小鼠肝炎病毒(MHV-1)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

用小鼠肝炎病毒(MHV-1)接种DBT细胞,收获病毒经反复冻融、超声波处理、逐级差速离心提纯和浓缩。用该病毒提取液经腹腔免疫SPF级BALB/c系小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_(2/0)融合,通过间接ELISA试验,筛选出5株分泌MHV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株(C_(10)H_8、A_(11)C_(10)、F_2G_2、F_3D_(11)、F_7B_9)。5株单抗与流行性出血热病毒(EHFV)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、痘苗病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒(MHV-2、-3、-JHM、-A_(59))均无反应。抗MHV-1的阳性血清能阻断5株单抗与MHV-1的反应。5株单抗均无沉淀特性和中和特性。液氮保存6个月后复苏,仍可分泌特异性抗体。用MHV-1单抗鉴定上海分离到的1株小鼠肝炎病毒(MHV-Hu_(79)),证实MHV-Hu_(79)株不是MHV-1。     

EV71小鼠适应株制备及体内外感染特点

目的 用1日龄ICR小鼠传代制备EV71小鼠适应株,研究EV71亲代株与小鼠适应株的体内外感染特点,建立EV71感染ICR小鼠动物模型,为病毒疫苗和抗病毒药物的研究提供实用的动物评价工具.方法 用1日龄ICR小鼠进行EV71病毒(Fuyang-0805)的传代,得到小鼠传代株.以一定浓度亲代株和传代株病毒分别接种RD、Vero、SY5Y、Caco-2四种细胞,定量方法检测各时间点不同毒株在四种细胞上的复制数量,CCK8方法测定各时间点细胞的存活率;同时,两毒株分别腹腔注射感染1日龄小鼠,定期安乐死动物,采集肺、小肠、骨骼肌、大脑四种器官组织,进行动物体内病毒半定量和定量分析,同时进行各器官组织病理学观察、免疫组织化学鉴定.结果 与亲代毒株相比较,小鼠传代株(EV71-MMP4)表现出更强的肌肉来源细胞嗜性与毒性;同时,两毒株腹腔注射感染1日龄小鼠后,EV71-MMP4感染的小鼠体重增长较正常小鼠体重增长缓慢;半定量和定量RT-PCR显示,在小鼠肌肉中的病毒载量于感染后1 d和5 d达到高峰.EV71-MMP4感染组感染率较高、病毒组织分布较广、感染持续性较好、病毒载量较高,高剂量病毒感染后小鼠小肠、心肌和骨骼肌可观察到细胞空泡变性、淋巴细胞浸润等病理变化.免疫组织化学显示感染后小鼠骨骼肌有EV71病毒特异分布.结论 阜阳EV71小鼠适应株表现出较亲代毒株更好的小鼠易感性、细胞毒性,所建立的动物模型可用于EV71病毒致病机制、感染特点的研究和病毒疫苗及药物的评价.     

小鼠肝炎病毒沪79株鉴定初报

1979年,皇甫在报告了从裸鼠中发现病毒性肝炎病例以及该株病毒(定名为沪79株)的分离经过。作者对沪79株作了进一步的鉴定。以引起的细胞形态学变化、病毒颗粒的电镜观察、交叉中和试验和ELISA试验,以及感染小鼠的临床和病理检查为指标,证实了我所分离的沪79株与国际株MHV-1有着共同的生物学特性,属小鼠肝炎病毒群。兹将初步结果报告如下: Ⅰ.在DBT细胞上的增殖一、材料和方法 (一)病毒株:1.本所1979年分离的沪79株,为患鼠肝、脑悬液冻干毒。2.国际株 MHV-1。 (二)细胞株;SR-CDFI-DBT(简称DBT)细胞,它来自 CDFI(BALB/c×DBA)鼠脑内接种 Rous肉瘤     

流行性乙型脑炎细胞免疫实验研究Ⅱ.致敏脾T细胞被动输入保护试验

有人给摘除胸腺并经照射的小鼠被动输入免疫小鼠全脾细胞或骨髓与胸腺混合细胞,然后进行病毒攻击,多数小鼠能生存。有人将免疫小鼠全脾细胞被动输给正常小鼠,再进行病毒攻击,小鼠不同程度地得到保护。但因这些细胞成分复杂,不能完全解释为CMI的作用。本文用致敏脾T细胞被动输入保护试验,研究CMI在保护机体抗乙脑病毒感染方面的作用。材料与方法材料病毒:乙脑病毒京卫研株(A_2株):动物:CFW和LACA纯系小鼠;尼龙纤维:美国Rapp教授惠赠。     

流行性乙型脑炎细胞免疫实验研究Ⅰ.乙脑病毒感染小鼠细胞免疫反应的测定

乙脑病毒为芽生有膜病毒,从理论上说,应能刺激机体产生细胞免疫反应(CMI).事实上,极少数报告认为乙脑患者急性期其CMI水平下降,乙脑病毒感染小鼠急性期循环T细胞相对减少.而对乙脑病毒感染时,CMI产生的条件、影响因素及变化规律尚不甚了解。本文用巨噬细胞移动抑制(MIF)试验和白细胞粘附抑制(LAI)试验,研究乙脑病毒感染小鼠后,CMI反应的变化及其影响因素.材料与方法病毒株①乙脑京卫研株(A.株);②中山株;③2-8株。动物 3或5周龄Swiss小鼠.     

乙型肝炎病毒B、C、D基因型AAV-HBV小鼠模型构建与病毒学特征比较

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型中国流行株腺相关病毒介导的乙肝病毒(AAV-HBV)小鼠模型,并研究其病毒学变化特征。方法以B、C基因型HBV流行株序列为基础,并参照常用D基因型病毒序列,分别构建出携带1.3×基因组的腺相关病毒载体质粒:p AAV-HBV1.3×(B)、pAAV-HBV1.3×(C)和pAAV-HBV1.3×(D)。通过三质粒共转染方法在293细胞中包装成三种成熟的腺相关病毒载体rAAV-HBV 1.3(B)、rAAV-HBV 1.3(C)与rAAV-HBV1.3(D)。C57BL/J小鼠通过尾静脉注射相同剂量的AAV-HBV病毒载体,在注射后不同时间点,用ELISA方法检测血清中HBsAg和HBeAg表达水平,用荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测小鼠血清中HBV DNA拷贝数。结果新构建B、C基因型两株病毒有更高HBsAg表达水平,B基因型小鼠血清中HBsAg检测值(均值)波动在957.67～2 590.04 IU/mL,C基因型小鼠血清HBsAg波动在725.21～3 195.16 IU/mL,D基因型小鼠血清HBsAg波动在153.4～531.8 IU/mL。B基因型小鼠血清中,HBsAg与HBV DNA比值最高,D基因型最低。新构建B、C基因型两株病毒表现出与常用D基因型病毒不同的血清动力学特征。B、C基因型小鼠的HBsAg和HBV DNA可在1周内快速达到较高水平,并维持稳定,在第3～4周表现出波动下降,随后表达水平回升。D基因型小鼠HBsAg在10 d内达到峰值,然后不断降低,HBV DNA在第3～4周也有明显波动。B、C、D三种基因型HBeAg在第1周较低,在两周达到峰值,并保持稳定。结论基于我国流行B、C基因型序列,成功建立了两株AAV-HBV小鼠模型,为研究B、C基因型病毒提供了新工具。     

宣肺透解剂对流感病毒感染小鼠肺病毒滴度及Th1型细胞因子的作用

目的观察宣肺透解剂对流感病毒感染小鼠肺病毒滴度及辅助性T细胞1型(Th1)细胞因子的作用,研究其抗病毒作用的可能机制.方法建立流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染的小鼠肺炎模型,用微量血凝实验检测小鼠肺组织中病毒滴度,用生物活性测定法检测小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)的活性水平.结果宣肺透解剂可降低感染小鼠肺组织病毒滴度,同时提高血清中IL-2、IFN-γ的活性水平.结论宣肺透解剂可能通过调节Th1型细胞因子的活性而增强细胞毒T细胞(CTL细胞)、自然杀伤细胞(NK细胞)和巨噬细胞对病毒的清除.     

八株小鼠胸腺基质细胞系的建立及鉴定

应用改良的长期培养法,建成8株小鼠胸腺基质细胞(MTSC)系,其中7株为胸腺上皮样细胞(MTEC)系(表达角蛋白桥粒及张力丝),1株为胸腺树突状细胞(MTDC)系(不表达角蛋白、桥粒及张力丝,但表达波形蛋白及S-100蛋白)。各株细胞生长稳定、倍增时间界于17.1～34.8小时之间。按特异MCAb鉴定,多数MTEC系来源于胸腺髓质及皮-髓质的上皮细胞。按染色体数目定,其中2株近似正常上皮细胞,其余6株均为转化细胞,但电镜下无可见病毒颗粒。     

小鼠SRS白血病病毒的研究

小鼠SRS腹水瘤株是我校病理生理教研室于1971年用L6565白血病小鼠的胸腺细胞悬液接种到昆明小鼠腹腔而建立的;生物物理教研室及病生教研室在分离和鉴定小鼠SRS白血病病毒(SRSV)、建立SRSV感染的细胞系以及阐明SRS病毒基因组和病毒蛋白的分子生物学性质方面作了深入的研究,概述如下:1、应用分子筛凝胶柱层析及超离心法分别从昆明种小鼠SRS腹水瘤上清液和瘤细胞中分离提取了有生物活性的SRS白血病病毒(SRSV)。经电子显微镜观察表明,     

利用NDV等病毒治疗小鼠白血病的初步实验研究

黄祯祥等曾报告了鸡新城疫病毒(NDV)L、B_1株和甲型流感病毒PR_s株治疗Ehrlich及S180小鼠腹水瘤的动物模型;并通过两次注射两种病毒,使疗效从单一治疗的60％提高到90％以上;认为治疗效果不是由于病毒的直接杀伤作用,主要是由机体的免疫功能实现的。本文将白血病津638细胞株以10万/只量腹腔接种小鼠,于48h后接种NDVL株原液1ml至腹腔(EID_(50)8.5～9.5,HA1: 640～1:1280),     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法 :采用光镜、电镜、原位末端标记法 (TUNEL)观察病毒性心肌炎 (viralmyocarditis ,VM)鼠不同时期病理改变及细胞凋亡情况。结果 :小鼠感染后 7d即见炎性细胞浸润及心肌坏死 ,10～ 14d病变最严重 ,2 1d以后心肌炎性细胞浸润及心肌坏死逐渐减轻 ,代之心肌纤维化 ,对照组无病变。实验组 7、10、14、2 1、2 8d均可见到凋亡细胞 ,且感染后 7～ 14d细胞凋亡数明显高于 2 1～ 2 8d(P <0 .0 5 ) ,对照组未见凋亡细胞。结论 :细胞凋亡在病毒性心肌炎中起着重要作用 ,它参与了病毒性心肌炎的发生、发展。     

登革病毒特异性T细胞在DHF/DSS发病中作用的研究

目的研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用.方法首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全(SCID)小鼠体内,建立HepG2-grafted SCID(HepG2-SCID),然后将该小鼠分为3组:[1]A组:登革病毒特异性T细胞(2D42)接种后次日,腹腔内接种106pfu的Ⅱ型登革病毒(DEN2);[2]B组:正常小鼠胸腺细胞(NMT)接种后次日,腹腔内接种DEN2;[1]C组:腹腔内接种DEN2.观察感染后各组动物的死亡率、病毒血症及主要脏器的病理变化.结果接种2D42细胞 感染的小鼠,80%出现明显的临床表现,并在感染后12.8 d死亡,剩余的20%小鼠有一过性的临床表现,然后从疾病中恢复,并存活在3个月以上.而接种NMT 感染或单纯感染的小鼠,死亡率均为100%.A组和B组小鼠血清中的病毒滴度和主要脏器的病理变化发生率明显高于C组.结论 DEN-T细胞有保护机体免受病毒侵害和加重病情进展的双重作用,而NMT细胞只有加重病情的单一作用.     

细胞凋亡在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的 :探讨柯萨奇病毒 B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎 (VM)心肌细胞损伤的变化 ,观察细胞凋亡在心肌损伤中的作用。方法 :采用 CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型 ,分别于腹腔接种 CVB3后第 5、7、10、14、2 1、2 8d,取心肌组织切片 HE染色了解心肌损伤 (坏死 )情况 ;电镜和流式细胞仪检测 ,观察心肌中的细胞凋亡。结果 :心肌坏死方面 :光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变 ,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润 ,后期可见纤维化 ;心肌细胞凋亡方面 :电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞 ,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高 5 8.33% (7/12例 ) ,且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞 ;各期病鼠心肌组织中的细胞凋亡比率较对照组明显增加 ,流式细胞仪检测平均心肌细胞凋亡百分率为 2 6 .74± 15 .2 2 % ,感染后第 7～ 14 d心肌细胞凋亡百分率明显高于其余时间 (P<0 .0 0 1)。结论 :小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与凋亡共存 ,其中异常的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关     

小鼠SRS白血病病毒感染的细胞株的建立及其生物学特性

用小鼠SRS腹水瘤的无细胞提取液感染体外培养的小鼠NIH/3T3细胞,建立可传递的、感染SRS白血病病毒(SRSV)的细胞株。感染的NIH/3T3细胞,电镜下可见A型和C型病毒颗粒,X-C检测和逆转录酶活性测定均为阳性。感染SRSV的细胞形态变圆,并出现集落性生长,给3只BALB/c(nu nu)裸鼠皮下接种,在15d内都产生纤维肉瘤。Southern blot分子杂交法证明,感染的NIH/3T3细胞内有游离的前病毒DNA存在,将其无细胞提取液注入SW-1近交系新生乳鼠,在191d内有52.38％诱发了淋巴细胞白血病和胸腺淋巴瘤。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

乙肝全基因组转基因小鼠肝组织病理及部分免疫学特征

目的:研究C57-TgN(HBVadr2.0) SMMU“3号”品系乙型肝炎转基因小鼠肝脏的组织病理学及部分免疫学特征.方法:通过对130例SPF级乙型肝炎转基因小鼠和30例同龄正常C57BL/6小鼠肝组织进行免疫组织化学染色、HE染色和浸银染色分析,研究转基因小鼠HBsAg的表达以及病理改变情况.选取15例肝组织有单个核细胞浸润的转基因小鼠检测白细胞分化抗原的表达情况.结果:60.77％(79/130)的转基因小鼠肝脏组织中出现了不同程度的肝组织病理性改变,包括肝细胞变性、单个核细胞浸润和纤维组织增生,且与月龄正相关,而与性别、病毒蛋白的表达无相关性.选取出现单个核细胞浸润的肝组织进行免疫组织化学检测发现,肝组织中浸润的单个核细胞大多为CD3+、CD4+T细胞.结论:C57-TgN (HBVadr2.0) SMMU“3号”品系乙肝全基因组转基因小鼠肝脏产生类似慢性无症状HBV携带者的病理学变化,病理改变与病毒蛋白表达无相关性,与小鼠月龄呈正相关性.     

IL2-TNFα基因诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡

1995－1999年对抽查的近20家单位的5319只实验动物进行病毒学检测。普通级大鼠（179只）、仓鼠（2334）均合格;927只小鼠中发现3只淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）抗体阳性、30只鼠痘病毒（MPV）抗体阳性;413只豚鼠中有21只LCMV抗体阳性,清洁级大鼠、小鼠和豚鼠中没有一种动物5年来一直保持合格、仙台病毒、鼠肝炎病毒（MHV）感染比较普遍。381只SPF级小鼠仅1996年在一次抽查中有6只小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo-3）抗体阳性。     

用痘苗病毒天坛株及池田株提高鼠白血病L_(7711)细胞抗原性的研究

本文用痘苗病毒天坛株及池田株分别处理615鼠白血病L_(7711)细胞制备瘤苗,对鼠进行免疫后,再用L_(7711)细胞攻击。结果表明,免疫组均比对照组腹水增长缓慢、生存期延长。证明两株病毒均能增强鼠L_(7711)白血病细胞的抗原性,而且天坛株比池田株作用明显。     

反转录病毒载体介导的人β—珠蛋白基因在小鼠体内整合和表达的？…

OBJECTIVE: To examine the in vivo properties of retroviral recombinants carrying partially deleted human beta-globin gene (delta beta) and truncated erythroid enhancer (292 bp and 341 bp of 5'HS2) at the mRNA levels following short- and long-term reconstitution in mice with infected marrow cells. METHODS: First ecotropic virus producer cell lines with higher virus titers were isolated using "ping-pong" procedures. Then the human beta-globin gene was transferred into murine hematopoietic progenitor cells and the integration and expression of transferred gene were analyzed by southern blot and RNase protection assay or RT-PCR. RESULTS: The virus titers of both recombinants increased obviously after "ping-pong" procedures. The transferred human beta-globin gene was detected in murine CFU-S12 and the expression level was about 0.5%-5% of endogenous mouse alpha-globin gene. In 3 of 14 mice surviving long-term transplanted with bone marrow cells transduced with high-titer virus, bone marrow, spleen and thymus from two mice and bone marrow and spleen from another mouse contained the intact proviral genome. Long-term expression of the transferred gene was seen in one mouse at level of 7% of endogenous murine alpha-globin gene. CONCLUSIONS: The transferred human beta-globin gene can stably integrate into murine hematopoietic stem cells mediated by retroviral vectors and express in an erythroid-specific manner.     

人H7N9禽流感病毒与H1N1流感病毒感染小鼠病理学损伤的比较

目的 比较分析H7N9病毒与H1N1病毒感染小鼠病理学损伤特点,初步探讨两种病毒感染致小鼠急性肺损伤的致病机制. 方法 H7N9病毒与H1N1病毒分别感染小鼠,观察不同病毒感染后小鼠生存率,并于不同时间点取心、肝、脾、肺、肾、脑、肠等组织,伊红-苏木素染色并进行组织病理学分析,免疫组化检测病毒抗原分布及中性粒细胞浸润.综合分析肺组织病理损伤与病毒复制、宿主免疫反应之间的关系. 结果 H7N9病毒感染小鼠肺及脾脏损伤较轻,存活率较高.H1N1 病毒感染的小鼠肺及脾脏损伤较重,感染后9 d全部死亡;两种病毒抗原主要分布于支气管上皮细胞、少量间质细胞和肺泡上皮细胞,病毒复制水平无明显差异.但H1N1病毒感染后肺及脾脏中均有大量中性粒细胞浸润,小鼠机体炎症反应明显强于H7N9病毒感染后小鼠炎症反应. 结论 H7N9病毒与H1N1病毒感染后小鼠病理学损伤特点及程度均不同,病毒复制是小鼠肺损伤的诱发因素但并非决定因素,宿主针对病毒感染产生的免疫反应程度与急性肺损伤密切相关.