VitaePro抑制线粒体通路对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的：探讨VitaePro对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为四组：正常对照组(H9c2)、缺氧损伤模型组(Hypoxia+H9c2)、红花油组(Safflower oil+hypoxia+H9c2)和VitaePro组(VitaePro+hypoxia+H9c2)。MTT和流式细胞术分别检测心肌细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达,包括B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X (BAX)、凋亡蛋白-3(Caspase-3)和裂解后的Caspase-3(Cleaved caspase-3);试剂盒检测各组心肌细胞硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。最后,Western blot检测心血管损伤标志蛋白的表达,包括心肌肌钙蛋白T (cTnT)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。结果缺氧损伤模型组与对照组比较,细胞增殖显著下降,凋亡率显著增高(4.2%~14.6%,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显降低,Bax和Cleaved caspase-3的表达显著升高(P<0.05),TBARS水平和MDA含量升高(P<0.05),SOD活性从44.9 U/mg降低到13.2 U/mg,心血管损伤标志蛋白cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著升高(P<0.05)。VitaePro组与缺氧组相比,细胞的增殖升高(P<0.05),凋亡率降低到6.4%,Bcl-2的表达升高,Bax和Cleaved caspase-3的表达明显降低(P<0.05),TBARS水平和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性增大到41.0 U/mg,cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著降低(P<0.05)。结论 VitaePro可以通过抑制线粒体凋亡通路和通过抗氧化作用减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞氧化应激和凋亡的影响

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞氧化应激和凋亡的影响。方法以40μmol/L Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,实验随机分对照组、Aβ_(25-35)组、N-乙酰半胱氨酸组(NAC组)和白桦脂醇5、10、20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡情况,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,LDH、MDA、SOD试剂盒分别检测LDH、MDA和SOD水平,比色法检测caspase3、caspase8、caspase9和Cyt c的酶活性,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl2、Bax、caspase3、caspase8、caspase9和Cyt c的活性和表达。结果与Aβ_(25-35)组比较,白桦脂醇和NAC均对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞可提高细胞存活率和SOD活性(P0. 01),并降低LDH释放率和凋亡率(P 0. 01),抑制caspase3、caspase8、caspase9和Cyt c酶活性(P 0. 01),同时下调Bax、caspase3、caspase8、caspase9和Cyt c表达水平(P0. 01),并上调Bcl2的活性和表达(P0. 01)。结论通过预防给予有效剂量的白桦脂醇能够抑制Aβ_(25-35)诱导产生的细胞凋亡,其机制可能与减少ROS生成从而降低氧化应激水平,继而抑制细胞凋亡途径有关。     

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

奥拉西坦联合rTMS减轻脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤

目的分析奥拉西坦(Oxi)联合重复经颅磁刺激(rTMS)减轻脑缺血再灌注损伤(I/RI)大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤的机制。方法60只大鼠随机分为对照组、I/RI组、Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组。比较各组大鼠神经体征缺失评分(NDS)、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率,检测缺血侧脑皮质组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。结果与对照组比较,I/RI组NDS评分和神经元细胞凋亡率升高,SOD和GSH-Px水平下降,MDA水平、Nrf2、HO-1、NQO-1、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05)。与I/RI组比较,Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组NDS评分、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率下降,SOD和GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达升高,MDA水平、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05);与Oxi组和rTMS组比较,Oxi+rTMS组上述改变更为显著(P＜0.05)。结论Oxi联合rTMS可降低脑I/RI大鼠脑组织氧化应激水平,抑制缺血侧脑皮质神经元细胞凋亡,减轻脑组织氧化应激损伤。     

藁本内酯预处理对Aβ25-35诱导人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35引起的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法 0.1、1.0、2.5、5.0μg/mL LIG作用于SH-SY5Y细胞,24h后以50μmol/LAβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立阿尔茨海默病体外模型,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测细胞中凋亡蛋白含量。结果经Aβ25-35处理后,细胞存活率下降,细胞内凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8表达上调,但Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05)。细胞经过LIG一定浓度预处理,细胞存活率提高,凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8蛋白表达下降,Bcl-2表达上升(P均<0.05)。结论 LIG具有对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,其机制可能是抑制Aβ诱导的细胞凋亡。     

二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1 42致胆碱能神经元凋亡的研究

目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β 淀粉样蛋白（Aβ1 42）致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2?μmol/L的Aβ1 42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病（AD）细胞凋亡模型;采用500?μmol/L二氮嗪(预处理1?h)、20?μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间（24、72?h）后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Wes tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果① Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h后,Bcl 2表达量降低（P＜0.01）,细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3的表达量增加（P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01）,Bax未见明显变化,Bcl 2/Bax比值降低（P＜0.01）,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低（P＜0.001）;② 二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24?h后Bcl 2的表达增加（P＜0.05, P＜0.01,P＜0.01）,作用72h能明显增加Bcl 2的表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并提升Bc 2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3表达量(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),细胞存活率均增高(P＜0.01,P＜0.001)。结论Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1 42致细胞凋亡作用。     

毛蕊花糖苷对Aβ_(1-42)损伤神经元保护作用及机制研究

目的:研究毛蕊花糖苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化得到神经元,与Aβ_(1-42)、不同浓度的毛蕊花糖苷分别孵育24 h,利用CCK-8法检测神经元存活率;利用免疫荧光染色法检测突触素-1(Synapsin-1,SYN)的表达量;利用原位末端标记法(Terminaldeoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick End Labeling,TUNEL)检测神经元凋亡;利用Real-time及Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 m RNA及蛋白的表达量。结果:毛蕊花糖苷能显著提高Aβ_(1-42)损伤后神经元的存活率,能增加SYN的表达,抑制其凋亡,并且能提高神经元Bcl-2 m RNA及蛋白,降低Bax和Caspase-3 m RNA及蛋白的表达量。结论:促进抗凋亡因子、抑制促凋亡因子表达可能是毛蕊花糖苷拮抗Aβ_(1-42)神经毒性的机制之一。     

川芎嗪对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对过氧化氢(H202)所致大鼠星形胶质细胞凋亡的保护作用.方法 利用SD新生鼠(24～48h)分离、培养星形胶质细胞,按随机数字表法分为空白对照组(以正常培养液培养)、模型组(100 μmol/L的H202作用24 h)、TMP剂量组(25、50、100 μmol/L TMP预处理48 h后,加入H202作用24 h).采用CCK-8检测各组细胞存活率;GFAP染色观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;Real-time PCR 检测各组细胞中PI3K、AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 的表达;Western blot检测各组细胞PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),LDH含量增加(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA 表达下调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达上调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,TMP预处理后细胞存活率明显升高(P＜0.05),其中50 μmol/L组的细胞存活率最高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),LDH含量降低(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达上调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达下调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TMP对H202所致的大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤具有保护作用,可改善损伤后细胞形态并抑制凋亡,该作用可能与PI3K、p-AKT蛋白活化有关.     

丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

牡荆苷对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠行为学、神经递质及脑黑质多巴胺能神经元凋亡的影响

目的探究牡荆苷对帕金森病(PD)模型小鼠行为学、血清胱抑素-C(Cys-C)和神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经递质及多巴胺能神经元氧化应激和凋亡的影响。方法 32只小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组、牡荆苷组。除空白组外,其余各组均腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),连续7 d。空白组和模型组灌胃生理盐水,美多芭和牡荆苷组分别灌胃美多芭片和牡荆苷,连续干预30 d。爬杆实验和游泳实验检测小鼠行为学,酶联免疫吸附法(ELISA)检测多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羟色胺(5-HT)水平以及Cys-C和NSE含量;分光光度法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平,Tunel染色检测多巴胺能神经元凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑黑质Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常组相比,模型组小鼠游泳实验评分、Cys-C、DA、DOPAC、HVA、5-HT、SOD、GSH-PX、Bcl-2蛋白表达均降低,爬杆实验评分、NSE、MDA、神经元凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达均升高(P0.01);与模型组相比,牡荆苷组和美多巴组小鼠游泳实验评分、Cys-C、DA、DOPAC、HVA、5-HT、SOD、GSH-PX水平、Bcl-2蛋白表达均显著升高,而爬杆实验评分、NSE、MDA、多神经元凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P0.01);与美多巴组比较,牡荆苷组小鼠5-HT、SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白显著增加,MDA、神经元凋亡率、Bcl-2蛋白表达显著降低。结论牡荆苷对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠行为学症状和神经损伤具有保护作用,机制可能与改善儿茶酚胺类神经递质,抑制脑黑质神经元氧化损伤和细胞凋亡有关。     

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制。方法以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h。MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达。结果神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低。醋酸铜低浓度诱导组(0~80μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P<0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01)。醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显。结论Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用。神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关。     

贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用

目的探讨贯叶连翘衍生物GF1029对经Aβ1-42诱导的大鼠原代培养皮层细胞凋亡的保护作用。方法采用老化的Aβ1-42处理大鼠原代培养皮层细胞12 h,用电镜观察细胞的形态变化,MTT法观察细胞活力变化,用荧光实时定量RT-PCR、Western-blot检测细胞中Bcl-2,Bax mRNA和蛋白的水平及GF1029预处理后这些指标的变化。结果老化的Aβ1-42处理可诱导大鼠皮层神经元凋亡,使神经细胞活力下降,降低Bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加Bax mRNA及蛋白表达;而经40、80μmol/L的GF1029预处理2 h后,神经细胞活力增加,Bcl-2 mRNA及蛋白表达增加,Bax mRNA及蛋白表达减少。结论贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导的大鼠原代皮层神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增加、Bax表达下调有关。     

骨膜素通过p38 MAPK信号通路抑制缺氧诱导的人牙周膜成纤 维细胞的氧化应激和细胞凋亡

目的 探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度（25、50、100 ng/mL）的骨膜素处理细胞,随机分为空白组、缺氧组、骨膜素低浓度组、骨膜素中浓度组、骨膜素高浓度组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;应用荧光酶标仪检测细胞活性氧（ROS）水平;ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HIF-1α、P21、CyclinD1、Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2、P38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果 缺氧处理后可明显降低细胞存活率（P<0.05）,提高P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P<0.05）;与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平降低（P<0.05）,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）。与空白组相比,缺氧组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）,IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平升高（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）;与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白水平降低（P<0.05）,IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低（P<0.05）,SOD活性升高（P<0.05）。结论 骨膜素可促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡,增强细胞抗氧化能力,减轻炎症损伤,其可能通过抑制p38 MAPK信号通路的活化而发挥作用。     

干细胞因子抑制糖氧剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的研究

目的探讨干细胞因子（SCF）抑制糖氧剥夺（OGD）诱导的人脑微血管内皮细胞（h-BMEC）内质网应激性凋亡的机制。方法将h-BMEC分为对照组、OGD组、SCF+OGD组（简称SCF组）、SCF+CompoundC+OGD组（简称CompC组）和SCF+AICAR+OGD组（简称AICAR组）;培养48h后,采用噻唑蓝法检测细胞存活率,膜联蛋白V/碘化丙啶（AnnexinV/PI）双染法检测细胞凋亡率,水溶性四唑盐-8（WST-8）法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（MDA）含量,Westernblot法检测腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）、断裂半胱氨酸蛋白酶-12（cleavedCaspase-12）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）表达。结果与OGD组比较,SCF组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;与SCF组比较,AICAR组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;CompC组AICAR组细胞存活率、SOD活性、MDA含量、细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比例、Bax、Bcl-2、、PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论SCF对OGD诱导的h-BMEC损伤具有抑制作用,其分子机制与抑制AMPK介导的内质网应激性凋亡有关。     

PKCε信号通路介导甘青铁线莲活性成分APG抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的研究不同浓度甘青铁线莲活性成分APG对H9C2大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。方法体外培养H9C2大鼠心肌细胞,经2μM/L和4μM/L的APG预处理24 h后,建立缺氧复氧损伤模型(I/R)(缺氧45 min,复氧3 h)。采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、丙二醛(MDA)的释放量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力;采用Western Blot法检测细胞内蛋白激酶Cε(PKCε)、Caspase-3、Bax和Bcl-2表达情况,使用特异性PKCε抑制剂CHE观察PKCε信号通路在此过程中的作用。结果 I/R处理可抑制H9C2细胞活性,细胞培养基中LDH、MDA含量升高,SOD活力降低(与Control组比较,P0.05)。抑制PKCε表达,上调Caspase-3表达,下调Bcl-2/Bax比例(与Control组比较,P0.05)。2μM/L和4μM/L的APG预处理均可发挥细胞保护作用,降低LDH与MDA释放量,提高SOD活力(与I/R组比较,P0.05)。此外,APG处理对抗了I/R损伤引起的PKCε表达下调,抑制Caspase-3表达,提高了Bcl-2/Bax比例(与I/R组比较,P0.05)。CHE处理后细胞活力下降,Caspase-3表达上调,Bcl-2/Bax比例下降,凋亡增加(与APG+I/R组比较,P0.05)。结论甘青铁线莲中活性成分APG可减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能是激活PKCε相关信号通路,最终抑制心肌细胞凋亡。     

尼莫地平对H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨尼莫地平对过氧化氢(H_2O_2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法 PC12细胞随机分为正常组,模型组(200μmol/L H_2O_2),尼莫地平低、中、高浓度组(1、10、100μmol/L尼莫地平+200μmol/L H_2O_2)。MTT法检测各组细胞活力,Hoechst染色各组细胞凋亡情况,比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶(caspase 3),caspase 9及超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,western blot分析B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及p53蛋白。结果与正常组比较,模型组中细胞活力下降,细胞凋亡率提高,caspase 3及caspase 9提高,SOD活性降低,MDA含量降低,Bcl-2表达量下降,Bax及p53表达量上升,差异均具有统计学意义(P0.01);与模型组比较,尼莫地平低、中、高浓度组细胞活力提高,细胞凋亡率降低,caspase 3及caspase 9活性降低,SOD活性提高,MDA含量提高,Bcl-2蛋白表达量提高,Bax及p53表达量降低,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论尼莫地平可通过调控细胞凋亡相关蛋白表达,从而抑制H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡。     

1类多巴胺受体对细胞凋亡的线粒体信号通路的影响

目的 以细胞凋亡的线粒体途径为切入点,探讨1类多巴胺受体(DR1)活性变化对缺氧-复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及可能机制.方法 乳鼠心肌细胞以缺氧、缺血清培养2小时,复氧、复血清培养24小时的方法建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型.RT-PCR和Western blotting分别检测Bcl-2、caspase-3、caspase-9和细胞色素C(Cyt c)mRNA和蛋白质的表达;TUNEL、流式细胞仪、MTT检测心肌细胞的凋亡情况;紫外分光光度计检测细胞培养液中LDH、SOD活性和MDA含量;透射电镜观察心肌细胞形态变化.结果 与正常组比较,缺氧-复氧组细胞培养液中LDH活性和MDA含量增加,SOD活性降低;心肌细胞凋亡指数增加;心肌细胞超微结构损伤加重;促凋亡因子(Cyt c、caspase-3、caspase-9)表达增加,抑凋亡因子(Bcl-2)表达亦增加.与缺氧-复氧组比较,DR1激动剂SKF-38393进一步增加LDH活性和MDA含量,降低SOD活性,增加心肌细胞凋亡指数,加重心肌细胞损伤,上调促凋亡因子表达,下调抑凋亡因子表达;DR1抑制剂SCH-23390对上述指标影响不明显.结论 DR1激活可促进缺氧-复氧诱导的心肌细胞凋亡,其机制与上调线粒体途径有关.     

甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞的保护作用及机制研究

目的　探讨甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞（GES-1）的保护作用及可能机制。方法　2017年3—11月,选取GES-1细胞株,分为6组,对照组：加DMEM培养基;阿司匹林组：阿司匹林18.5 mmol/L与GES-1共同培养24 h;甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组：GES-1分别以甘草总黄酮（3、6、12 mg/L）预处理2 h后再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h;PD98059组：GES-1以甘草总黄酮12 mg/L预处理2 h后,加PD98059 10 μmol/L处理1 h,再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,检测乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,采用Western blotting法检测细胞磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）、B淋巴细胞癌2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。结果　与对照组比较,阿司匹林组、甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达升高,SOD活性、Bcl-2表达降低（P<0.05）;与阿司匹林组比较,甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高（P<0.05）;与甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组比较,PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高（P<0.05）。结论　甘草总黄酮可通过促增殖、抗凋亡、抗氧化应激等途径减轻阿司匹林诱导的GES-1损伤,其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关。     

IFN-α调控miR-214-5p/MFGE8通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨干扰素α(IFN-α)调控miR-214-5p/乳脂肪球表皮生长因子8(MFGE8)通路对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖、凋亡的影响。方法 将HBVAFs细胞分为NC组、IFN-α组、IFN-α+ anti-miR-con组、IFN-α+ anti-miR-214-5p组、IFN-α+ pcDNA组、IFN-α+ pcDNA-MFGE8组、IFN-α+ anti-miR-214-5p+ si-con组和IFN-α+ anti-miR-214-5p+ si-MFGE8组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-214-5p和MFGE8 mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印记(Western blot)法检测MFGE8、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot法验证miR-214-5p和MFGE8的靶向调控关系。结果 与NC组比较,IFN-α组HBVAFs细胞miR-214-5p的表达显著升高,MFGE8和Bcl-2的表达显著降低,Cleaved caspase-3和Bax的表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P <0.05)。与IFN-α+anti-miR-con组比较,IFN-α+anti-miR-214-5p组HBVAFs细胞miR-214-5p、Cleaved caspase-3和Bax的表达显著降低,Bcl-2表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-214-5p靶向负性调控MFGE8表达。与IFN-α+pcDNA组比较,IFN-α+pcDNA-MFGE8组HBVAFs细胞Cleaved caspase-3和Bax的表达显著降低,MFGE8和Bcl-2表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与IFN-α+anti-miR-214-5p+si-con组比较,IFN-α+anti-miR-214-5p+si-MFGE8组HBVAFs细胞Cleaved caspase-3和Bax的表达显著升高,MFGE8和Bcl-2表达显著降低,细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论IFN-α通过调控miR-214-5p/MFGE8通路抑制人脑血管外膜成纤维细胞增殖并促进细胞凋亡。     

梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞体外缺血再灌注模型损伤的保护作用

目的:研究中药单体组方梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外缺血再灌注模型损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,采用氧糖剥夺(Krebs液)方法建立缺氧-复氧模型以模拟体内缺血再灌注损伤。分为正常组、模型组、尼莫地平组、梓葛低、中、高剂量组,复氧时正常组及模型组给予生理盐水,余组给予相应的药物干预后,测定细胞活力、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量;分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果:与正常组相比,模型组A值、SOD活性显著性降低(P<0.05);MDA和NO含量以及LDH释放量均显著性升高(P<0.05),Caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降,Bcl-2/Bax显著降低(P<0.01)。与模型组比较,梓葛低剂量组A值显著升高(P<0.05);梓葛低、中剂量组MDA和LDH含量显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);梓葛低剂量组NO含量显著降低(P<0.05);梓葛冻干粉针剂的各剂量组SOD活性均显著提高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2/Bax均显著提高(P<0.05,P<0.01);梓葛中、高剂量组Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:梓葛冻干粉针剂可显著拮抗缺氧-复氧对人脐静脉内皮细胞的损伤,其机制与抑制细胞自由基的产生、提高抗氧化能力及调节凋亡相关蛋白表达密切相关。