灯盏生脉胶囊有效组分对大鼠细胞色素P450酶同工酶作用的体外研究

目的 探讨灯盏生脉胶囊6种有效组分对细胞色素P450酶(CYP450酶)4种主要亚型(同工酶)的作用.方法 采用大鼠肝微粒体体外孵育的方法和液质联用(LC/MS/MS)技术,通过体外cocktail高通量筛选,选择不同的CYP450酶同工酶特异性探针底物与灯盏生脉有效组分共同孵育,比较灯盏生脉有效组分对大鼠肝微粒体中CYP450酶同工酶抑制作用.结果 五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A1、2C6及2C11有弱抑制作用,五味子酯甲对CYP3A1及2C11有弱抑制作用,IC50值均在10～50 μmol/L之间.结论 本研究初步界定参与灯盏生脉胶囊有效组分代谢的大鼠CYP450酶同工酶,及其有效组分对大鼠CYP450酶同工酶的抑制作用,为灯盏生脉胶囊与其他药物的联合使用提供科学依据.     

LC-MS/MS法评价卡维地洛对人肝微粒体细胞色素P450酶5种亚型的体外抑制作用

目的建立LC-MS/MS法评价卡维地洛对混合人肝微粒体细胞色素P450酶5种主要亚型(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4/5)的体外抑制作用情况。方法在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西汀O-脱乙基化(CYP1A2)、双氯芬酸4’-羟基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4’-羟基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪达唑仑1’-羟基化(CYP3A4/5)和睾酮6β-羟基化(CYP3A4/5)反应作为5种P450酶亚型代谢活性的标志,用阳性抑制剂对试验体系进行验证。建立LC-MS/MS法检测各特征性反应的代谢物生成量,并计算各阳性抑制剂与卡维地洛的IC50值。结果卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5和CYP2D6存在不同程度的抑制作用,其IC50值分别为4.3μmol.L-1(CYP3A4/5咪达唑仑羟基化反应)、5.6μmol.L-1(CYP3A4/5 6β-羟基睾酮羟基化反应)和27.2μmol.L-1;对其余3种CYP酶亚型则无显著抑制作用。结论建立的LC-MS/MS分析方法灵敏、准确、可靠,卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5具有中等强度抑制作用,对CYP2D6亦存在较弱的抑制作用。     

CPUHY002对人肝微粒体CYP450酶体外抑制作用研究

目的：评价CPUHY002在体外对人肝微粒体细胞色素P450（CYP450）酶6种亚型酶活性的影响.方法：将CPUHY002与CYP450酶6种亚型的特异性探针底物非那西丁、双氯酚酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗、丙酸睾酮与人肝微粒体进行孵育,采用LC-MS/MS法测定对应6种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基双氯酚酸、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮的浓度,求算出IC50.结果：CPUHY002对CYP2C19和CYP2E1的IC50值分别为48.02 μmol/L和47.19 μmol/L,对CYP1 A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9的IC50值＞100 μmol/L.结论：CPUHY002对于CYP2C19和CYP2E1具有弱抑制作用,对CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9无抑制作用.     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响。结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min。异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50>1 000μmol/L。结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药。     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用.方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响.结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min.异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50＞1 000 μmol/L.结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药.     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

超高效液相色谱法检测6种探针底物代谢产物并评价人细胞色素P450同工酶活性

目的：建立同时测定非那西丁（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、睾酮和咪达唑仑（CYP3A4）6种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,评价药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。方法：人肝微粒体与6种探针底物在还原系统NADPH的作用下,37℃共同孵育;以蛋白沉淀法处理样品,采用超高效液相色谱系统（ UPLC-MS/MS）,建立Cocktail混合探针,对药物的6种代谢物进行定量分析,并分析药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。结果：6种探针底物物代谢产物乙酰氨基酚（0.26～8.35μmol/L）、6-羟基氯唑沙宗（3.02～96.63μmol/L）、5-羟基奥美拉唑（0.10～3.09μmol/L）、羟基甲苯磺丁脲（0.15～4.88μmol/L ）、6β-羟基睾酮（3.67～117.37μmol/L ）和α-羟基咪达唑仑（1.64～52.37μmol/L）线性关系良好,各成分相关系数（ R2）＞0.996,准确度为95.96％～103.10％,日内和日间精密度RSD（％）＜15％,提取回收率、基质效应RSD（％）＜11％,稳定性好。结论：UPLC-MS/MS准确、灵敏度高,可作为研究受试药物对CYP450酶影响及相关研究的分析测定方法。     

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。     

药物代谢细胞色素P450酶学与研究方法应用进展

细胞色素P450酶(CYP450s)参与多种生理性物质、毒性致癌物以及约90%常用药物的代谢和转化,在药物代谢中占重要地位。CYP450s受药物的诱导或抑制可影响药物的代谢速率和作用时间,因而研究和探索CYP450s对于预测以代谢为机制的药物相互作用有重要意义。目前研究CYP450s的方法包括体内试验与体外实验两种,体外实验有原代肝细胞培养法、肝微粒体法、肝切片法、基因重组P450酶系、肝脏灌流技术以及"cocktail"探针法,体内常以动物作为模型,一般使用探针药物法。     

白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢动力学研究

目的研究白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢特征和参与代谢的细胞色素P450(CYP)亚型。方法将白藜芦醇与地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育,并且用不同浓度的CYP3A1特异性抑制剂酮康唑(Ket)在空白肝微粒体中共孵育,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法测定孵育后白藜芦醇的浓度。观察Ket对白藜芦醇代谢的影响及参与其代谢的CYP酶。结果白藜芦醇在DEX、PB诱导组的代谢明显加快(P<0.01),Ket能够显著抑制白藜芦醇代谢,并呈剂量依赖性。结论白藜芦醇具有酶促动力学代谢特性,CYP3A主要参与白藜芦醇的代谢,CYP2B可能参与其部分代谢。     

氧化苦参碱对小鼠肝微粒体药物代谢酶的诱导作用

氧化苦参碱是自中药苦参中提取的一种生物碱,本文就其对小鼠肝微粒体药物代谢酶的影响进行了探讨。结果表明,氧化苦参碱(100mg/kg)能缩短小鼠戊比妥钠睡眠时间,提高肝微粒体细胞色素 P-450含量并增强乙基吗啡 N-脱甲基酶对硝基茴香醚 O-脱甲基酶和苯并芘羟化酶的的活性,形态上使肝细胞滑面内质网增生。以上结果说明,氧化苦参碱是细胞色素 P-450的诱导剂。     

双—β乙基碳酸锗倍半氧化物对S_(180)肉瘤小白鼠肝脏微粒体药物代谢酶的影响

本文报道有机锗化合物对正常小自鼠和 S_(180)肉瘤小白鼠肝脏微粒体的细胞色素 P-450、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(简称“UDP-GT”)及蛋白质含量的影响。将有机锗化合物按0.2mg/g 体重剂量给正常小白鼠灌胃6天或12天时,肝微粒体的细胞色素 P-450和蛋白质的含量减少,胚胎型 UDP-GT 即o-GT 的活力增高。S_(180)肉瘤小白鼠与正常小白鼠比较,其肝微粒体的细胞色素 P—450的含量减少,而蛋白质含量增高,但 UDP—GT 活力无著变。S_(180)肉瘤小白鼠经有机锗化合物治疗,肿块明显缩小后,肝微粒体的细胞色素 P—450和蛋白质含量恢复到正常水平。我们认为有机锗化合物的抗肿瘤效应可能是与降低细胞色素 P—450的含量,增进 UDP—GT 的结合解毒作用有关系.     

敌敌畏对肝脏细胞色素P450含量及活性水平的影响

目的 观察敌敌畏对小鼠肝脏组织的细胞色素P450（CYP450）含量和氨基比林-N-去甲基化酶活性水平影响，探讨CYP450在敌敌畏代谢中的作用。方法 雄性小鼠16只，随机分成诱导组和对照组，诱导组按10mg／kg腹腔注射敌敌畏，对照组注射生理盐水，每2d一次。14d后处死，分别测定肝脏组织的洲50含量、氨基比林-N-去甲基化酶活性水平，并测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性。结果 小鼠经过14d的敌敌畏诱导后，两组肝脏洲50的含量无统计学意义（P〉0．05）；氨基比林-N-去甲基化酶的活性水平在敌敌畏诱导组明显高于对照组（P〈0．05），两组肝脏的ALT无显著统计学意义（P〉0．05）。结论 低剂量的敌敌畏不引起肝脏功能的损害，肝脏CYP450虽然没有直接参与敌敌畏的代谢且不影响CYP450含量，但氨基比林-N-去甲基化酶活性水平的增加提示部分CYP450参与敌敌畏的中间代谢产物代谢。     

探针药物法评价丁苯酞对大鼠体内CYP2C19酶活性的影响

目的研究丁苯酞对大鼠体内细胞色素P450酶2C19（cytochrome P450 enzyme 2C19,CYP2C19）活性的影响。方法Wistar大鼠随机分为4组,每组8只。对照组灌胃给予植物油;实验组分为低、中、高3个剂量组,分别灌胃给予丁苯酞40、80、160rag／kg（以植物油溶解）。对照组和实验组均连续灌胃5d,于第6天尾静脉注射探针药物奥美拉唑（4mg／kg）后由眼底静脉丛取血,血浆样品经二氯甲烷提取,以卡马西平为内标,采用高效液相色谱法测定奥美拉唑血药浓度。以DAS2．1．1药物动力学程序拟合药动学参数。结果对照组与实验组比较,奥美拉唑药动学参数AUC（0-t）、AUC（0-∞）、t1／2、CLz、Vz差异无统计学意义（P〉0．05）。结论丁苯酞对大鼠体内CYP2C19酶活性无影响。     

CTPTD对大鼠肝细胞色素P－450的诱导作用

本研究用诊断性底物和针对Ｐ－４５０的多克隆抗体测定不同剂量ＣＴＰＴＤ对大鼠肝细胞色素Ｐ－４５０的影响。结果表明：①ＣＴＰＴＤ以剂量依赖性方式诱导肝细胞Ｐ－４５０总量；②高剂量可使本研究测定的单加氧酶活力增加；③ＣＴＰＴＤ主要诱导ｐ－４５０ＩＩＢ和Ｐ－４５０ＩＩＩＡ，并由这两个亚型代谢；④Ｐ－４５０ＩＡ和ＩＩＥ１在ＣＴＰＴＤ代谢中的作用需进一步确定。     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

姜黄和乙醇对染苯小鼠CYP2E1活性及血液学毒性的影响

目的 观察染苯小鼠CYP2E1活性改变及血液学毒性的影响,继之研究乙醇、姜黄对苯毒性的干预作用.方法 昆明种小鼠80只,每组20只,随机分为4组,A组为生理盐水对照组,B组为单纯染苯组(苯中毒模型),即皮下注射苯制剂2 ml/kg;C组为乙醇干预组,即在B组处理的基础上,自由饮用10%乙醇;D组为姜黄干预组,即在给苯前,腹腔注射姜黄提取液.结果 (1)B组与A组比较,外周血及骨髓红细胞微核率上升出现高峰,同时外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)等指标明显低[(2.6±1.0)×109/L、(93±11)g/L、(593±81)×109/L],达到了苯中毒模型的标准.(2)C组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT等指标均低(均P<0.05);CYP2E1活性上升显著;骨髓嗜多染红细胞微核率高于B组,且差异有统计学意义[(8.8±1.8)‰比(6.5±1.0)‰,P<0.01].(3)D组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT数值均高(均P<0.01),但未达到正常水平;CYP2E1活性低于B组(P<0.01).结论 (1)对照比较CYP2E1活性改变后,染苯小鼠血液学毒性发生了变化;(2)乙醇诱导了CYP2E1活性,从而在体内增加了苯的血液学毒性;(3)姜黄在体内降低CYP2E1活性,一定程度上减轻了苯的血液学毒性.姜黄作为一种中药在防治苯中毒、抗炎、抗氧化、护肝及护胃等方面有着广泛的生物活性.     

五味子多糖药理作用的初步观察

五味子多糖１００ｍｇ／ｋｇ及２００ｍｇ／ｋｇ单次腹腔注射或每日腹腔注射一次连续给药５日对小鼠肝糖原的合成均无影响，但能使１．０ｍｇ／ｋｇ／ｄ×５ｄ阿托品增加小鼠肝糖原合成的作用减弱甚至消失，此外五味子多糖对ＣＣｌ＿４损伤小鼠肝脏所致的ＳＧＰＴ水平也无影响．这些结果提示，五味子多糖可能不是五味子制剂保肝作用的主要有效成份。五味子多糖防止或拮抗适量阿托品增加肝糖原合成的作用及其机制值得进一步研究。