胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系

目的研究人胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系。方法采用实时定量荧光PCR分析不同胃黏膜细胞POT1 mRNA的表达,采用TRAP-ELISA半定量分析不同细胞端粒酶活性。结果与癌旁正常黏膜相比,晚期胃癌癌组织POT1 mRNA增高,中重度不典型增生胃黏膜与其正常胃黏膜比较其POT1 mRNA表达也明显增高,肠上皮化生胃黏膜及其正常胃黏膜POT1 mRNA表达无明显差异。晚期胃癌及中重度不典型增生胃黏膜上皮中端粒酶活性明显高于肠上皮化生组织和正常胃黏膜上皮,但是胃癌和中重度不典型增生及肠上皮化生组织和正常胃黏膜间端粒酶活性无明显变化。结论尽管胃癌细胞和中重度不典型增生端粒酶活性高于正常和肠上皮化生胃黏膜细胞,但是POT1 mRNA的表达与之无关。     

阿司匹林对AD大鼠端粒长度、端粒酶逆转录酶及端粒保护蛋白1基因表达的影响

目的研究端粒长度、端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒保护蛋白1(POT1)在阿尔茨海默病大鼠外周血中的表达情况。分析阿司匹林对AD大鼠模型的端粒长度、TERT和POT1基因表达的影响。方法将45只SD大鼠分为对照组、模型组和阿司匹林组,每组15只。对模型组及阿司匹林组的大鼠注射Aβ以构建阿尔茨海默病大鼠模型。建模后对照组、模型组和阿司匹林组分别给予生理盐水及阿司匹林灌胃。于灌胃后4周,测定各组大鼠的外周血白细胞端粒相对长度、TERT和POT1 m RNA的相对表达量及脑脊液中POT1蛋白表达情况。结果建模后1周,经morris水迷宫检测模型组和阿司匹林组各有10只大鼠建模成功;对照组、阿司匹林组和模型组大鼠相对端粒长度依次缩短(P0.05);对照组、模型组和阿司匹林组的POT1 m RNA表达量依次增高(P0.05);模型组和阿司匹林组TERT m RNA表达量均低于对照组(P0.05),但两组间的比较无显著差异(P0.05)。结论 AD大鼠可能由于端粒酶活性下降而导致端粒长度的缩短,阿司匹林或可通过上抬POT1的表达从而发挥保护端粒作用。     

TRF-1和Tankyrase 1 mRNA在口腔鳞癌细胞中的表达

目的研究端粒相关调控蛋白端锚聚合酶-1（Tankyrase 1）和端粒重复序列结合因子-1（TRF-1）在口腔颌面部鳞癌细胞中的表达，初步探讨Tankyrase 1对端粒酶活性调控的机制。方法应用组织总RNA抽提技术和实时定量PCR技术进行口腔颌面部肿瘤组织mRNA表达水平的检测，比较了人口腔颌面部鳞癌细胞、良性肿瘤细胞及正常口腔黏膜细胞中Tankyrase 1和TRF-1基因表达的差异及相关性。结果TRF-1 mRNA在口腔颌面部鳞癌细胞、良性肿瘤细胞中的平均表达量显著降低，与正常口腔黏膜细胞对照组相比，差异均具有极显著性意义（均P〈0．01），但鳞癌细胞组与良性肿瘤细胞组相比，差异无显著性意义（P〉0．05）；Tankyrase 1 mRNA的表达在鳞癌细胞组分别高于良性肿瘤细胞组和正常对照组，差异均有显著性意义（均P〈0．05），而良性肿瘤细胞组与正常对照组相比，差异无显著性意义（P〉0．05）。结论端粒酶活性正向调控因子Tankyrase 1以及逆向调控因子TRF-1在口腔颌面部鳞癌细胞中的表达异常，可能是引起口腔颌面部鳞癌细胞端粒酶活性增高的因素之一。     

丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度丁酸钠对BxPC-3细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞仪检测丁酸钠作用于BxPC-3细胞后的凋亡情况;TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR技术分析人端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA的表达水平。结果:丁酸钠作用BxPC-3细胞能明显抑制细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性。丁酸钠处理72 h的BxPC-3细胞凋亡率明显提高(P<0.01),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05)。经丁酸钠处理的实验组端粒酶活性为0.96±0.12,未经丁酸钠处理的对照组端粒酶活性为4.18±0.34,二者之间差异有显著性(P<0.05)。丁酸钠处理的实验组hTERT mRNA水平为0.168±0.045,与对照组0.685±0.141比较差异有统计学意义(P<0.01),bcl-2实验组水平为0.138±0.034,与对照组0.715±0.026比较有统计学差异。结论:丁酸钠具有强烈诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用,其发生机制与丁酸钠下调hTERT Bcl-2 mRNA表达水平直接相关。     

含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞端粒酶活性的影响

目的观察含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)超氧化物歧化酶(SOD)活性、c-myc mRNA表达及端粒活性的影响。方法采用含何首乌血清对2BS细胞株进行处理,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,RT-PCR检测c-myc mRNA表达,TRAP-ELISA检测端粒酶活性。结果与正常对照组相比,用药组2BS细胞SOD活性明显增加(P<0.05),c-myc mRNA表达无变化,端粒酶活性显著增加(P均<0.05)。结论含何首乌血清对2BS细胞具有抗衰老作用,其机理可能与促进自由基的清除和激活端粒酶活性有关。     

2型糖尿病大鼠胰岛组织中基质金属蛋白酶2的表达与活性研究

目的 观察2型糖尿病大鼠胰岛组织中基质金属蛋白酶2 (MMP2)的表达及活性变化.方法 SD大鼠随机分为对照组和糖尿病组.利用高热量饮食喂养结合小剂量链脲佐菌素( STZ,15 mg/kg)腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠模型.分别于造模后2周和6周时提取大鼠胰岛组织,采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测MMP2的mRNA和蛋白表达,以明胶酶谱分析MMP2活性.结果 两组大鼠胰岛组织中均存在MMP2的mRNA和蛋白表达,且糖尿病组显著高于对照组(P＜0.05);明胶酶谱分析结果显示:糖尿病组MMP2的酶活性显著高于对照组(P＜0.05).与造模后2周比较,糖尿病组造模后6周时MMP2的mRNA和蛋白表达及酶活性均较高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 糖尿病大鼠胰岛组织中MMP2基因表达上调且酶活性增强,可能与2型糖尿病大鼠胰岛B细胞功能受损有关.     

煤焦沥青诱发大鼠肺癌组织中端粒酶的表达

目的 :判断端粒酶活性在肺癌中的诊断价值。方法 :将Wistar大鼠随机分为实验组 17只和对照组 8只 ,实验组采用支气管灌注煤焦沥青法诱导大鼠肺癌 ,用改良的TRAP银染法测定大鼠肺癌及正常组织中的端粒酶活性。结果 :实验组诱发出肺癌 8例 ,鳞状上皮化生 1例 ,8例肺癌中有 7例为端粒酶阳性 (87.5 % ) ,鳞状上皮化生的1例也为端粒酶阳性 ,实验组其余 8例与对照组 8例端粒酶均为阴性。有癌组与对照组和无癌组相比差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :端粒酶较特异地表达于肺癌组织中 ,有望成为肺癌的诊断指标。     

低氧浓度改变对神经干细胞增殖分化及HIF-1α表达的影响

目的:探讨不同的低氧浓度下离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的增殖分化及HIF-1α的表达情况,以此分析HIF-1α对神经干细胞的增殖分化作用。方法:体外低氧条件下(3%O2和10%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的神经干细胞,实验组分为3%O2低氧1、3、5d组;10%O2低氧1、3、5d组,常氧为对照组。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞。RT-PCR检测实验组细胞HIF-1αmRNA的表达。结果:各低氧组NSCs内HIF-1αmRNA的表达量均明显高于对照组,且10%O2组与3%O2组相比,低氧5dHIF-1αmRNA的表达量显著增加;实验组NSE阳性神经元的比率均明显高于对照组,10%O2组与3%O2组相比,低氧5d10%O2组中NSE阳性神经元的比率明显增高。结论:低氧可促进NSCs增殖分化及HIF-1αmRNA的表达,且HIF-1αmRNA的表达量与低氧浓度及时间有关。     

端粒酶活性对T2DM大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察2型糖尿病（T2DM）大鼠血管平滑肌细胞端粒酶活性及其对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法应用高脂、高糖饮食以及腹腔注射小剂量链脲佐菌素的方法建立2型糖尿病大鼠模型,喂养1个月后检测大鼠血糖、血脂和血清胰岛素变化,收集胸主动脉平滑肌细胞,采用TRAP—ELISA法测量血管平滑肌细胞端粒酶活性,MTT法测定平滑肌细胞增殖程度。结果与对照组相比,2型糖尿病大鼠血糖、血脂和血清胰岛素均明显增高,血管平滑肌细胞端粒酶活性和平滑肌细胞增殖也增高（P〈0．05）,相关分析显示两者之间存在正相关关系（r=0．959,P〈0．01）。结论2型糖尿病大鼠血管平滑肌细胞端粒酶的活性明显增高,并与血管平滑肌细胞的增殖程度呈正相关,因此,端粒酶抑制剂有可能成为治疗2型糖尿病血管并发症的新途径。     

罗格列酮延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展

目的: 观察罗格列酮对糖尿病大鼠钙化血管的治疗作用及对骨转录因子Msx2表达的影响.方法: 在高脂饮食加小剂量链脲佐菌素腹腔注射处理的基础上,加用维生素D3和尼古丁处理,制备糖尿病合并血管钙化大鼠模型(糖尿病合并血管钙化组),给予部分糖尿病合并血管钙化组大鼠罗格列酮灌胃 (2 mg·kg-1,每天1次,共8周)处理(罗格列酮组),同时设立空白对照组.实验第21周末,处死各实验组大鼠,检测各组大鼠的代谢指标,进行血管 von Kossa染色,检测血管钙含量和碱性磷酸酶活性,应用real-time PCR方法检测 Msx2 mRNA 及蛋白免疫印迹方法检测 Msx2 蛋白在血管中的表达变化.结果: 与对照组相比,糖尿病合并血管钙化组大鼠血管内存在弥漫性的钙盐沉积,血管内钙含量增高,碱性磷酸酶活性增强,Msx2 mRNA和蛋白表达明显增高 (均P<0.05);而给予罗格列酮处理后,钙盐在血管内的沉积明显减少,钙含量和碱性磷酸酶活性分别下降8.37%、10.59%,Msx2 mRNA和蛋白表达也分别下降 36.73 %、 42.55 %(与糖尿病合并血管钙化组相比,均P<0.05).结论: 罗格列酮可以延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展,并可以减少钙化血管中Msx2的表达.     

2型糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞中Dickkopf-1蛋白的表达水平及其与成骨活性的关系

目的：检测2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)生长活性及成骨分化能力,以及Dickkopf-1(DKK-1)蛋白在BMSCs诱导成骨过程中的表达水平,探讨T2DM对 BMSCs成骨活性的影响及其与DKK-1表达的关系。方法：提取并分离T2DM造模大鼠BMSCs,进行体外培养与成骨诱 导,并将其分为T2DM组和正常对照组;采用细胞计数试剂盒检测BMSCs增殖活性;采用膜联蛋白V(annexin V)-异硫 氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/ 碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染法检测细胞凋亡率;采用碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测试剂盒检测BMSCs中ALP表达水平;采用茜素红染色与矿化结节定量法 分析BMSCs成骨分化程度;采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)法检测大鼠BMSCs中核心结合 因子a1(core binding factor alphal 1,Runx2)和DKK-1的表达。结果：T2DM组大鼠BMSCs增殖活性比正常对照组弱,细 胞凋亡增加(均P<0.01);BMSCs成骨诱导过程中,T2DM组大鼠ALP表达量比正常对照组显著降低,且钙结节形成减 少,Runx2表达下调(均P<0.01);T2DM组BMSCs中DKK-1蛋白和mRNA表达上调,高于正常对照组(均P<0.01);DKK-1 蛋白和mRNA表达与Runx2的表达升高有关(均P<0.01)。结论：T2DM造模大鼠BMSCs的生长活性及成骨分化潜能受 损,这可能与BMSCs中DKK-1表达升高有关。     

转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用

目的：探讨转录因子Sp1、Sp3对Jurkat T细胞端粒酶活性和粒酶逆转录酶（hTERT）的调节作用。方法：用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞，用Western blotting方法检测蛋白表达水平，用端粒酶PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度；用RT－PCR方法检测hTERT mRNA水平。结果：Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59．6％（P＜0．01）和36．8％（P＜0．05）；随着Sp1表达水平的增加，端粒酶活性和hTERT mRNA水平明显增加，增加率分别为38．5％（P＜0．05）和25．4％（P＜0．05）。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERT mRNA水平无明显影响。结论：转录因子Sp1通过调节hTERT mRNA转录水平而调节Jurkat T细胞端粒酶活性，Sp3无此作用。     

胃癌组织中端粒酶活性与基质金属蛋白酶-7表达的检测及其临床意义

目的:检测胃癌组织中的端粒酶活性和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的表达,并探讨其临床意义。方法:在49例胃癌组织(转移30例,未转移19例)和20例癌前病变组织中,采用RT-PCR法检测MMP-7 mRNA,TRAP法检测端粒酶活性。结果:49例胃癌组织中,MMP-7 mRNA及端粒酶阳性表达者分别为28例和32例,其中转移组表达分别为21例和20例;20例癌前病变组织中MMP-7、端粒酶表达分别为4例和8例。胃癌组联合检测均阳性表达者19例,均阴性者8例;癌前病变组联合检测均阳性者仅3例,均阴性者11例。而MMP-7 mRNA表达在性别、年龄间差异无统计学意义(P0.05);2组在病理分级中,Ⅰ、Ⅱ级的表达明显低于Ⅲ级(P0.01);侵及浆膜层者明显高于未侵及者(P0.01)。端粒酶在性别、年龄和病理分级以及是否侵及浆膜层间差异均无统计学意义(P0.05)。结论:MMP-7、端粒酶与胃癌的发生、发展可能有关,高表达者胃癌转移的风险可能较高。联合检测较单一指标的检测率高。     

高压氧对糖尿病大鼠认知功能 及NGF mRNA 表达的影响

目的 探讨高压氧疗法对2 型糖尿病（T2DM）大鼠认知功能及脑组织神经生长因子microRNA （NGF mRNA）表达的影响。方法 将48 只成年健康SD 大鼠按随机数字表法分为空白对照组（12 只）、 T2DM 模型组（36 只）。模型复制成功后,T2DM 模型组大鼠再次按随机数字表法分为非干预A 组（6 只）、 非干预B 组（12 只）,以及高压氧A 组（6 只）、高压氧B 组（12 只）。10 d 后采用Morris 水迷宫实验检测 非干预A 组、高压氧A 组认知功能,空白对照组、非干预B 组、高压氧B 组随机选取6 只大鼠脑组织检测 NGF mRNA。高压氧A、B 组于注射15 d 后开始高压氧干预,1 次/d,20 d 后各组再次分别检测认知功能 及NGF mRNA。结果 与非干预A 组比较,高压氧A 组逃避潜伏期缩短（P <0.05）,穿越虚拟平台次数增 多（P <0.05）;与非干预B 组比较,高压氧B 组脑组织NGF mRNA 表达水平升高（P <0.05）。结论 高压氧 治疗可显著改善T2DM 大鼠认知功能,提升脑组织NGF mRNA 表达水平,提示高压氧治疗可有效改善早期 T2DM 患者认知功能,其机制可能与高压氧增强脑组织NGF mRNA 表达有关。     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,RT-PCR检测各组瘤体中hTERT、Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组织化学检测各组瘤体中Bcl-2、Bax、p53、VEGF、端粒酶蛋白表达,Western blot检测各组瘤体中端粒酶蛋白表达情况.结果 T1组和T2组hTERT和Bcl-2 mRNA表达较肿瘤对照组和空载组明显降低,BaxmRNA表达明显升高（P〈0.01）.与肿瘤对照组和空载组比较,T1组和T2组Bcl-2 Telomerase、p53和VEGF蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0.01）.结论 （1）重组质粒T1和T2能够下调裸鼠移植瘤体内抗凋亡基因hTERT mRNA、Bcl-2 mRNA和蛋白、p53和端粒酶蛋白表达水平,上调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白表达水平,其抗胰腺癌作用可能与促进胰腺癌细胞凋亡有关.（2）重组质粒T1和T2能够显著下调裸鼠移植瘤体内VEGF蛋白表达水平,可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。     

人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义

目的：探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系，以及表达与端粒酶活性高低的相关性。方法：应用RT－PCR，DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况，用ELISA法检测端粒酶活性。结果：24例胰腺癌标本中hTERT mRNA表达阳性率为83．3％，而癌旁组织为8．3％，两者有显著性差异。hTERT mRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。hTR入TP1 mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异，与端粒酶活性的表达无相关性。结论：端粒酶参与了胰腺癌的发生；hTERT mRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用。     

鼻咽癌端粒酶各组分基因表达与端粒酶活性的关系

目的明确鼻咽癌组织端粒酶各组分(hTR、TP1、hTERT)基因表达及其与端粒酶活性关系.方法采用RT-PCR和PCR-ELISA方法分别检测同一标本,包括鼻咽癌(NPC)组织、慢性鼻咽炎(CINE)组织端粒酶各组分基因表达和端粒酶活性.结果(1)43例NPC组织中,38例(88%)可检测到hTERTmRNA表达;16例CINE组织中均未能检测到hTERTmRNA表达,hTETRmRNA在NPC组织中表达显著高于CINE组织中hTERTmRNA的表达(P<0.05).(2)43例NPC组织中,39例(90.7%)表达hTR,38例(88%)表达TP1mRNA;16例CINE组织中,14例(87.5%)分别表达hTR和TP1mRNA.hTR或TP1mRNA在NPC和CINE组织中表达比较差异无显著意义(P>0.05).(3)NPC组织端粒酶活性(86%)显著高于CINE组织端粒酶的活性(0%)(P<0.05).(4)hTERTmRNA表达与端粒酶活性显著相关(P<0.05);而hTR或TP1mRNA的表达与端粒酶活性无关(P>0.05).(5)端粒酶各组分基因表达均与NPC临床分期和有无颈淋巴结转移无关(P>0.05).结论hTR和TP1mRNA在NPC和CINE组织中均高阳性率表达,并与端粒酶活性无关,hTERTmRNA仅在NPC组织中表达,与端粒酶活性呈高度一致性,提示hTERT在端粒酶活性调节中可能起决定性作用,对hTERTmRNA检测可以作为NPC临床诊断指标之一.