hsa-miR-214-3p对宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:探讨hsa-miR-214-3p对宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响以及可能的作用机制。方法:将hsamiR-214-3p mimics/inhibitor转染SiHa细胞,分析过表达和下调内源性hsa-miR-214-3p的表达对SiHa细胞增殖、迁移、凋亡的影响。用TargetScanHuman7.1、Pictar、miRanda、miRTarBase以及DAVID数据库进行靶基因预测和富集通路分析。结果:hsa-miR-214-3p在宫颈癌细胞中呈高表达;过表达hsa-miR-214-3p后,细胞的增殖和克隆形成能力明显增强(P<0.05);而当抑制内源性hsa-miR-214-3p的表达后,细胞的增殖能力则明显减弱(P<0.001),流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示SiHa细胞的凋亡比例明显上升(P<0.05),Western Blot的结果显示Bcl2蛋白的表达显著下降(P<0.05);过表达hsa-miR-214-3p和抑制内源性hsa-miR-214-3p表达对SiHa细胞的迁移均没有显著的影响(P>0.05);生物信息学分析结果显示,hsa-miR-214-3p的靶基因主要富集在磷脂酰肌醇信号系统以及Wnt信号通路等。结论:过表达hsa-miR-214-3p可以促进宫颈癌细胞的增殖;抑制内源性hsa-miR-214-3p的表达可以抑制SiHa细胞的增殖并促进细胞凋亡;hsa-miR-214-3p可能通过调节Bcl2基因的表达来调控SiHa细胞的凋亡进程。上述结果为宫颈癌分子机制的研究提供了新线索,同时也为宫颈癌的临床诊断与治疗提供潜在靶点。     

基于系统药理学探讨莪术醇调控铁死亡和细胞自噬的作用机制

目的 探讨莪术醇与铁死亡和细胞自噬的潜在关联。方法 利用Pharm Mapper数据库筛选出莪术醇作用靶点,利用各种已知的相关数据库,建立铁死亡、细胞自噬相关靶点数据库,利用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,对其中的关键靶点使用DAVID数据库进行富集分析。结果 获得莪术醇作用靶点152个,铁死亡靶点259个,细胞自噬靶点796个;莪术醇主要通过PTGS2、ALB、MAPK1、MAPK8、MAPK14靶点调控铁死亡过程,莪术醇主要通过HSP90AA1、MAPK1、MAPK8、ALB、NOS3靶点调控细胞自噬过程,莪术醇主要通过ALB、MAPK1、MAPK8靶点调控铁死亡和细胞自噬过程。结论 莪术醇可能通过调控铁死亡和细胞自噬发挥药理作用。     

长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞的分子机制

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。 方法 培养正常宫颈细胞Ect1/E6E7和宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski。将SiHa随机分为对照（NC）组、si-con组、si-DLX6-AS1组、PCDNA组、PCDNA-DLX6-AS1组、miR-con组、miR-103a-3p组、si-DLX6-AS1+anti-miR-con组、si-DLX6-AS1+anti-miR-103a-3p组。RT-qPCR检测各组细胞中miR-103a-3p和 DLX6-AS1表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测 DLX6-AS1和miR-103a-3p的靶向关系。 结果 与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中DLX6-AS1表达水平升高,miR-103a-3p表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。干扰DLX6-AS1表达或miR-103a-3p过表达后,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,迁移、侵袭数量减少,CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平降低,Bax、Cleaved caspase-3表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时抑制miR-103a-3p和DLX6-AS1表达后,宫颈癌SiHa中MMP-2、MMP-9、CyclinD1、Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。DLX6-AS1靶向调控miR-103a-3p的表达。 结论 干扰 DLX6-AS1表达可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-103a-3p表达有关,可能为宫颈癌的治疗提供新思路和新靶点。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

黄芪皂苷对神经胶质瘤的体外抑制作用及机制研究

目的探讨黄芪皂苷体外抗神经胶质瘤活性及相关机制。方法采用体外培养的SHG44细胞株为研究对象,流式细胞仪检测黄芪皂苷作用后SHG44细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达变化。结果黄芪皂苷可诱导SHG44肿瘤细胞凋亡;黄芪皂苷可引发SHG44肿瘤细胞促凋亡蛋白p53、Bax高表达,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论黄芪皂苷可通过p53信号通路激活和Bcl-2家族介导的细胞色素C途径诱导癌细胞凋亡,从而对神经胶质瘤细胞产生抑制作用。     

蚕梅方抗结直肠腺瘤作用机制的网络药理学分析

目的:基于网络药理学方法探讨蚕梅方(CMF)抗结直肠腺瘤(CRA)潜在的作用机制。方法:CMF由僵蚕、乌梅组成。通过ACQUITY UPLC/QTOF System质谱分析结合Swiss Target Prediction在线工具获取CMF的主要成分及其对应靶点,利用UniProt数据库查询靶点蛋白对应的人类基因;通过CTD、GeneCards、TTD、NCBI gene、DisGeNET等数据库收集有关CRA的靶点,映射至CMF主要成分靶点基因,利用STRING数据库构建交集靶点蛋白相互作用网络(PPI),选出关键靶点基因。将共同靶基因进行GO功能富集与KEGG通路分析。结果:共检索出358个化合物,匹配到290个化合物,筛选得到CMF化学成分49个,PPI网络中共同靶基因9个;KEGG筛选得到8条通路,涉及癌症通路、PI3K-Akt信号通路及p53信号通路等。结论:CMF中叶酸、酪氨酸、环-(苯丙氨酸-酪氨酸)、槲皮素、鼠李素-3-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷等主要成分,通过PI3K-Akt-mTOR通路、p53通路参与调控CRA细胞增殖、促凋亡的作用。     

基于生物信息学及分子对接技术探究补肾健脾与益气养血类中药配伍干预骨质疏松的分子机制研究

目的利用生物信息学及分子对接技术探究补肾健脾与益气养血类中药配伍干预骨质疏松的分子机制。方法通过GEO数据库获取骨质疏松相关芯片,利用R语言进行差异基因表达分析。借助GeneCards、DisGeNET、OMIM、MalaCards、PharmGKB等数据库对骨质疏松靶基因进行检索与筛选,将所得基因与差异表达基因合并去重,从而对骨质疏松疾病靶基因进行预测。运用TCMSP数据库对补肾健脾与益气养血类代表药物熟地黄、山药、黄芪、当归的主要有效成分及作用靶基因进行筛选和挖掘,构建药物与疾病映射靶基因的PPI网络,通过David数据库对药物-疾病关键靶基因进行GO生物过程及KEGG通路富集分析。最终将中药中主要有效成分与关联度较高的关键靶基因进行分子对接。结果中药-有效成分-靶点网络图包含38个有效成分,相对应靶点144个;GEO数据库获筛选得差异表达基因154个,其中上调基因99个,下调基因55个;通过疾病数据库检索并与差异基因合并去重后得到与骨质疏松相关的疾病靶基因3839个;获得映射靶基因98个,关键靶基因14个。补肾健脾与益气养血类中药配伍代表药物熟地黄、山药、黄芪、当归主要通过IL6、VEGFA、TNF、TP53、EGF、JUN、PTGS2等作用于TNF子信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等多个经典信号通路,涉及一氧化氮生物合成过程的正调控、DNA模板转录正调控、酶结合、平滑肌细胞增殖的正调控、基因表达的正调控等多个生物过程。分子对接结果示:关联度较高的主要有效成分在与关键靶基因对接过程中均进入了活性位点,具有很强的结合能力。结论应用生物信息学和分子对接技术可揭示补肾健脾与益气养血类中药配伍干预骨质疏松的分子机制,为骨质疏松的治疗提供了新的思路和方法。     

MiR-886-5p对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成和宫颈癌细胞化学药物治疗的影响

目的 探讨microRNA-886-5p(MiR-886-5p)对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成及宫颈癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)的影响。方法 应用基因芯片技术检测宫颈癌及其癌周组织microRNA的表达,筛选出MiR-886-5p在宫颈癌组织中高表达。生物信息系技术分析发现miRNA-886-5p靶向P53通路中多个基因的表达。用MiR-886-5p mimics和带有GFP标签的MiR-886-5p过表达载体稳定转染高危型人乳头瘤病毒(human papilomavirus,HPV16)阳性的永生化人宫颈鳞状上皮细胞H8细胞,应用Western blotting方法检测P53和P14的蛋白表达情况;应用平板克隆形成技术,观察对细胞克隆形成的影响。在宫颈癌SiHa细胞中,加入化疗药物紫杉醇和VP16后,应用real time RT-PCR技术,检测MiR-886-5p的表达情况。结果 过表达 MiR-886-5p后,H8细胞的克隆形成率明显高于阴性对照组,并且降调P53通路中P14和P53蛋白的表达。加入化疗药紫杉醇和VP16后,SiHa细胞中MiR-886-5p表达明显升高。结论 MiR-886-5p与宫颈鳞状细胞增生相关,它降调P14和P53两种蛋白的表达,且与宫颈癌细胞化疗抵抗相关。     

基于网络药理学和分子对接研究金银花-黄芪药对治疗骨髓炎的分子机制*

目的运用网络药理学与分子对接的方法探索金银花-黄芪药对治疗骨髓炎可能的作用机制，为临床用药提供科学依据。方法 在TCMSP平台内检索金银花、黄芪的生物活性成分并进行筛选，同时在蛋白质数据库和相关基因数据库中检索骨髓炎的潜在靶点，构建Venny图寻找共同靶点；运用Cytoscape软件构建“药物成分-靶点-疾病”复杂网络关系图，通过Bisogenet软件、CytoNCA软件和Metascape数据库等进行蛋白互作关系分析、靶点基因功能富集分析和信号通路分析，并使用分子对接软件(AutoDock)将核心靶点与化合物进行分子对接，使用绘图软件Pymol将结果可视化。结果 本研究共纳入金银花的有效成分236种，黄芪有效成分87种，预测出可能的共同靶点21种。通过富集分析，显示金银花-黄芪药对中的有效成分能够影响多种蛋白质的表达，这些蛋白质又与骨髓炎的发生发展密切相关。分子对接结果显示金银花-黄芪药对的有效成分和靶点蛋白能够自发结合。结论 金银花-黄芪药对可从抗氧化应激、提高免疫力、减少细胞凋亡、抗炎抗菌4个途径发挥治疗作用，为治疗骨髓炎和新药开发提供了理论依据。     

乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖迁移和诱导细胞凋亡的研究

目的 研究乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人宫颈癌SiHa细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移能力和侵袭能力,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的表达情况。结果 乳浆大戟对人宫颈癌SiHa细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人宫颈癌SiHa细胞,凋亡指数和凋亡率均显著上升,均有时间和浓度依赖性。Transwell法检测显示,乳浆大戟提取液处理后的SiHa细胞,迁移能力和侵袭能力显著下降。分光光度法检测发现,乳浆大戟处理后的SiHa细胞中,caspase-3和caspase-9均表达增强。结论 乳浆大戟提取液具有抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用通路有caspase-3和caspase-9的参与。     

基于网络药理学探讨三物白散治疗胃癌的分子机制及初步验证

目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散潜在靶点与胃癌靶点相匹配,获得三物白散抗胃癌的作用靶点,使用STRING数据库对作用靶点进行蛋白互作分析,构建PPI网络,并进行拓扑分析筛选核心靶点;用R语言对作用靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析;采用Auto Dock Vina软件对核心靶点与对应活性成分进行分子对接;运用qPCR验证三物白散对胃癌细胞SGC-7901中Caspase-3、Caspase-7作用靶点的调控作用。结果经筛选获得三物白散活性成分17个,三物白散作用靶点84个,经拓扑分析得到12个核心作用靶点,包括TP53、AKT1、MAPK1、JUN、CASP3等。三物白散作用靶点涉及PI3K-AKT、p53、HIF-1、IL-17等多条信号通路,通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、调节缺氧及炎性微环境发挥抗肿瘤作用。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点有良好的结合能力。体外实验结果证实,三物白散可上调凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-7的表达,这在一定程度上证实了网络药理学预测及指导实验设计的可靠性。结论本研究结果体现了三物白散多成分、多靶点、多通路的治疗特点,系统地揭示了其抗胃癌的药效物质、核心靶点和信号通路,为后续深入研究作用机制提供参考。     

掌叶半夏主要成分对子宫颈癌细胞生长的抑制作用

 目的 观察掌叶半夏主要成分对子宫颈癌细胞活性、形态和超微结构、细胞周期和凋亡的影响。方法 在子宫颈癌细胞SiHa的培养基中加入不同浓度的β-谷甾醇和/或掌叶半夏总蛋白培养1~7 d,采用MTT比色法检测细胞的活性。采用倒置相差显微镜、扫描和透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,流式细胞术检测β-谷甾醇对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa的活性表现出明显的抑制作用,且具有时间、剂量依赖关系,掌叶半夏总蛋白对SiHa细胞的活性无显著影响。与对照组比较,20 μmol/L的β-谷甾醇使SiHa细胞出现S期聚集、凋亡和坏死细胞增加,细胞形态和超微结构发生显著改变。结论 掌叶半夏总蛋白对SiHa细胞活性的抑制作用不明显,β-谷甾醇能抑制人子宫颈癌细胞的活性,使细胞周期聚集在S期,诱导少量细胞凋亡和坏死,对细胞的形态和超微结构有显著的影响。因此,β-谷甾醇有希望成为一种安全低毒的抗子宫颈癌药物。     

MiRNA-381 抑制肾癌侵袭能力及其分子机制

目的：研究miRNA-381对肾癌侵袭的抑制作用,并探索其机制。方法：上调miRNA-381表达后,观察 miRNA-381对肾癌细胞侵袭的抑制作用。通过miR数据库starBase研究miRNA-381靶基因,再通过双荧光素酶实验验 证。分析miRNA-381及相应靶基因在细胞和组织水平的表达丰度。结果：转染miRNA-381后,其表达增加,跨膜细胞 数目显著下降,细胞侵袭力受抑制。生物信息学分析显示miRNA-381靶基因为CREB绑定蛋白(CREB binding protein, CBP)、β-catenin和淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer binding factor-1,LEF-1);包含野生型靶基因3'-非编码区载体组的 荧光素酶活性明显降低。实时定量PCR显示肾癌细胞中miRNA-381低表达,在高转移潜能肾癌细胞株786-OHM中表达 更低;相反,在细胞、组织水平miRNA-381靶基因CBP,β-catenin与LEF-1表达均增高。结论：MiRNA-381可抑制肾癌 细胞的侵袭能力,其机制可能是通过CBP,β-catenin和LEF-1实现的。     

Overexpression of Bcl-2 partly inhibits apoptosis of human ce rvical cancer SiHa cells induced by arsenic trioxide

ＳｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｆｒｏｍｔｈｅＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅＳｈａｎｇｈａｉＳｅｃｏｎｄＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ (Ａｓ2 Ｏ3)ｉｓａｎｉｄｅａｌｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ (ＡＰＬ)ａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＮＢ4ｃｅｌｌｓ 1 3　Ｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒ…     

IDO基因转染对裸鼠体内宫颈癌种植瘤生长的影响

 目的 通过建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,研究吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）在裸鼠体内对人宫颈癌细胞的生长促进作用。方法 IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人宫颈癌SiHa细胞。应用Western blot检测IDO在SiHa、SiHa/Mock 和SiHa/IDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3种肿瘤细胞体外生长速度。种植3种肿瘤细胞至裸鼠皮下,比较其在裸鼠体内的生长速度。结果 IDO蛋白在SiHa/IDO细胞中表达阳性,在SiHa和SiHa/Mock细胞中无表达。3种肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异（P＞0.05）。3周后接种SiHa/IDO细胞的肿瘤与接种SiHa和SiHa/Mock细胞的肿瘤相比生长迅速,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IDO可作为宫颈癌评价预后的指标之一,也可能是宫颈癌基因治疗潜在的靶点。     

LGR5在宫颈癌发生中的作用及机制初探

目的:研究富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)在宫颈癌发生中的作用及机制.方法:分别采用免疫组化、Western blot检测LGR5、β-链蛋白(β-catenin)在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达,分析LGR5与宫颈癌临床病理特征、β-catenin的关系;通过肿瘤球形成试验观察LGR5对宫颈癌发生的影响.结果:LGR5、β-catenin在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的阳性率分别为17％(5/30),65％(11/17),84％(54/64)以及13％(4/30),53％(9/17),92％(59/64),差异均具有统计意义(P<0.01).LGR5表达与宫颈癌病理分级相关,而与患者年龄、临床分期及淋巴转移无相关性.宫颈癌组织中β-catenin与LGR5的表达呈显著正相关(r=0.69,P<0.01).LGR5过表达的人宫颈鳞癌细胞(SiHa细胞)肿瘤球形成率高于绿色荧光蛋白(GFP)对照组(P<0.01),差异具有统计学意义.结论:LGR5促进宫颈癌的发生,其机制可能与β-catenin高表达相关.     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

Wnt/β-catenin信号传导途径在肺癌细胞A549中的作用

目的 研究Wnt/β-catenin信号传导途径在肺腺癌细胞系A549中的激活及其作用.方法 用不同浓度的GSK-3β抑制剂Licl作用A549细胞,采用免疫组化法对β-catnin的细胞内表达定位,采用MTT细胞增殖实验观察细胞增殖活性,用克隆形成实验观察克隆形成能力,用Western blot检测β-catenin和干细胞分子标志OCT-4的表达.结果 10mmol/L Licl作用24h,A549细胞中的β-catenin表达增加并出现核转移,同时增殖能力与克隆形成能力增强,干细胞标记蛋白OCT-4的表达增加.结论 Wnt/β-catenin信号通路在维持A549细胞增殖和克隆形成能力及增强OCT-4的表达方面有着重要作用,可为肺癌治疗提供新的靶点.     

miR-519d 过表达促使宫颈癌SiHa细胞基因表达谱发生改变

目的分析miR-519d转染前后人宫颈癌SiHa细胞基因表达谱的变化。方法向人宫颈癌SiHa细胞中转染模拟物上调细 胞内miR-519d的表达,采用人全基因组表达谱芯片筛选其对细胞基因表达谱的影响,结合生物信息学软件进行靶基因预测,确 定miR-519d的候选靶基因,采用qRT-PCR进行验证。结果miR-519d表达上调后,共筛选到差异表达基因5172个,其中上调基 因2476个,下调基因2796个。结合生物信息学软件进行靶基因预测,共确定164个miR-519d的候选靶基因。随后,对上述基 因进行KEGG信号通路分析,采用STRING和pSTIING在线数据库构建候选基因编码蛋白的互作网络、预测转录相关和物理 相关关系,发现了一些重要的节点分子。最后,采用qRT-PCR结果对部分关键基因进行了验证,与芯片结果基本一致。结论 miR-519d过表达促使人宫颈癌SiHa细胞的基因表达谱发生了显著地改变,结合生物信息学软件获得了164个候选靶基因,为 系统、全面地阐明miR-519d在宫颈癌中的作用及其分子机制提供了重要的实验依据。