全脊髓匀浆建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型

目的:用全脊髓匀浆(粗制髓鞘碱性蛋白)建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型.方法:Wistar大鼠全脊髓匀浆 完全福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变.结果:实验豚鼠均表现典型的EAE症状;光镜观察见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘改变.结论:全脊髓匀浆加完全福氏完全佐剂成功的诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物廉价易得的优点,是研究多发性硬化理想的动物模型.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型.方法采用双后腿足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆(GPSPH)-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂,辅以注射百日咳疫苗,诱导Wistar大鼠EAE模型.取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织,常规病理切片,HE染色.ELISA法检测血清中抗MBP抗体.结果一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型,临床症状约在造病后10～15d出现.同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度.EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润,在血管周围形成淋巴鞘,但未见脱髓鞘改变.与对照组相比,EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高.结论非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型.发病大鼠除有EAE临床症状外,还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的 为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型。方法 采用双后退足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆（GPSPH）-福氏完全佐剂（CFA）混合乳剂，辅以注射百日咳疫苗，诱导Wistar大鼠EAE模型。取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织，常规病理切片，HE染色。ELISA法检测血清MBP抗体。结果 一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型，临床症状约在造病后10-15d出现。同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润，在血管周围形成淋巴鞘，但未见脱髓鞘改变。与对照组相比，EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高。结论 非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型。发病大鼠除有EAE临床症状外，还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立

目的：利用豚鼠脊髓匀浆建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）的动物模型,为中枢神经系统脱髓鞘性疾病的研究提供实验依据。方法：以豚鼠全脊髓匀浆（ GPSCH）与完全弗氏佐剂（ CFA）的混合乳剂一次性给予大鼠足垫皮下注射,同时大鼠足背注射百日咳杆菌原液,建立EAE模型。结果：在免疫后12天开始出现肢体瘫痪,双后肢拖动等EAE临床症状。光镜下可见脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润,炎性细胞聚集在血管周围呈典型的“袖套”样改变。结论：利用豚鼠脊髓匀浆制备Wistar大鼠EAE模型方法简单,稳定、可靠、发病率高。     

两种方法制备豚鼠脊髓匀浆诱导EAE模型的比较

目的建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1在EAE大鼠中的动态表达。方法两种方法制备豚鼠脊髓匀浆:一种方法不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接将豚鼠麻醉后取豚鼠全脊髓制备匀浆,即非灌注法;另一种方法用磷酸盐缓冲液将豚鼠灌注后,再取豚鼠全脊髓制备匀浆,即灌注法。分别采用上述两种方法制备的豚鼠脊髓匀浆为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型,取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果非灌注组的发病率、临床评分和sVCAM-1的表达显著性升高(P<0.05)。结论采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化的发病机制及治疗奠定了一定的基础。     

豚鼠脊髓匀浆诱发大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是人类中枢神经系统常见的自身免疫性脱髓鞘疾病,其发病机制至今尚未完全阐明.实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)是用于研究MS的模型,本课题应用豚鼠的脊髓匀浆和完全弗氏佐剂(CFA)制成抗原乳剂,再加入百日咳杆菌免疫Wistar大鼠,建立了可靠的EAE模型,报告如下.     

神经生长因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型,探讨神经生长因子（hNGF)对豚鼠EAE的保护作用。方法 豚鼠经一次足跖真皮内注射完全福氏佐剂－豚鼠全脊髓匀浆,诱发EAE疾病;在豚鼠致炎前注射hNGF,观察其对EAE临床症状、发病率及脊髓病变的影响。结果 模型组豚鼠免疫注射后相继出现明显的EAE症状,发病率为9／10。豚鼠在致炎前注射hNGF,可明显控制病情,降低EAE发病率,明显改善脊髓的病理改变,且hNGF的作用呈剂量依赖性。结论 hNGF对实验性自身免疫性脑脊髓炎有显著的保护作用。     

低剂量免疫耐受的EAE大鼠外周免疫器官细胞凋亡研究

材料和方法 实验动物雌性Wistar大鼠，6～8周龄，购于白求恩国际和平医院动物中心。分为口服组15只，对照组15只，正常组6只。EAE模型的制备大鼠四足垫皮内注射豚鼠脊髓匀浆，完全福氏佐剂乳剂，共0．4ml，同时后足跖背面皮内注射百日咳疫苗0．05ml。EAE临床评级参照Kono标准。     

大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的建立大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型.方法采用豚鼠脊髓和福氏完全佐剂混合乳剂一次性注入Wistar大鼠双足垫和尾部,同时腹腔注射左旋咪唑诱导大鼠发生EAE.观察发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变.结果空白对照组大鼠均未出现症状,HE染色大脑白质及脊髓无炎性细胞浸润;Loyez氏染色未见髓鞘脱失;模型组临床症状发生率为87.5%,HE染色见大脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润;Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变.结论用豚鼠脊髓髓鞘蛋白和福氏完全佐剂混合乳剂同时辅以左旋咪唑成功地诱导Wistar大鼠发生急性EAE.     

黄芪注射液对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠IFN-γ的影响

目的探讨黄芪注射液对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠血清IFN-γ表达的影响。方法利用新鲜豚鼠全脊髓匀浆＋完全福氏佐剂免疫Wistar大鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,选用黄芪注射液干预治疗,观察其对大鼠发病率、神经功能评分和病理学改变的影响,并检测血清IFN-γ的水平。结果黄芪注射液治疗组大鼠发病率明显降低,炎性病灶明显减少,血清中IFN-γ表达减少。结论黄芪注射液可以改善EAE大鼠的临床症状,减轻脊髓内炎症反应,其作用可能与减少血清IFN—γ的表达水平有关。     

酶酚酸酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经功能的影响

目的观察酶酚酸酯(MMF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经功能改善及脑脊髓组织的影响。方法用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的完全抗原免疫Wistar大鼠，制备EAE大鼠模型，以生理盐水和完全弗氏佐剂注射的Wistar大鼠作为对照。对照组大鼠7只，造模成功且存活的大鼠为25只，随机分为MMF大剂量组（n=8只）,MMF小剂量组（n=8只）,模型组（n=9只）。连续给药14d，每天观察记录神经功能评分及体重变化，14d后HE染色观察脑、脊髓组织病理变化。结果EAE大鼠的造模成功率为72.1%。与对照组相比，各组EAE大鼠神经功能评分明显增加，体重明显下降(P＜0.01)，脑脊髓组织病理学变化主要表现为血管周围有大量炎细胞浸润；与模型组相比，用MMF治疗后神经功能评分有所下降，体重增加，病理表现有不同程度的减轻，且大剂量MMF疗效优于小剂量MMF(P＜0.01)。结论MMF能改善EAE大鼠的症状，促进神经功能恢复，并具有剂量依赖性。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4+/CD8+改变及细胞间黏附分子1表达的意义

目的探讨急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周血CD4 /CD8 和脑及脊髓ICAM-1的表达及意义。方法采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂注射诱发大鼠EAE模型,分别注射生理盐水/福氏佐剂、左旋咪唑作为对照,注射后16d时取材,采用Loyez氏髓鞘染色法和免疫组化法观察脑和脊髓髓鞘改变及ICAM-1表达,流式细胞仪检测外周血CD4 /CD8 改变,并与对照组比较。结果正常组、NS/CFA组和LMS对照组髓鞘结构未见异常;模型组髓鞘染色见髓鞘结构疏松、部分髓鞘脱失。EAE大鼠脑和脊髓中I-CAM-1主要表达于血管内皮细胞,其面密度为(5.08!0.39),显著高于对照组(P<0.05)。结论EAE大鼠存在外周血CD4 /CD8 比值及脑和脊髓ICAM-1表达异常,CD4 /CD8 比值增高和ICAM-1表达异常在EAE的发生过程中发挥重要作用。     

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血清TNF-α和IL-10的影响

目的探讨阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠血清TNF-α和IL—10的影响。方法120只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、EAE模型组、泼尼松治疗组及阿托伐他汀治疗组,每组30只,每组再分为免疫后第7、14、21天亚组,每亚组10只。正常对照组大鼠不造模及用药。后三组大鼠于四肢足垫皮下注射新鲜豚鼠全脊髓匀浆＋完全弗氏佐剂制作EAE模型。自免疫后第1天开始泼尼松治疗组按3．9mg／（kg·d）给予泼尼松灌胃,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀10mg／（kg·d）灌胃,EAE模型组给予生理盐水灌胃。观察各组大鼠发病率及神经功能评分。各组大鼠于免疫后第7d、14d、21天处死,HE染色并于光镜下观察脊髓内病变情况,ELISA方法测定TNF—α和IL—10水平。结果与EAE模型组比较,阿托伐他汀治疗组及泼尼松治疗组大鼠的发病率均明显降低,神经功能评分、脊髓内病灶数减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。阿托伐他汀治疗组及泼尼松治疗组免疫后第14、21天TNF-α表达水平较EAE模型组降低,免疫后第7、14、21天时IL—10表达水平较EAE模型组升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。阿托伐他汀治疗组与泼尼松治疗组在大鼠发病率、神经功能评分、病灶数、TNF-α和IL-10表达水平方面差异无统计学意义（P〉0．05）。结论阿托伐他汀能改善EAE大鼠的临床症状,抑制脊髓内炎症反应,其机制可能与降低血清TNF-α和升高IL-10水平有关。     

3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异

目的 比较3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异.方法 采用皮下注射豚鼠脊髓匀浆+完全福氏佐剂,并辅以注射百日咳疫苗,诱导制备SD大鼠、Wistar大鼠和Lewis大鼠EAE模型,比较3组大鼠EAE的神经症状及中枢神经不同部位病理学变化.结果 与Lewis大鼠相比,SD大鼠和Wistar大鼠潜伏期均延长(P＜0.05),达峰时间相应推迟(P＜0.05),神经症状以Lewis大鼠最严重,其次为SD大鼠(P＜0.05);病理结果显示,3组大鼠CNS均以脑干病理改变最为严重,其次颈髓,而大脑病变最轻;CNS各部位的炎症改变,以Lewis大鼠最明显,而Wistar大鼠最轻.结论 SD大鼠与Lewis大鼠EAE比较,疾病发生率接近,中枢炎症病理改变相似,两者均以脑干炎症变化最严重,故SD大鼠是国内适合制备EAE模型的实验动物.     

多发性硬化动物模型的复制

目的复制慢性复发性实验性变态反应性脑脊髓炎(CrEAE)的动物模型。方法采用豚鼠脊髓匀浆及完全福氏佐剂,对6周龄雌性Hartley豚鼠颈后皮内一次性致敏,对照采用用生理盐水代替脊髓匀浆。致敏后每日进行致残程度评分,并称取体重。结果模型组100%的动物发病,83.3%的动物在2月内有复发,2月内平均发病次数为2.0±0.63次。对照组无一发病。结论本研究成功地复制了CrEAE豚鼠模型,是目前较好的多发性硬化动物模型。     

EAE大鼠血清中TNF-α、IFN-γ的检测及意义

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用。方法 Wistar大鼠通过局部注射豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的抗原乳剂诱导EAE模型,应用双抗夹心ELISA、放射免疫分析法分别检测实验大鼠血清IFN-γ和TNF-α的表达,并观察两种细胞因子的改变与EAE症状之间的关系。结果诱导EAE后,伴随着大鼠EAE症状的出现和进行性加重,其血清中IFN-γ和TNF-α表达较正常组分别升高了173.86%和166%。结论 IFN-γ和TNF-α在EAE的发生和发展密切相关,这两种细胞因子在EAE发病机制中的重要作用为探索新的有效治疗多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的手段提供了重要理论依据。     

RhoA和Rock-Ⅱ在Lewis大鼠EAE模型中的表达

目的研究RhoA和Rock-Ⅱ在Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中的表达,探索其在EAE模型中的作用。方法把36只Lewis大鼠随机分为两组:A组(空白对照组),B组(EAE模型组)。以豚鼠全脊髓为抗原混合福氏完全佐剂(CFA),诱导Lewis大鼠EAE模型,观察实验动物神经功能损害的情况;采用免疫组织化学染色法观察实验动物各组脑、脊髓组织中RhoA、Rock-Ⅱ的表达。结果成功建立Lewis大鼠EAE模型,RhoA和Rock-Ⅱ在EAE模型组的表达较空白对照组明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。结论 RhoA和Rock-Ⅱ在EAE模型中过量表达,可能在EAE模型的发病过程中起关键作用。     

他克莫司对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的实验性治疗

目的:研究新型免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用和作用机制,并与已论证的传统治疗方法甲基泼尼松龙对EAE实验治疗做临床对比其疗效.方法:豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的混合液诱导SD大鼠建立EAE模型,免疫10 d后将FK506分别以1 mg/kg,0.5 mg/kg剂量给予每日腹腔注射EAE大鼠,连续给药10 d,观察其发病情况,外周血T淋巴细胞CD3 、CD4 、CD8 、NK细胞比率,免疫后30 d,观察脑、脊髓组织病理变化,免疫组织化学生长相关蛋白43(Growth associated protein 43,Gap-43)显示神经再生的形态学证据.结果:FK506能减轻EAE的临床症状,促进EAE的临床缓解和恢复;减轻中枢神经系统的炎症浸润;减轻髓鞘和轴突损伤,促进轴突再生作用,且停药后未见动物复发.结论:FK506对实验性变态反应性脑脊髓炎有一定的实验性治疗作用.     

胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎中枢神经系统内GFAP表达的影响

目的观察胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）中枢神经系统内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠建立EAE动物模型,于免疫当日开始分别予25、50、100mg/kg胍丁胺,腹腔注射,每天1次,连续14d。比较各组的行为学的变化,应用免疫组化法观察脑和脊髓组织中的GFAP的表达。结果与模型组比较,胍丁胺给药14 d EAE大鼠的发病率低,临床症状改善;EAE大鼠CNS内的炎性脱髓鞘病灶内和周围GFAP表达明显升高（〈0.01）。结论胍丁胺对EAE具有保护作用。其机制可能与星形胶质细胞增殖活化有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织PGE 2表达的研究

目的：检测实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠脑组织PGE2表达情况,探讨其在EAE发病过程中的作用。方法将30只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组、佐剂对照组及EAE模型组,各10只,使用新鲜豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）与含卡介苗(BCG)的弗氏完全佐剂（CFA）建立EAE模型。对各组大鼠发病潜伏期、进展期及发病高峰期神经功能障碍评分进行记录,采用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织前列腺素E 2（PGE 2）的表达,并用ImagePro Plus软件对PGE2含量进行平均光密度值测定。结果正常对照组及佐剂对照组大鼠未发病,EAE模型组大鼠均发病。正常对照组及佐剂对照组大鼠脑组织中未见PGE 2表达,EAE模型组大鼠脑组织中则可见PGE 2表达,且PGE 2含量与EAE大鼠发病潜伏期呈负相关,与发病进展期及发病高峰期神经功能障碍评分呈正相关。结论 PGE2可能参与了EAE疾病的发生发展过程。