小鼠大脑乙酰胆碱酯酶提取、测定优化及异喹啉类生物碱乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的优化小鼠大脑乙酰胆碱酯酶(AChE)提取、测定方法,评价异喹啉类生物碱的AChE抑制活性。方法采用蔗糖密度梯度离心及Ellman法评价不同提取方法对小鼠大脑AChE亚型表达及提取影响,优化测定方法,并在此基础上对异喹啉类生物碱的AChE抑制活性及构效关系进行考察。结果匀浆+超声、匀浆提取法对大脑AChE亚型表达一致,但前者AChE提取效果较优。随着反应温度、显色时间增加,药物AChE抑制活性增强,但显色时间超过30 min时,药物AChE抑制活性趋于平缓。随着大脑裂解液稀释倍数增加,药物AChE抑制活性未明显变化,且稀释10～20倍时,空白组AChE吸光度值为0.6～1.5。异喹啉类生物碱具有较好AChE抑制活性,而叔胺型生物碱AChE抑制活性降低。结论匀浆联合超声对小鼠大脑AChE有较好提取效果;反应温度37℃,显色时间30 min,大脑裂解液稀释10～20倍时,药物AChE抑制活性灵敏度、准确性好。异喹啉类生物碱的AChE抑制活性与其季胺型结构密切相关。     

茶树油对乙酰胆碱酯酶的抑制作用[英]／Mills C…∥J Pharm Pharmacol

许多除虱制剂通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)产生杀虱及其虫卵作用。茶树油是治疗头虱的外用制剂中的活性组分。作者研究了茶树油是否至少部分地通过抑制AChE而产生除虱作用的。     

从噬菌体随机十二肽库中筛选乙酰胆碱酯酶的抑制肽

目的从随机肽库中筛选乙酰胆碱酯酶（ACHE）的抑制性多肽。方法以人AChE作为靶标，应用噬菌体随机12肽库进行筛选，经过3轮筛选，对阳性克隆进行测序并进行序列分析及抑酶活性测定。结果筛选得到6个能与人AChE较强结合的噬菌体克隆，其中有4个克隆可以抑制AChE的酶活性，其保守序列为W（S／P）HY。结论通过噬菌体肽库技术能够筛选到抑制人AChE活性的多肽，为进一步研究AChE的多肽抑制剂奠定了基础。     

银杏叶提取物对点燃模型幼鼠学习记忆及海马乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶活性的影响

目的研究银杏叶提取物（EGb）对点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能,对大鼠海马乙酰胆碱酯酶（AChE）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）活性的影响。方法21、35日龄SD大鼠各40只,经初筛后随机分为生理盐水对照组、点燃对照组及EGb大、中、小剂量治疗组,采用戊四氮（PTZ）诱导幼鼠点燃模型,以Y型电迷宫及生化检测方法,观察用药前后大鼠学习记忆功能和海马AChE、ChAT活性的变化。结果EGb呈剂量依赖性显著改善实验大鼠的学习记忆能力,并显著抑制海马AChE活性、增强ChAT的活性。结论EGb可以通过抑制功能脑区AChE活性、增加ChAT的活性,增强中枢胆碱能神经系统的功能,改善发育期癫痫大鼠学习记忆功能。     

从丹参中分得具乙酰胆碱酯酶抑制活性的二萜类化合物

作者从丹参Salvia miltiorrhiza Bung丙酮提取物中分离到4个具乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性的二萜类化合物,并以改良的Ellman方法为导向,研究了它们对AChE的抑制活性。丹参干燥根于55℃用丙酮提取4h,减压回收溶剂至干。提取物经VLC硅胶柱层析,依次用甲苯、甲苯-二氯甲烷(1:1)、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脱,通过TLC检测得到6个部位F1～F6。将显示AChE抑制活性的F1和F2合并,以CC硅胶柱层析得4个部位     

大鼠蓝斑衰老变化——Ⅱ.细胞乙酰胆硷酯酶活性定量研究

用二异丙基氟磷酸(DFP)控制的乙酰胆硷酯酶(AChE)活性的药物组织化学方法,研究衰老大鼠蓝斑核(LC)含AChE神经元胞体在被DFP抑制后重新产生AChE量的变化。对5只3个月龄和6只26月龄大鼠LC的AChE细胞,用图像分析仪测量细胞灰度(酶活性浅染或深染后的透光度),细胞数目及细胞大小。三种参数分别列表与图加以比较。结果,老年大鼠LC胞体产生AChE速率减低,AChE活性明显减弱,AChE细胞数显著减少,细胞截面积也变小。     

茶树油对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

许多除虱制剂通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)产生杀虱及其虫卵作用。茶树油是治疗头虱的外用制剂中的活性组分。作者研究了茶树油是否至少部分地通过抑制AChE而产生除虱作用的。以GC一MS分析所试4种茶树油样     

5-氨甲基咔唑衍生物的设计、合成及抗阿尔茨海默病活性

以5-氨甲基咔唑为先导物,在其母环及5-位氨甲基的氮原子上引入不同的取代基,设计、合成了一系列咔唑衍生物,测试了其乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BChE)抑制活性,以及体外神经元细胞保护活性,并总结了构效关系。其中,化合物8a具有AChE/BChE双重抑制活性,同时还能够有效保护PC12细胞免受Aβ造成的损伤,展现出良好的开发前景。     

应用亲和层析分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶的初步研究

目的 分离纯化小脑乙酰胆碱酯酶（AChE)。材料和方法 采用ConA和B10亲和层析法纯化小人脑AChE，以纯化的人小脑AChE为免疫原，免疫6只BALB/c小鼠制备小鼠抗人小脑AChE抗血清，并检测其与电鳐AChE和人红细胞膜AChE的交叉免疫反应性。结果 SDS-PAGE还原状态下呈一条主带，相对分子质量为67000，比活性为373U/mg。结论 免疫亲和层析法操作简单，可快速纯化人小脑AChE。     

应用图像分析仪对衰老大鼠红核和黑质乙酰胆硷酯酶定量分析研究

应用图像分析仪对不同月龄大鼠中脑红核和黑质的形态及乙酰胆硷酯酶(AChE)活性的定量分析发现:(1)红核内有大量中等度AChE活性细胞;衰老时红核体积缩小,AChE阳性细胞数目减少,活性也明显下降,但灰度值并无明显改变,残余AChE阳性细胞体积并不变小。(2)黑质体积不因衰老而改变,AChE活性却随衰老而减低,尤其是致密部。     

正常儿童红细胞乙酰胆碱酯酶的测定

本文研究了56名正常健康儿童的红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,发现儿童红细胞AChE的活性与性别无关。0.5～6岁儿童的红细胞AChE活性(10.11±0.23单位)与成人组(11.81±0.42)比较,显著低于成人组(t=3.506,P<0.001),而7～12岁儿童的红细胞AChE活性(11.04±0.41),与成人组间的差异不显著(t=1.258,P>0.05),提示中国正常儿童至7～12岁后,红细胞AChE活性达到成人水平     

HRP—AChE双重组化法研究大鼠脊髓小脑束乙酰胆碱酯酶阳性神经元

对脊髓小脑束各群神经元中的AChE阳性及阴性细胞加以研究。对照组2只动物分别单纯显示脊髓内AChE阳性神经元及被HRP标记的脊髓小脑束神经元。结果表明,各群脊髓小脑束起始细胞中,均含有不同程度活性的AChE。约有52％的中央颈核细胞具有较弱活性的AChE;约有55％的背核被标记神经元含有中弱活性的AChE;“脊髓边缘细胞”内有近67％的神经元具有中等以上活性的AChE。各群脊髓小脑束神经元中AChE细胞所占比例及AChE含量各有所不同,这可能与脊髓小脑各束的不同功能有关。     

生姜水提物对血管性痴呆模型大鼠的影响

目的 探讨生姜水提物对血管性痴呆(VD)的治疗作用与机制.方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型对照组,尼莫地平组,生姜水提物高、中、低剂量组.采用反复结扎与开放双侧颈总动脉的方法复制VD模型,Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验测定大鼠空间学习记忆能力,光化学比色法测定大脑皮质和纹状体乙酰胆碱酯酶(AChE)、SOD活性和MDA含量.结果 与假手术组比较,VD对照组大鼠morris空间学习记忆能力和纹状体AChE活性明显降低,皮质AChE活性无明显变化;脑组织SOD活性和MDA含量分别有降低和升高的趋势,但无统计学意义.生姜水提物能明显提高VD大鼠morris定位航行能力和空间搜索能力;显著提高纹状体AChE活性,与模型对照组及石杉碱甲组比较均有显著性差异.对皮质AChE活性无明显影响;生姜高剂量能明显降低MDA含量,升高SOD/MDA比值.结论 生姜具有提高血管性痴呆大鼠学习记忆能力的作用,作用机制与提高胆碱能神经功能和抑制胆碱酯酶活性有关.     

乐果亚慢性染毒对大鼠自发活动的影响

目的探讨有机磷农药乐果90d染毒对大鼠自发活动的影响。方法48只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别使用生理盐水(对照),5mg/kg(低剂量)、10mg/kg(中剂量)和20mg/kg(高剂量)的乐果灌胃给药,每周染毒5d,每天1次,实验周期90d。定期尾静脉采血,测定全血AChE活性,实验结束时随机取半数动物,用DigBehv-LR型自发活动视频分析系统测定其自发活动;其余动物均断头处死,测定脑AChE活性。结果实验期间,各乐果染毒组动物全血AChE活性明显抑制,实验后期有所恢复。实验结束时,低、中、高剂量组脑组织AChE活性分别为对照组的78%、63%和42%,存在剂量-效应关系。大鼠自发活动测试结果显示,随染毒剂量的增加,低、中、高剂量大鼠的总路程、活动时间、平均速度有下降趋势,而休息时间有升高趋势。其中高剂量组的变化最为明显,总路程、活动时间、平均速度同对照组相比分别下降了54.6%、55.3%、54.7%,而休息时间增加了41.3%,同对照组相比都有显著性差异(P<0.05)。对大鼠自发活动指标和全血及脑AChE活性的相关性进行分析,发现染毒大鼠的总路程、活动时间、平均速度和休息时间和脑AchE活性呈显著相关(P<0.05),而与全血AchE活性在统计学上无相关性(P>0.05)。结论乐果亚慢性染毒会使大鼠自发活动降低,这可能同脑组织AChE活性受到长期抑制有关。     

乙酰胆碱酯酶在家兔小脑内的分布

研究了11只家兔小脑内AChE活性的分布。采用改良的经典组织化学技术来显示AChE活性。小脑皮质颗粒层一般有很强的AChE活性,而浦肯野细胞层的分子层的浅部则呈AChE反应阴性。分子层的深部和小脑白质的AChE活性较弱。而且有很多阳性神经元出现在后叶的分子层中,以X小叶最为密集。在小脑白质中,发现5条与正中面相平行的AChE活性较强的纵带。其中蚓状正中面上的正中带出现在除Ⅵ、Ⅶ小叶以外的各小叶中;对称分布的内侧带出现在前叶的Ⅱ到Ⅴ小叶和后叶的Ⅷ、Ⅸ小叶;外侧带只出现在Ⅸc和Ⅸd分叶。小脑中央核显示很强的AChE活性。在颗粒层的胶质细胞和白质中发现有丁酰胆碱酯酶(BuChE)的活性,而且在近颗粒层的白质活性更强。     

脱氧鬼臼毒素对３龄菜青虫头部ＡＣｈＥ、ＡＴＰａｓｅ活性的影响

目的:研究脱氧鬼臼毒素(DOP)对3龄菜青虫的毒杀作用及中枢神经系统AChE、ATPase活性的影响,探讨其杀虫机制.方法:采用小叶碟添加法,测定DOP对3龄菜青虫的毒杀活性,建立染毒模型,用试剂盒测定AChE和ATPase活性.结果:①DOP对3龄菜青虫的毒杀活性表现出浓度、时间依赖性,48 h LC50=151.87 mg/L＞72 h LC50=39.99 mg/L＞96 h LC50=10.60mg/L.②DOP对AChE活性没有明显影响.③高浓度(125 mg/L)组对ATPase活性持续抑制,中浓度(5、25 mg/L)组在24 h时激活,48 h时恢复正常,72 h时保持正常(5 mg/L)或抑制作用(25 mg/L).结论:DOP对3龄菜青虫具有毒杀作用;3龄菜青虫中枢神经系统AChE不是DOP靶标.ATPase可能是DOP的重要靶标之一.     

电针穴位对肠缺血-再灌注大鼠回肠内AChE活性的影响

目的 探讨电针穴位对肠缺血-再灌注大鼠回肠内AChE活性的影响。方法 采用夹闭大鼠肠系膜上动脉造成肠缺血-再灌注损伤模型,以改良Ellman法测定AChE,每日电针双侧“百会”、“风池”、“大钟”及“足三里穴”30min,持续7d和14d,波频率2—20Hz,强度2．0A。结果 实验后第7d,大鼠回肠内的AChE活性在缺血-再灌注组明显低干假手术组,电针组的活性则基本恢复;第14d,缺血-再灌注及电针组的AChE活性恢复。结论 肠缺血-再灌注所致的肠损伤可能与肠内AChE活性有关,电针能提高大鼠回肠内的AChE活性,从而可能对抗肠缺血-再灌注所致的肠损伤作用。     

不同种类和不同品系蚊虫乙酰胆碱酯酶的差异

目的:探讨乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)在不同种类和不同品系蚊虫间的差异,为应用生物化学方法检测蚊虫的抗药性提供依据.方法:以碘化硫代乙酰胆碱为底物,5,5′-二硫-双(2-硝基苯甲酸)为显色剂,测定单个蚊虫AChE,以残杀威为抑制剂测定AChE不敏感性.结果:4种类敏感蚊虫AChE活性,Ⅳ龄幼虫间和3日龄雌成虫间均有非常显著性差异(P<0.01),而且3日龄雌成虫的AChE活性均明显高于其Ⅳ龄幼虫(P<0.01).抗敌敌畏(Rd)、抗残杀威(Rp)品系淡色库蚊AChE活性水平高于敏感(S)品系(P<0.01),抗氯氰菊酯(Rc)品系淡色库蚊AChE活性与S品系相近(P>0.05).Rd、Rp品系淡色库蚊不敏感AChE个体频率高于S品系(P<0.01),Rc品系淡色库蚊不敏感AChE个体频率与S品系相近(P>0.05).结论:测定AChE可用来判断蚊虫抗药性状况,而测定对象宜选择3日龄雌成虫.     

关于胆碱酯酶的检验

生化特性及病理生理 人体有两种胆碱酯酶(hlolinesterase,ChE),乙酰胆碱酯酶和酯酰胆碱酯酶,两者都能水解乙酰胆碱,但生成组织和生理功能各有不同. AChE主要用于诊断有机磷农药中毒和神经性化学武器中毒.中毒后,AChE被抑制,使乙酰胆碱蓄积,引起乙酰胆碱样中毒症状,实验室检测此酶,可以判断中毒轻重,指导治疗及判定疗效.病情严重时,AChE活力可降至"0";治疗有效时,酶活力可迅速恢复.此酶升高还见于精神分裂症、溶血性贫血和巨幼细胞性贫血等.AChE活性在孕育神经管缺陷胎儿的羊水中显著增高.     

K252a预处理对Aβ25～35诱诱导小鼠学习记忆障碍的保护作用

目的探讨混合性的谱系激酶抑制剂K252a预处理对β-淀粉样蛋白25～35（Aβ25～35Ap）诱导的小鼠学习记忆障碍的保护作用及其可能机制。方法56只小鼠平均分4组：K252a预处理组小鼠侧脑室内先后分别注入K252a和凝聚态ABAβ25～35 4.5μL；对照组全程注射生理盐水；模型组先后分别注射生理盐水和凝聚态Aβ25～35；DMSO预处理组先后分别注射DMSO和凝聚态AAβ25～35。给药结束11d后对各组小鼠进行Morris水迷宫实验，并检测小鼠皮层和海马组织乙酰胆碱酯酶（AChE）和胆碱乙酰转移酶（CHAT）的活性。结景定位航行实验发现模型组小鼠的上台潜伏期和游泳距离明显高于对照组（P〈0．01）和K252a预处理组（P〈0．05）。空间搜索实验发现模型组小鼠在平台所在象限中游泳的时间百分比和游泳的距离百分比明显低于对照组（P〈0．05），K252a预处理组的游泳时间百分比与模型组有统计学差异（P〈0．05）。模型组与对照组相比，AChE的活性升高（P〈0．05），ChAT的活性降低（P〈0．05）；K252a预处理组与模型组相比，AChE的活性降低（P〈0．05），ChAT的活性升高（P〈0．05）。结论K252a预处理能够改善Aβ25～35诱导小鼠的学习记忆功能障碍，该作用与其抑制AChE活性和增强ChAT活性有关。