人膀胱癌耐药细胞系BIU-87/A、BIU-87/V的建立及耐药分析

为研究人膀胱癌细胞株耐药机制,应用阿霉素（ＡＤＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）低浓度持续递增法,在体外持续培养１０个月,逐步诱导人膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７,获得具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞。通过检测抗癌药物５０％抑制率剂量,ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞分别对ＡＤＭ、ＶＰ－１６的耐药程度较亲本细胞提高５７．４２倍、５．４４倍。两种耐药株显示了相似的耐药谱,均对ＡＤＭ、ＶＰ－１６、长春新碱和阿糖胞苷等药物产生耐药性,且随着培养时间延长,耐药性增强,但对丝裂霉素Ｃ、噻替哌和顺铂仍保持敏感性。结果表明ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型,为不同药物诱导人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂提供理想模型。     

环孢素A逆转人膀胱癌耐阿霉素细胞亚株BIU—87／ADM效应的研究

ＢＩＵ－８７敏感细胞和ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞用环包素和柔红霉素处理后，采用３－（４，５）－双甲基－２０噻唑－（２，５）－二苯基溴化四氮唑蓝（ＭＴＴ）法评价细胞毒作用，荧光分光光度计检测细胞内ＤＮＲ聚集量。结果发现，ＣｓＡ能显著性增加ＤＮＲ对ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的细胞毒作用，逆转倍数为７．１倍，而对ＢＩＵ－８７敏感细胞的细胞毒作用增加不明显；ＣｓＡ与ＤＮＲ共同孵育２．５ｈ后能显著增加ＢＩＵ－８７／     

人膀胱癌BIU-87/ADM细胞中Bcl-2基因的原位表达

目的：探讨人膀胱癌多药耐药机制。方法：应用原位杂交和免疫细胞化学技术,分别对人膀胱癌耐药细胞株（ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ）及敏感细胞株（ＢＩＵ－８７）中Ｂｃｌ－２基因及其产物的表达进行研究。结果：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞Ｂｃｌ－２基因表达呈强阳性（＋＋）,ＢＩＵ－８７细胞呈弱阳性（＋）。结论：凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在人膀胱癌多药耐药细胞中的高表达,与人膀胱多药耐药的产生有关。     

反义N—ras1DNA片段部分抑制人膀胱癌BIU—87细胞VEGF基因的表达

本文报道将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以部分抑制ＢＩＵ－８７细胞中ＶＥＧＦｍＲ－ＮＡ的表达。提示ＶＥＧＦ基因的表达可受到反义Ｎ－ｒａｓ１ＤＮＡ片段的调控。本研究不仅增加了从分子水平对ＢＩＵ－８７细胞的认识，有助于进一步确定该细胞的生物学特征，还为以后具有Ｎ－ｒａｓ癌基因及ＶＥＧＦ基因表达的膀胱癌进行反义癌基因治疗提供一定的理论和实验依据。     

阿霉素诱导人膀胱癌多重抗药性细胞凋亡的研究

目的：研究阿霉素诱导的细胞凋亡，探讨人膀胱癌多重抗药性机制。方法：用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、光镜及电镜、ＤＮＡ凝胶电泳和原位ＤＮＡ末端转移酶标记法，分别对耐药细胞株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及敏感细胞株ＢＩＵ－８７细胞进行了阿霉素诱导的细胞凋亡研究。结果：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞存活率明显高于ＢＩＵ－８７细胞，光镜及电镜观察到凋亡细胞形态学改变，凋亡细胞ＤＮＡ凝胶电泳出现ＤＮＡ断片，但并无典型的梯形改变，Ｂ     

人大肠癌多药耐药细胞LoVo／5—FU的建立及其生物学特性的初步研究

目的 建立人大肠癌ＬｏＶｏ细胞多药耐药细胞株ＬｏＶｏ／５－ＦＵ,并探讨其生物学特性及耐药机制。方法 人大肠癌细胞系ＬｏＶｏ在体外经２．５ｕｇ／ｍｌ５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）作用,成功诱导ＬｏＶｏ／５－ＦＵ耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对５－ＦＵ、丝裂酶素（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＤＭ）、顺铂（ＤＤＰ）、氨甲喋呤（ＭＴＸ）和阿糖胞苷（ＡｒａＣ）等６种药物的敏感性。用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、光镜及扫描电镜观察两种细胞形态及结构并绘制出细胞体外生长曲线。免疫组化ＬＳＡＢ法检测细胞中Ｐ２６－Ｂｃｌ－２的表达。应用原位ＤＮＡ末端转移酶标记法检测５－ＦＵ在两种细胞中诱导的细胞凋亡。结果 ＬｏＶｏ／５－ＦＵ细胞株对５－ＦＵ、ＭＭＣ和ＡＤＭ均有耐药性,且对５－ＦＵ的耐药程度较亲本细胞提高。与亲本细胞相比,耐药细胞株生长慢,倍增期延     

人膀胱癌细胞多药耐药机理的研究

目前,有关细胞凋亡与膀胱癌多药耐药的研究乏见报道。我们试图从细胞凋亡的角度探讨人膀胱癌细胞药多耐药的发生机制。一、材料和方法１材料：（１）细胞株及细胞培养：人膀胱癌ＢＩＵ８７细胞株引自北京医科大学泌尿外科研究所。耐药细胞株ＢＩＵ８７／ＡＤＭ由我...     

人大肠癌多药耐药细胞LoVo/5-FU的建立及其生物学特性的初步研究

目的建立人大肠癌ＬｏＶｏ细胞多药耐药细胞株ＬｏＶｏ／５－ＦＵ,并探讨其生物学特性及耐药机制。方法人大肠癌细 胞系 ＬｏＶｏ在体外经 ２．５μｇ／ｍｌ５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）作用,成功诱导 ＬｏＶｏ／５－ＦＵ耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它 们对５－ＦＵ、丝裂酶素（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＤＭ）、顺铂（ＤＤＰ）、氨甲喋呤（ＭＴＸ）和阿糖胞苷（ＡｒａＣ）等６种药物的敏感性。 用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、光镜及扫描电镜观察两种细胞形态及结构并绘制出细胞体外生长曲线。免疫组化ＬＳＡＢ法检测细 胞中Ｐ２６－Ｂｃｌ－２的表达。应用原位ＤＮＡ末端转移酶标记法检测５－ＦＵ在两种细胞中诱导的细胞凋亡。结果ＬｏＶｏ／５－ＦＵ 细胞株对５－ＦＵ、ＭＭＣ和ＡＤＭ均有耐药性,且对５－ＦＵ的耐药程度较亲本细胞提高。与亲本细胞相比,耐药细胞株生长 慢,倍增期延长,汇合密度低,异型性明显。免疫组化ＬＳＡＢ法提示,ＬｏＶｏ／５－ＦＵ细胞的凋亡与Ｐ２６－Ｂｃｌ－２过度表达有 关。ＬｏＶｏ细胞原位ＤＮＡ末端转移酶标记阳性率高于ＬｏＶｏ／５－ＦＵ。结论ＬｏＶｏ／５－ＦＵ多药耐药细胞株耐药性稳定,在相 同条件下与敏感细胞株ＬｏＶｏ相比,细胞凋亡受到抑制,提示ＬｏＶｏ／     

联合化疗对膀胱癌细胞株BIU—87毒性作用的体外实验研究

实验采用微量细胞培养噻唑蓝显色法观察丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＤＭ）、羟基喜树碱（ＨＣＰＴ）和噻替派（ＴＳＰＡ）等药物联合应用对膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７的毒性作用。结果显示ＨＣＰＴ与ＭＭＣ、ＡＤＭ联合应用能取得较好疗效。连续用药组预期５０％抑制率剂量（ＩＤ５０）与实测ＩＤ５０的比值分别为１３．５９、１１．２６；序贯用药组先用ＨＣＰＴ，后用ＭＭＣ、ＡＤＭ、ＴＳＰＡ等药物，抑制率明显大于相同剂量     

同一膀胱癌的三个亚细胞株和BIU—87膀胱癌细胞株的化疗药物敏 …

用未经化疗的同一膀胱癌手术标本建立的三株膀胱癌细胞株９ＢＬＺ２１１,ＢＬＳＷ２１１,ＢＬＸ２１１）和人膀胱移行细胞癌细胞株ＢＩＵ－８７进行了氟尿啶（５－Ｆｕ）,顺氯氨铂（ＣＤＤＰ）,和长春新碱（ＶＣＲ）的敏感性试验。结果表明：四株膀胱癌细胞株对这三种化疗药物的敏感性存在差异。当药物浓度分别为其临床用量的计算值时,ＢＬＺ２２１细胞株对５－Ｆｕ高度敏感,与其它三株细胞的敏感性存在显著差异;四株细胞对Ｂ     

P16基因对膀胱癌细胞系BIU—87恶性生长抑制作用的研究

为了探讨Ｐ１６基因在人膀胱癌中的肿瘤抑制作用及其在膀胱癌抑癌基因替代治疗中的在价值。构建了Ｐ１６基因表达载体并将其导入有内源性Ｐ１６基因缺失的人膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７中,观察转染细胞的生长速率,双层软琼脂集落试验及细胞周期的改变,发现转染了Ｐ１６的细胞生长速率明显降低,     

维拉帕米联用阿霉素,长春新碱,足叶己甙体外净化白血病细胞

采用体外克隆形成培养技术研究维拉帕米（ＶＰＬ）联用阿霉素（ＡＤＭ），长春新碱（ＶＣＲ）和足叶己甙（ＶＰ－１６）体外净化白血病细胞，结果显示，ＶＰＬ２．２μｍｏｌ／Ｌ能明显增加单一应用的不同浓度ＡＤＭ，ＶＣＲ或ＶＰ－１６对白血病细胞克隆形成单位（Ｌ－ＣＦＵ）的抑制作用，而不增加其对正常粒巨系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）的毒性，０．９２μｍｏｌ／ＬＡＤＭ，０．０２５０μｍｏｌ／ＬＶＣＲ及１．７０μｍｏ     

SMU1对正常人体外PBMNC功能效应的影响

目的：研究ＳＭＵ１（自制抗ＣＤ３）对正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）的体外功能效应,方法：（地）以ＳＭＵ１６种不同浓度、ＩＬ－２、ＭＣＤ３（丝裂性抗ＣＤ３）孵育ＰＢＭＮＣ,观察细胞密度和形态变化,ＭＴＴ法测定细胞增殖力;（２）分别用ＳＭＵ１０．５ｍｇ／Ｌｆ、５ｍｇ／Ｌ、ＩＬ－２２００ｋＵ／Ｌ培养ＰＢＭＮＣ３ｄ,ＥＬＩＳＡ法测定上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α及Ｇ－ＣＳＦ水平。结     

异环磷酰胺联合化疗方案治疗晚期恶性肿瘤62例临床观察

目的：观察异环磷酰胺（ＩＦＯ）联合化疗对晚期恶性肿瘤的疗效。方法：６２例晚期恶性肿瘤中,肺癌３５例用ＩＦＯ＋ＤＤＰ或（ＣＢＰ）方案,恶性淋巴瘤１３例用ＩＦＯ＋ＭＴＸ＋ＶＰ－１６方案;乳腺癌６例用ＩＦＯ＋ＤＤＰ＋ＡＤＭ或ＩＦＯ＋ＤＤＰ＋ＶＰ＋１６方案;食道癌４例用ＩＦＯ＋５－ＦＵ＋ＤＤＰ或（ＣＢＰ）方案;卵巢癌、软组织肉瘤４例用ＩＦＯ＋ＡＤＭ＋ＤＤＰ或（ＣＢＰ）方案,静脉化疗。结果：总有效率５６．５     

维拉帕米联用阿霉素、长春新碱、足叶己甙体外净化白血病细胞

采用体外克隆形成培养技术研究维拉帕米（ＶＰＬ）联用阿霉素（ＡＤＭ）、长春新碱（ＶＣＲ）和足叶己甙（ＶＰ－１６）体外净化白血病细胞，结果显示：ＶＰＬ２．２μｍｏｌ／Ｌ能明显增加单一应用的不同浓度ＡＤＭ、ＶＣＲ或ＶＰ－１６对白血病细胞克隆形成单位（Ｌ－ＣＦＵ）的抑制作用，而不增加其对正常粒巨系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）的毒性。０．９２μｍｏｌ／ＬＡＤＭ、０．０２５０μｍｏｌ／ＬＶＣＲ及１．７０μｍｏｌ／ＬＶＰ－１６联合应用下，Ｌ－ＣＦＵ集落存活率为１１．６１％％，再联用２．２０μｍｏｌ／ＬＶＰＬ则为３．５２％；而相同条件下ＧＭ－ＣＦＵ集落存活率分别为３５．８１％及２６．０５％（与相应Ｌ－ＣＦＵ组相比，Ｐ＜０．０１），提示ＶＰＬ能明显增加上述化疗药物联合应用下的选择性体外净化白血病细胞作用。     

三种细胞因子对恶性肿瘤多药耐受影响的实验研究

通过体外转染多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）基因和化疗药物ＶＰ－１６、５－Ｆｕ诱导的方法分别建立了膀胱癌多药耐受（ＭＤＲ）细胞亚系ＥＪ／ＭＲＰ和鼻咽癌ＭＤＲ亚系ＬＣＥ／ＶＰ、ＣＬＥ／Ｆｕ,并观察了细胞因子ｒｈＧ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α１ｂ和ＩＬ－２对这些亚系ＭＤＲ水平的影响。结果发现ＩＦＮα１ｂ和ＩＬ－２可以一定程度地逆转３种ＭＤＲ细胞对ＶＰ－１６需受程度,逆转倍数在３．４与５．２之间,可以增加柔红霉素Ｄａ     

卵巢癌细胞株耐药谱的体外实验研究

用卵巢癌细胞系Ａ２７８０在体外分别与化疗药物长春新碱（ＶＣＲ）、顺铂（ＤＤＰ）和阿霉素（ＡＤＭ）作用，获得Ａ２７８０／ＶＣＲ，Ａ２７８０／ＤＤＰ和Ａ２７８０／ＡＤＭ３个耐药细胞亚株，通过体外细胞毒性实验（ＭＴＴ法），观察Ａ２７８０与药物作用后的耐受情况及耐药细胞株对１０种化疗药物的敏感性。结果：三株细胞对ＶＣＲ、ＤＤＰ和ＡＤＭ均有耐药，对１０种作用机制不同的化疗药的耐药指数相差很大。提示：三株卵巢     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

Th1／Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况,以测定Ｔｈ０／ＴＨ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ、、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ,ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下,采用工细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果 正常对照组,２．３％～     

明胶—阿霉素抗癌缓释剂对膀胱肿瘤细胞株BIU—87的生长抑制研究

应用含２０ｍｌ小牛血清的完全培养基浸泡明胶－阿霉素抗部缓释剂，每隔２４ｈ重复更换培养基，而后将第ｄ浸泡所得的培养基与ＢＩＵ－８７细胞混合培养。结果表明，直至第２１９ｄ经抗癌缓释剂浸泡过的培养基仍对ＢＩＵ－８７细胞具有生长抑制作用，其中第１ｄＢＩＵ－８７细胞生长率仅为１０％，第５ｄＢＩＵ－８７细胞生长率为６０％，第１９ｄＢＩＵ－８７细胞生长率仍低于８０％。这为明胶－阿霉素抗癌缓释剂应用于临床治疗膀胱