菌素（50mg／kg）造模，造模后12周终止实验处死大鼠，取血、尿和心脏标本，测定尿量、体质量、心脏质量／体质量的比值、血糖、糖化血红蛋F1（HbAlC）：测定血清和心脏组织NO的含量：并通过免疫组化观察心肌诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的表达，RT—PCR检测iNOSmRNA的表达结果12周终止实验时，糖尿病组和伊贝沙坦组大鼠的尿量、心脏质量／体质量比值、血糖、HbAlC、尿液、血清和心脏组织的NO水平均明显高于对照组，而体质量明显低于对照绀（P〈0．05）：伊贝沙坦组大鼠的心脏质量／体质量比值、尿液、血清和心脏组织的N0水平明低于糖尿病组（P〈0、05）。免疫组化发现伊贝沙坦组大鼠心脏组织的iNOS表达明显降低。RT—PCR发现伊贝沙坦组大鼠心脏组织的iNOSmRNA表达明显降低、结论NO和iNOS参加了糖尿病心肌病的发生，伊贝沙坦能抑制糖尿病大鼠心肌iNOS的基因和蛋白表达，减少NO产生。