功能化纳米粒在脑靶向递药中应用的研究进展

血脑屏障的存在,导致药物不能有效到达靶部位发挥作用,极大的影响神经系统药物的发展和进步。纳米技术已被证明是用于脑靶向治疗的一种有效工具,尤其在脑肿瘤和神经退行性疾病中应用甚广。功能化纳米粒通过表面修饰等提高药物的顺应性,在药物原来的治疗基础上,达到更加精准的靶向性,高效率在靶部位聚集,起到治疗作用。本文主要综述功能化纳米粒及其功能化策略,总结了影响功能化纳米粒脑靶向运输的因素,同时对功能化的纳米粒在脑部疾病治疗中的优势和应用进行阐述,为其相关研究提供参考。     

脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学和家兔血小板聚集的影响

目的 研究脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学和家兔血小板聚集的影响.方法 经皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷浴造大鼠血瘀证模型,观察脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学的影响;采用家兔血小板聚集试验,研究脑通胶囊抗血栓形成的作用.结果 脑通胶囊可明显降低急性血瘀模型大鼠血液流变学主要指标,并可明显抑制家兔血小板聚集.结论 脑通胶囊可明显改善急性血瘀证大鼠血液流变学,同时具有抗血栓形成的作用.     

氰与人类疾病

急性氰化物中毒主要由于抑制细胞色素氧化酶aa_3,阻断组织细胞的生物氧化过程,引起中毒性缺氧。有关急性氰化物中毒的毒理及防治,国内外均已进行了深入研究,然而慢性氰化物中毒尚未引起足够的重视。事实上许多疾病与慢性氰化物中毒有关,并且这些疾病多是难以治愈的。因此,在有高效价抗毒药物治疗急性氰化物中毒的今天,对慢性氰中毒的研究日趋重要。     

nNOS参与OGD介导的促神经干细胞增殖效应

目的：体外研究脑缺血促神经发生的机制。 方法： 体外培养神经干细胞（neural stem cells,NSCs）与海马神经元,并采用氧糖剥夺模型（oxygen and glucose deprivation, OGD）模拟在体缺血,通过RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学、酶活性测定、亚硝酸盐/硝酸盐（nitrite/nitrate,NOx） 含量测定等多种方法研究神经干细胞的生物学行为以及介导这种效应的分子机制。结果： （1）OGD通过直接和间接（神经元）作用增加神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。（2）OGD上调神经干细胞中神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）并下调神经元中nNOS,且都有利于神经干细胞增殖。（3）采用nNOS基因敲除小鼠来源的神经干细胞以及神经元（用于共培养）进行实验,发现OGD并不能升高神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。 结论：神经干细胞和神经元中nNOS水平变化共同参与了OGD诱导的促神经干细胞增殖效应。     

大肠杆菌中重组多肽Tat-PFKMVV的分离､表达和纯化

目的:构建重组表达载体pED-Tat-PFKMVV,在大肠杆菌中表达并通过纯化以获得重组多肽Tat-PFKMVV? 方法:用PCR的方法扩增出Tat-PFKMVV基因,插入含T7启动子的pED表达载体,构建重组表达载体 pED-Tat-PFKMVV,重组表达载体转化至大肠杆菌并表达,表达产物经洗涤?乙醇沉淀,酸水解和等电点沉淀纯化目的多肽?结果:克隆的Tat-PFKMVV基因与Genbank 对比,二者同源性为100%,酸水解位点正确?大肠杆菌表达的融合蛋白产物AnsB-C-Tat-PFKMVV经SDS-PAGE电泳显示相对分子量为17 000,质谱显示最终纯化产物Tat-PFKMVV蛋白相对分子量为2 659?通过GST-pull down实验证明Tat-PFKMVV蛋白能在体外解开神经元型一氧化氮合酶与肌肉型磷酸果糖激酶的偶联?结论:成功构建了表达AnsB-C-Tat-PFKMVV融合蛋白的原核表达体系,纯化得到了较高纯度的目的多肽Tat-PFKMVV?通过此过程建立了一套简单可行且高效的融合蛋白表达?水解?分离与纯化的方法?     

17β-estradiol通过促进PSD95/nNOS耦联抑制皮层海马神经元的存活

目的:检测17β-estradiol对皮层海马神经元存活的影响,并判断其与nNOS/PSD95耦联的关系?方法:采用原代培养的ICR小鼠皮层海马神经元,培养7天后分溶剂对照组和给药组分别给予溶剂DMSO和浓度为10 μmol/L的17β-estradiol,LDH法判断细胞损伤,测定给药30 min后细胞死亡情况,并拍摄光镜照片观察细胞形态?同时利用免疫共沉淀法检测DMSO组,10nmol/L 17β-estradiol组,10 μmol/L 17β-estradiol组的nNOS和PSD95的耦联情况,观察药物对其影响?结果:给药30 min后,与对照组相比,10 μmol/L17β-estradiol组LDH漏出率增加,同时nNOS/PSD95耦联增加,而10 nmol/L 17β-estradiol对nNOS/PSD95耦联并没有影响?结论:浓度为10 μmol/L的17β-estradiol会损伤皮层海马神经元,而且这一结果可能是通过促进nNOS /PSD95耦联实现的?     

动脉粥样硬化模式家兔血小板对一氧化氮反应性的研究

目的 :研究在动脉粥样硬化的发展过程中内皮脱功能是否导致血小板对一氧化氮的反应性降低。方法 :家兔用含 1%胆固醇的饲料喂养 12周建立动脉粥样硬化模型。在给予高胆固醇饮食的过程中每 4周测定血清NOx水平以及血小板对NO供体SNP的反应性。 12周后测定血脂水平、观察主动脉的形态学变化和内皮依赖性舒张反应。结果 :高胆固醇饮食显著增高血清胆固醇和LDL水平 ,血小板聚集性增强 ,电镜扫描显示主动脉内皮细胞严重受损 ,乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应明显降低。虽然高胆固醇饮食家兔在动脉粥样硬化过程中血清NOx水平与正常饮食家兔没有显著差异 ,但NO供体SNP对ADP 诱导的血小板聚集的抑制率显著低于正常饮食组。结论 :高胆固醇和LDL血症导致的内皮脱功能降低了血小板对NO的反应性。     

α-蝎神经毒素的结构特征分类

17种α-蝎神经毒素按其三维结构特征可分为三大组,从马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)分离纯化的BmK 1和BmK 2均归属于第2组.结果显示三维结构分组与免疫学分组及毒理作用有很好的一致性,这表明三维结构的亲缘性可在一定程度上反映免疫学的亲缘性和毒理学的相似性,此外,本文还初步探讨了该类毒素的进化,结果表明毒素的毒性与三维结构的进化有关,在历史进程上有逐渐增强的趋势。     

噻氯匹定对鹌鹑实验性动脉粥样硬化的抑制作用及其机理

用食饵性动脉粥样硬化（ＡＳ）模型，研究噻氯匹定的抗ＡＳ作用。噻氯匹定２０和６０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１连续８ｗｋ，ｐｏ，能显著抑制鹌鹑动脉内膜ＡＳ斑块形成．每２ｗｋ测定血清血脂，该药对甘油三酯，总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平无明显影响，但使高密度脂蛋白胆固醇略有升高．于ＡＳ造型２和４ｗｋ，血清ＮＯ水平下降；在ＡＳ造型６ｗｋ，ＮＯ水平升高，噻氯匹定可逆转ＡＳ造型引起的ＮＯ水平变化．用放免法分析该药对前列环素合成的影响，结果噻氯匹定３．３，１０和３０ｍｇ·ｋｇ－１，２４ｈ内ｉｇ３次，均显著提高大鼠动脉壁６－酮－前列腺素Ｆ１α含量．结果表明噻氯匹定可抑制鹌鹑实验性ＡＳ斑块形成，除抑制血小板功能外，保护内皮功能可能也是该药抑制ＡＳ病变形成的重要机理．     

诱生型一氧化氮合酶特异性抑制肽的制备

目的：通过噬菌体展示技术筛选iNOS特异性抑制肽。方法：将iNOSFAD结合区及其附近序列的基因片段装入pET-28A( )，在大肠杆菌BL21中表达，His.bind^TM亲和层析柱纯化目的蛋白，使用纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库，筛选iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆，测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果：得到具有较高表达量的目的蛋白，经His.Bind^TM柱亲和层析纯化后纯度大于95％，以纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库，经4轮筛选获得10株iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆，测序发现其中5株序列完全相同，合成该12肽，初步研究表明其对iNOS表现为高浓度抑制，低浓度兴奋的作用，而对nNOS及eNOS则没有影响。结论：以iNOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对iNOS活性具有特异性影响，可根据这些特征设计合成小分子前导药物，创造新的活性药物。