骨髓和脐血间充质干细胞改善肌营养不良患者肌力的临床观察

目的 观察骨髓和脐血间充质干细胞双移植方案治疗进行性肌营养不良(PMD)患者的安全性和有效性.方法 2007年6月至2008年6月对经血清酶学、肌电图、基因分析、肌肉活检、肌肉磁共振成像(MRI)确诊的82例PMD患者采用干细胞双移植方案进行治疗.采用自身治疗前后对照方法进行研究,随访3～12个月.治疗方法:①骨髓间充质干细胞(BMSC):经双侧髂后上脊穿刺采集骨髓80～150 ml,Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞并诱导分化为BMSC.②人脐血间充质干细胞(CB-MSC):采集脐带血80～160 ml,CB-MSC制备过程同BMSC.③干细胞移植术:收集BMSC和CB-MSC,制备成1×108/ml BMSC细胞悬液和1×107/ml CB-MSC细胞悬液,分次移植于患者的四肢肌肉内和静脉内.移植后3、6、9、12个月观察患者日常生活活动能力评价(ADL)、临床分级疗效评定、酶学、肌电图、肌肉MRI变化.结果 82例患者干细胞移植后3、6、9、12个月进行临床分级疗效评定,显效31例(37.8%),有效37例(45.1%),无效14例(17.1%),总有效率为82.9%.70例患者(85.4%)肌力提高,肢端温暖、食欲改善、动作灵活、体重增加.72例患者ADL评分增加(87.8%),治疗前后结果差异有统计学意义(P<0.01).干细胞移植后LDH降低,差异有统计学意义[(475±223)u/L比(410±216)u/L,P<0.05,t=6.650],肌酸激酶[(2952±2259)u/L比(2841±2092)u/L,P=0.223,t=1.094]、肌酐[(26±12)μmol/L比(25±11)μmol/L,P=0.306,t=1.029]轻度降低,但差异无统计学意义.干细胞双移植方案实施中儿童患者依从性好,未发生不良反应及并发症.结论 干细胞双移植方案治疗进行性肌营养不良可使82.9%的患者获得临床症状改善,运动功能及肌力提高,安全性好,无排斥反应,是一种治疗进行性肌营养不良的新手段.     

骨髓间充质干细胞移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症344例临床疗效分析

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(MSCs)及脐带间充质干细胞移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症的临床疗效.方法 2007年6月～2008年6月该科室应用自体MSCs移植对344例杜氏型肌营养不良症患者进行治疗,采用治疗前后对照方法进行研究.骨髓间充质干细胞制备:对344例患者皮下注射粒细胞集落刺激因子,剂量为每日每公斤体重5～10μg,动员骨髓干细胞,共4 d,4 d后采集骨髓,将采集的骨髓通过Percoll梯度离心,提取单个核细胞(MNC),总量为(5.72±1.89)X108,CD34+细胞(2.67±1.22)%,CD133+细胞(1.79±0.73)%.培养骨髓单个核细胞7～10d,最终得到骨髓间充质干细胞含量为(1.90±0.96)X10s.应用四肢肌肉内注射的方式进行干细胞移植.移植后3、6、9、12个月观察患者酶学、肌电图、肌肉MRI变化,评价干细胞移植前后日常生活活动能力(ADL)、临床分级.结果 344例患者中292名患者四肢肌肉力量均有所改善.总有效率为85.00%,好转患者中199名患者四肢力量明显好转,明显好转率为58.00%;93名患者四肢肌力较前略好转,好转率为37.00%.结论 自体骨髓干细胞移植可使杜氏型肌营养不良症患者肌力得到改善,生活质量得到提高.     

异基因造血干细胞移植联合间质干细胞输注治疗骨髓纤维化转化的急性髓系白血病一例并文献复习

目的 探讨异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)联合间质干细胞(MSC) 输注治疗骨髓纤维化转化的急性髓系白血病的临床效果.方法 1例骨髓纤维化转急性髓系白血病患者接受了HLA全合Allo-HSCT,同时联合输注供者来源体外扩增的MSC.预处理方案为氟达拉滨+马利兰+环磷酰胺.移植物抗宿主病(GVHD) 预防采用环孢菌素A(CSA)+短程甲氨蝶呤(MTX)+抗人T细胞免疫球蛋白(ATG).结果 输注供者外周血造血干细胞数为11.92×108/kg、CD+34细胞为3.73×106/kg、MSC剂量为1.1×106/kg(受者体质量).移植后中性粒细胞＞0.5×109/L和血小板＞20×109/L的时间分别为 14 d和16 d.+30 d时骨髓染色体为100%供者源,+40 d时出现皮肤I度GVHD.结论 异基因造血干细胞与骨髓MSC共移植治疗骨髓纤维化转化的急性髓系白血病安全性好,造血功能恢复快.     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足15例疗效观察

目的观察自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床疗效。方法应用自体骨髓干细胞移植治疗15例糖尿病足患者,采集自体骨髓200～250ml,用淋巴细胞分离液以梯度离心法分离,配成单个核细胞悬浊液约50ml供移植用,计数单个核细胞总数为(4～8)×108/ml,行下肢缺血肌肉局部注射。结果大部分患者肢体疼痛缓解,冷感、间歇性跛行均有不同程度的改善,踝肱指数(ABI)有不同程度的提高,7例患者7条下肢移植3个月后行数字减影血管造影(DSA)复查有新侧支血管形成。结论自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足是一种简单、安全、有效的方法,能提高患者生活质量。     

自体分选干细胞治疗15例Duchenne型肌营养不良症的临床观察

目的 Duchenne型肌营养不良(Duchenne muscular dyswophy,DMD)是一种X链锁隐性遗传致死性肌病,抗肌萎缩蛋白(dystrophy)缺失如何引起肌肉变性、坏死具体机制不清,迄今尚无有效的治疗方法.该文试图探索应用自体分选干细胞治疗DMD的疗效.方法 从2008年9月至今该科收治15例DMD患者,男14例,女1例;年龄6～23岁;病程2～18年.13例DMD患者有不同程度"鸭步"行走,全身骨骼肌进行性无力,萎缩,腓肠肌纤维化致假性肥大,2例关节畸形挛缩.全部患者肌电图示肌源性损害,多项肌酶升高,尤以磷酸肌酸激酶(CK)显著,可高达10 600u/L,3例基因检测异常.自体干细胞采集15例中因4例体重不足20Kg者而直接采集骨髓;11例经G-CSF动员后COBE机采集外周血,CD_(34)~+干细胞经Clini MACS仪器分选,获得(1.0～5.6)×10~7的CD_(34)~+细胞,流式细胞仪检测阳性率80%.用分选CD_(34)~+细胞对患者做肌肉局部点状注射和细胞静脉回输;2个月后可再次治疗.结果 治疗后随诊1～5个月,13例患者行走有明显改善,腓肠肌纤维化程度减轻,局部变软,全身力量增加,关节肌肉训练度提高.2例挛缩肢体有松弛,疼痛有好转,在帮助下可以肢体活动.增高的多项肌酶下降,CK可下降1 000～5 000u/L不等.肌电图将在半年后复查.结论 应用自体分选干细胞为临床治疗DMD寻找到一条新途径,安全可行,其疗效可能与分选干细胞更利于提高调节自身免疫能力,使受损肌细胞再生修复有关.     

骨髓基质细胞源神经干细胞对局灶性脑缺血大鼠行为及神经细胞凋亡的动态影响

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)源神经干细胞对局灶性脑缺血大鼠行为及神经细胞凋亡的影响.方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.32只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血骨髓基质细胞移植组和缺血骨髓基质细胞源神经干细胞移植组.分别于移植后1d、7d、14d、28d对大鼠进行神经功能缺损评分和空间学习能力检测,并在移植后14d和28d分别应用TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果移植后7d各组神经功能均有不同程度的恢复,BMSCs源神经干细胞移植组大鼠的神经功能评分[(6.3±2.32)分]显著优于BMSCs移植组[(7.1±1.88)分].移植14d后可提高大鼠空间学习能力,且各时间点BMSCs源神经干细胞移植组的空间学习能力改善优于BMSCs组.随移植后时间的延长,BMSCs源神经干细胞移植组和BMSCs移植组的神经功能和空间学习能力更趋改善.BM-SCs源神经干细胞移植组缺血边缘区凋亡细胞数[(4.8±1.12)个]明显少于BMSCs移植[(6.3±2.73)个].结论骨髓基质细胞源神经干细胞移植可改善大鼠神经行为、减少神经细胞凋亡,显著优于BMSCs移植.     

经动脉自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死

目的 观察经动脉自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死的临床效果.方法 30例股骨头缺血性坏死患者在无菌条件下,从髂后上棘抽取骨髓150～200 ml,在体外分离纯化骨髓源性干细胞并制成10 m1细胞悬液,其单个核细胞计数为3.6×108～1.8×1011 ml,采用流式细胞仪技术检测CD34+的干细胞数为106～109 ml,在数字减影血管造影术(DSA)下行股动脉穿刺,导管超选择至闭孔动脉及旋股内外侧动脉,将干细胞悬液缓慢匀速注入动脉内.结果 30例患者随访18个月,根据综合疗效评定标准,治愈12例,显效11例,有效7例,总有效率达100%.结论 经动脉自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死可缓解临床疼痛,改善恢复关节功能,疗效肯定,是一种值得推广的治疗方法.     

骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗对Duchenne肌营养不良(DMD)模型鼠mdx鼠病态肌肉的影响.方法 分离培养正常小鼠MSCs,局部肌肉注射移植入DMD型模型鼠mdx鼠肌肉,16周后观察mdx鼠肌肉肌力、肌肉病理学改变及dystrophin蛋白表达变化.结果 MSCs移植16周后mdx鼠肌纤维dystrophin蛋白表达增加,肌力好转,核中移明显改善.结论 MSCs移植可缓解mdx鼠肌肉病理改变,但移植效率的提高需要进一步研究.     

干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症手术前后肌电图演变对照研究

目的:观察干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症的疗效在肌电图上的表现.方法:对46例自愿接受干细胞移植的假肥大型肌营养不良症患者予骨髓血干细胞及脐血干细胞联合移植,术前检查肌电图,术后半年复查,进行前后对照评估.结果:患者术后复查肌电图显示各检测值均有不同程度改善.结论:干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症是一种有效的手段,在肌电图上有比较明确的显示.     

自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化肝腹水患者的临床效果观察

目的:观察自体骨髓干细胞(BMSCs)移植治疗肝硬化肝腹水患者的临床效果。方法:36例肝硬化腹水患者抽取自体骨髓160 ml,抗凝分离处理后在数字减影血管造影机(DSA)下,给患者注入骨髓干细胞悬液约1.0×109/ml,并于移植前和移植后第4周、第8周、第12周检测患者外周血血清谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBi L)、血清谷丙转氨酶(ALT)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB);患者临床表现及不良反应。结果:移植后的第12周,患者的血清各项指标与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化肝腹水患者可获得较好的临床效果。     

间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】 本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用?【方法】 体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记?通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况?致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况?【结果】 体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子?动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏?造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12 ~ 16天全部死亡,生存中位数时间是14 d?【结论】 成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入?     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

间充质干细胞在器官移植中的作用研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一种纤维样成体干细胞,具有很高的可塑性,能分化成多种细胞并具有很高的自我更新能力。它不仅有免疫赦免特性,还具有免疫调节作用,可抑制同种异体免疫反应。在自身免疫性疾病的治疗、器官移植方面起着重要作用,具有十分诱人的前景,也是当前研究的热点和焦点。     

间充质干细胞双向调节肿瘤疾病

间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是具有强大增殖能力和多向分化潜在能力的祖细胞,根据来源不同,可以分为骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞。MSCs有望成为用于细胞治疗和促进组织修复的候选细胞。然而,MSCs 在某些情况下对肿瘤细胞的促进作用也不能忽视。该文回顾近年来关于MSCs 双向调节肿瘤细胞的文献,从中探究引起肿瘤细胞的增殖,迁移,侵袭产生抑制或者促进作用机制和规律,为科学合理地开展MSCs 的临床试验提供参考。     

胎盘间充质干细胞样细胞的培养及生物学特性的实验研究

目的本研究拟从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells, PMSCs),研究其生物学特性,探讨其在移植治疗方面的可行性.方法将胎盘组织经胶原酶消化和贴壁培养获得的基质细胞,用免疫荧光标记和免疫细胞化学检测细胞表型,用活细胞记数和碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测其增殖能力,用叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole ,BHA)、N2培养基等对培养的细胞分别向神经和脂肪方向诱导分化,继而采用免疫细胞化学等方法对分化的细胞进行鉴定.结果由胎盘组织中分离获得了一群具有与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)相似的形态和细胞表面标志的细胞:该群细胞增殖能力强;表达CD29、 CD44、CD105 (SH2)、ASMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原以及免疫应答负性调控分子PDL-1,但不表达CD11b、 CD34、CD45、CD19、CD106 (VCAM-1)、CD117、HLA-DR、vWF、MySM、HLA-DR,以及免疫应答正性调控分子CD40、CD40L、CD28、CD80和CD86;可诱导表达神经元标志神经微丝(neurofilament,NF)和星型胶质细胞标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilament acidic protein,GFAP),并且这些细胞表达神经干细胞标志巢蛋白(nestin),向脂肪分化的细胞苏丹Ⅲ染色阳性.结论本实验中获得的胎盘基质细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的细胞形态、表面标志和多向分化潜能的特点,它增殖能力强、来源方便、丰富,无伦理学限制,是良好的细胞移植来源.     

骨髓间充质干细胞向肌管状结构分化的动态

 【目的】探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化的最佳条件和体外分化的过程。【方法】体外培养Sprague-Dawley（SD）大鼠的MSCs，传代至P3、P6或P12；用5-氮胞苷诱导，比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率，观察诱导后细胞分化过程中形态学的变化，并且用cardiactroponinⅠ、desmin和α-sarcomeric actin抗体鉴定分化的心肌样细胞。【结果】P12代较P3或P6代骨髓MSCs易向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构。经10μmol／L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为（27±2．5）％，20μmol／L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为（17±2．2）%，其它诱导浓度和诱导时间均不能诱导细胞分化；50g（幼年鼠）体重组细胞分化率为（27±2．8）％，150g（成年鼠）体重组细胞分化率为（15±2．9）％，各组的差异有统计学意义。【结论】5-氮胞苷诱导MSCs向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构，年幼的SD大鼠MSCs易向心肌样细胞分化。     

Essential Role of Chinese Medicines in Mesenchymal Stem Cells Transplantation for Treatment of Ischemic Stroke

Ischemic stroke accounts for the majority of all strokes and has been primary causes of long-term disability and mortality in worldwide. Mesenchymal stem cell (MSC) therapy suggests significantly improved effects on neurological functional outcome, neurogenesis, angiogenesis, blood-brain barrier permeability, inflammatory injury, neuroprotection and so on, following stroke. However, the occurrence of adverse effects results in restriction of the therapy. Chinese medicine accumulates abundant clinical experiences on stroke for over two thousand years, and some formulae and active ingredients of Chinese medicines have presented obvious efficacies in clinical treatment. Therefore, based on Chinese medicine theory, we provide some ideas of screening agents for combination treatment of Chinese medicines and MSC for ischemic stroke, and summarize the potentials of Chinese medicines in MSC treatment and analyze the feasibilities of Chinese medicines against side effects of MSC therapy. Consequently, we propose Chinese medicines combing with MSC should be a promising approach to clinical stroke treatment in future.     

人胚胎骨髓间充质干细胞的体外培养

目的 摸索体外培养人胚胎骨髓间充质干细胞的方法.方法 采用含5%胎牛血清的MEM(modified Eagle's medium)培养基培养人胚胎骨髓间充质干细胞,用流式细胞仪检测培养获得的细胞中人胚胎骨髓间充质干细胞含量.结果 培养获得的细胞中人胚胎骨髓间充质干细胞含量达93%.结论 本研究方法培养获得的人胚胎骨髓间充质干细胞纯度高,细胞活性好.