NGF参与支气管哮喘大鼠气道炎症的发生及作用机制

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响及作用机制.方法 24只雄性SD大鼠分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)和抗NGF组(C组),每组8只.测定各组支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总细胞及细胞分类计数;HE染色观察气道病理改变;RT-PCR和ELISA法检测各组大鼠白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、NGF mRNA和蛋白表达水平.结果 B组与A组比较,BALF中细胞总数及细胞分类计数增多(P＜0.05);IL-4、NGF mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01);而IFN-γ mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).C组与B组比较,BALF中细胞总数及细胞分类计数减少(P＜0.05);IL-4、NGF mRNA和蛋白表达减弱(P＜0.01);而IFN-γ mRNA和蛋白表达水平无显著差异.B组BALF中NGF含量与细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞呈正相关(r=0.833、0.944、0.949,P＜0.05);与IL-4含量呈正相关(r=0.944,P＜0.01),与IFN-γ含量不相关(r=0.122,P＞0.05);与肺组织中IL-4 mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P＜0.05),与IFN-γ mRNA表达不相关(r=0.611,P＞0.05).结论 NGF与哮喘大鼠气道炎症密切相关,它可以通过使Th2型细胞因子分泌亢进参与哮喘的发生.     

地塞米松对急性过敏性哮喘小鼠肺AQP5表达的影响

目的 观察水通道蛋白5(AQP5)在急性过敏性哮喘小鼠肺组织的改变,以及地塞米松对其的影响,初步探讨AQP5在哮喘发病机制中的作用.方法 建立急性过敏性哮喘小鼠模型,并随机分为急性哮喘组、对照组和地塞米松治疗组,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中自细胞总数及分类计数、ELISA法测定IL-5和IFN-γ水平,RT-PCR和免疫组化法检测AQP5在肺组织的表达以及观察肺组织形态学的改变.结果 (1)哮喘组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均高于对照组(P＜0.01),IFN-γ水平低于对照组(P＜0.01),治疗后白细胞总数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平均明显下降(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),IFN-γ水平明显上升(P＜0.01);(2)哮喘组AQP5 mRNA水平明显高于对照组(P＜0.01),治疗后表达明显下降(P＜0.01);(3)哮喘组肺组织可见较弥漫的炎性改变,黏液分泌增多,血管壁水肿明显,血管周围有大量的炎症细胞渗出物,治疗组形态学改变明显减轻:AQP5表达于正常对照组的肺泡上皮细胞、呼吸道的表层柱状上皮细胞和黏膜下腺腺泡细胞的顶膜,哮喘组表达呈强阳性,地塞米松治疗后表达明显减弱.结论 AQP5在急性哮喘小鼠肺组织内过度表达,可能与黏液高分泌有关,地塞米松可以下调AQP5的表达,可明显减轻小鼠肺部的炎性、水肿和黏液高分泌的病理生理表现.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内白细胞介素9和γ干扰素的表达

目的观察大鼠烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型白细胞介素9(IL-9)和γ干扰素(IFN-γ)的表达,探讨IL-9和IFN-γ与COPD气道炎症的关系。方法单纯熏香烟法建立大鼠COPD模型。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞总数和分类计数检测;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清、BALF和肺组织中IL-9及IFN-γ的浓度;肺组织切片行HE染色观察形态学改变;采用图像分析系统定量测定肺平均内衬间隔(Lm)、平均肺泡数(MAN)和支气管壁厚/外径比值。结果(1)COPD组Lm及支气管壁厚/外径高于正常对照组,MAN低于正常对照组,差异有统计学意义(P均<0.01)。(2)COPD组血清、BALF和肺组织中IL-9浓度较正常对照组显著增高[血清:(4.02±2.12)pg/mL比(1.12±0.73)pg/mL;BALF:(5.73±2.60)pg/mL比(0.97±0.45)pg/mL;肺组织:(24.92±6.65)pg/mL比(11.42±4.23)pg/mL;P均<0.01]。COPD组血清、肺组织和BALF中IFN-γ的浓度与正常对照组比较均降低,前两者差异有统计学意义[血清:(21.54±7.65)pg/mL比(69.59±13.68)pg/mL;肺组织:(21.88±6.11)pg/mL比(69.84±15.35)pg/mL;P均<0.05]。(3)与正常对照组比较,COPD组BALF中白细胞总数[(5.29±1.61)×108/L比(2.10±1.19)×108/L,P<0.01]、巨噬细胞绝对计数[(4.42±1.38)×108/L比(1.84±0.93)×108/L,P<0.01]、中性粒细胞绝对计数[(1.32±0.36)×108/L比(0.093±0.043)×108/L,P均<0.01]均显著增高。(4)COPD组BALF中白细胞总数、巨噬细胞绝对计数、中性粒细胞绝对计数与BALF中IL-9浓度均呈正相关(r分别为0.9290、.835和0.924,P均<0.05),与肺组织中IL-9浓度呈正相关(r分别为0.8850、.983和0.775,P均<0.05),与血清中IL-9浓度无明显相关性。血清及BALF中IL-9浓度与IFN-γ无明显相关性,肺组织中IL-9与肺组织中IFN-γ则呈负相关(r=-0.818,P<0.05)。结论吸烟可使IL-9升高,IFN-γ水平降低,可能是吸烟导致COPD的原因之一。气道局部的IL-9表达与COPD气道炎症密切相关,可作为COPD气道炎症的检测指标之一。     

柠檬醛亚微乳对哮喘大鼠的免疫调节作用

[目的]探讨柠檬醛亚微乳对哮喘大鼠的免疫调节作用及其作用机制。[方法]将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、柠檬醛亚微乳低、中、高剂量组。以卵白蛋白（OVA）致敏大鼠,2周后给予1%OVA雾化激发,在雾化激发前2h用柠檬醛亚微乳剂雾化给药,连续4周。末次雾化攻击24h后,计数肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数和嗜酸性粒细胞（Eosinophil,EOS）数量,测定BALF中IL-4和IFN-γ的含量,并检测肺组织病理改变情况。[结果]与空白组比较,模型组EOS和IL-4显著升高（P＜0.01）,而IFN-γ显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,阳性组能显著降低EOS数量和IL-4含量（P＜0.01）,升高IFN-γ的含量（P＜0.01）,柠檬醛高剂量组EOS数量和IL-4含量显著降低（P＜0.01）,而IFN-γ的含量则明显升高（P＜0.05）。[结论]EOS及细胞因子IL-4和IFN-γ参与哮喘发病过程,柠檬醛亚微乳可通过降低BALF中EOS的数量和IL-4的含量,升高IFN-γ的含量,从而减轻哮喘大鼠的气道炎症。     

吸入前列腺素E1对脂多糖所致大鼠急性肺损伤模型Th1/Th2的影响

目的 探讨雾化吸入前列腺素E1(PGE1)对脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)模型Th1/Th2的影响.方法 尾静脉注射LPS复制大鼠ALI模型,PGE1雾化入宽大玻璃瓶内让大鼠自由吸入,用ELISA法检测大鼠外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的水平及IFN-γ/IL-4比值.结果 LPS组外周血及BALF中IFN-γ/IL-4比值较生理盐水对照组(NS组)显著升高(P＜0.01),PGE1组外周血IFN-γ/IL-4(Th1/Th2)比值在6、12及24 h时间点显著低于LPS组(P＜0.01),而BALF中各时间点IFN-γ/IL-4(Th1/Th2)比值显著低于LPS组(P＜0.01).结论 雾化吸入PGE1可使LPS所致大鼠ALI失衡的Th1/Th2趋于平衡,减轻LPS所致大鼠ALI.     

γ干扰素对实验性肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化的影响

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)在博莱霉素诱导的实验性大鼠肺纤维化治疗中的作用及其机制。方法雄性健康Wistar大鼠80只,随机分为正常对照组、实验模型组、氢化可的松组及IFN-γ组,在给予实验药物后第3、7、14及28 d,每组取5只大鼠麻醉后处死,左肺行支气管肺泡灌洗术收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定其IFN-γ及转化生长因子β1(TGF-β1)浓度;取右肺中叶行石蜡包埋,观察肺泡炎及肺纤维化程度,测定肺组织羟脯氨酸含量。结果BALF中IFN-γ浓度在实验模型组于第3和7 d明显增高(P均<0.05),在IFN-γ组第3、7、14及28 d均较实验模型组明显增高(P均<0.05),并于第3、7及14 d高于氢化可的松组(P均<0.05);BALF中TGF-β1浓度在实验模型组第3、71、4及28 d均较正常对照组明显增高(P均<0.001),在IFN-γ组于第3 d明显高于实验模型组,但于第71、4及28 d与实验模型组相似(P>0.05),于第3、7及14 d明显高于氢化可的松组(P均<0.01)。IFN-γ组肺泡炎、肺组织纤维化评分及羟脯氨酸含量均与实验模型组相近。结论早期应用IFN-γ肺组织IFN-γ含量增加,但并不能抑制肺组织TGF-β1和羟脯氨酸的产生,也不能预防和阻止实验性大鼠肺泡炎和肺纤维化的形成。     

孟鲁司特和地塞米松对哮喘炎症的作用

目的 探讨孟鲁司特(MK)和地塞米松(Dex)对哮喘炎症的影响.方法 建立哮喘动物模型,并分别给予MK和Dex治疗.检测肺泡灌洗液(BALF)和肺组织病理学改变;采用原位杂交法检测肺和骨髓细胞IL-5mRNA的表达;免疫组化法检测骨髓IL-5免疫反应阳性细胞;流式细胞仪检测骨髓CD34+和CD3+细胞.结果 MK和Dex治疗组BALF细胞总数、嗜酸粒细胞数均较哮喘组减少(P＜0.01),并且两治疗组比较也有显著性差异(P＜0.05);病理结果显示,哮喘组肺组织气道痉挛、炎性细胞浸润明显,两治疗组肺组织炎症明显改善.MK组和Dex组肺组织和骨髓细胞IL-5mRNA表达显著低于哮喘组(P＜0.05,P＜0.01),两治疗组比较有显著性差异(P＜0.05);两治疗组骨髓IL-5免疫反应细胞和CD34+、CD3+细胞亦较哮喘组显著减少(P＜0.01,P＜0.05),但两治疗组比较无统计学差异(P＞0.05).结论 MK和Dex均可显著抑制气道炎症和肺、骨髓细胞表达IL-5 mRNA,尽管MK某些方面逊色于Dex,但提示皮质激素与白三烯受体拮抗剂的联合应用可能是治疗哮喘的新方向.     

松果腺切除对大鼠肺免疫功能的影响

目的:研究切除大鼠松果腺对肺免疫功能的影响,以探讨松果腺对肺免疫功能的调节作用。方法:采用大鼠松果腺切除术造模,测定大鼠肺泡灌洗液(BALF)中γ干扰素(IFN-γ)、IL-6的含量及肺组织中褪黑素(MT)的含量。结果:松果腺切除组大鼠肺组织MT较正常组显著升高(P<0.01),伪手术组和松果腺切除组大鼠BALF中IFN-γ含量均较正常组明显升高(P<0.05),IL-6变化则不甚明显。通过相关分析,发现正常组BALF中IL-6与IFN-γ成明显负相关,其他指标间无明显相关性;松果腺切除后,3组间各项指标无明显相关性。结论:通过实验证实,褪黑素是一种应激激素,松果腺是通过整体动态的方式改变了IL-6与IFN-γ之间正常的相关性从而影响肺免疫功能。     

补肺健脾方对哮喘大鼠血、肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ及嗜酸性粒细胞计数的影响

目的观察补肺健脾方对哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中干扰素γ(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、嗜酸性粒细胞(EOS)含量的影响。方法以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠哮喘模型,补肺健脾方组从首次激发开始给药治疗,治疗3周后处死大鼠,观察各组大鼠血清及BALF中IFN-γ、IL-4、EOS计数的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠血清及BALF中IL-4含量明显增加(P0.01),IFN-γ含量明显降低(P0.01),外周血及BALF中EOS明显增加(P0.01),IFN-γ含量增加(P0.05,P0.01),外周血及BALF中EOS明显降低(P0.01)。结论补肺健脾方可能是通过调节Th1/Th2细胞因子之间的平衡,抑制EOS的趋化,达到治疗哮喘的目的。     

Th2细胞因子调节哮喘炎症细胞转运机制的研究

目的探讨Th2细胞因子IL-5、IL-13调节哮喘炎症过程中肺和骨髓之间的细胞转运机制.方法建立哮喘动物模型,获取肺泡灌洗液,检测IL-5、IFN-γ浓度并进行病理分析;应用原位杂交技术检测肺组织IL-5、IL-13 mRNA表达和骨髓IL-5mRNA表达;免疫组化法观察肺、骨髓IL-5免疫反应细胞;流式细胞仪检测骨髓CD34、CD3阳性细胞.结果哮喘组肺泡灌洗液IL-5浓度明显高于对照组(P＜0.001);哮喘组肺组织病理改变显示小气道痉挛,管壁周围炎性细胞浸润,以嗜酸粒细胞、淋巴细胞为主;哮喘组肺组织IL-5、IL-13 mRNA表达较对照组显著增加(P＜0.01);哮喘组骨髓IL-5 mRNA阳性细胞明显增加(P＜0.001),与肺组织IL-5 mRNA表达的增高密切相关(P＜0.05);此外,哮喘组肺组织和骨髓IL-5免疫反应细胞显著增加(P＜0.01),骨髓CD34、CD3细胞均显著增高(P＜0.01),并且CD34增高与骨髓细胞表达IL-5 mRNA密切相关(P＜0.05).结论IL-5可能在转录和转录后水平均参与调节骨髓嗜酸粒细胞的功能和炎症细胞在肺和骨髓之间的转运.